Удельная активность зондов

Удельная активность зондов [c.306]

Тандемные повторы М13 локализуются в положениях 1700— 1900 и 2300—2500 фагового генома. Можно использовать эти данные и свойства фагового вектора для синтеза гибридизационного зонда с высокой удельной активностью (табл. 3). После [c.198]

Продолжайте 15-мин отмывки при 65 °С до прекращения изменения количества остающейся на фильтре радиоактивности. Для зондов с очень высокой удельной активностью практически невозможно отмыть фильтры до низкого уровня радиоактивности, и поэтому рекомендуются более короткие сроки [c.203]

В то же время, последовательности генов, присутствующие в клетках млекопитающих в виде одной копии, были достоверно локализованы в определенных участках генома только недавно. Этого удалось достигнуть благодаря использованию зондов с высокой удельной активностью и развитию методов усиления сигнала. [c.305]

Выявление клеточных транскриптов РНК методом гибридизации легко осуществимо и не требует использования зондов с высокой удельной активностью или усиления сигнала. Применяя пропись, представленную ниже, можно добиться успешной гибридизации. [c.309]

Момент мечения ДНК-зондов, очевидно, выбирают так, чтобы можно было использовать Р-нуклеотиды с наивысшей удельной активностью. Введение метки имеет много недостатков, в частности, ее радиоактивность может быть опасна для здоровья. Однако еще важнее, видимо, то, что время полураспада составляет всего 14 дней, поэтому зонды приходится метить заново каждые 1-2 недели. Использование нерадиоактивных меток в ДНК-зондах позволит преодолеть многие из этих недостатков и разработать диагностические наборы для определения нуклеотидной последовательности ДНК мутантных генов, вирусов, микроорганизмов и т.д. [c.75]

Эта формула предназначена для определения удельного объемного потока водорода - через единицу площади активного элемента зонда за единицу времени при номинальных значениях температуры и давления (60 °Ф = 16 °С и 14,7 фунт/дюйм = 1,03 кгс/см ). [c.40]

ДНК-полимераза I (или Pol I) Е. oli находит широкое применение в работе с рекомбинантными ДНК и при определении нуклеотидной последовательности ДНК. Одно из важнейших применений этого фермента связано с введением радиоактивной метки в ДНК in vitro с помошью так называемой ник-трансляции, направляемой ферментом за счет сопряженных полимеразной и 5 З -экзонуклеазной активностей. Этот процесс позволяет добиться необычайно высокого включения радиоактивной метки в ничтожные количества ДНК, т. е. получать препараты с гораздо более высокой удельной активностью (оцениваемой в импульсах в минуту на 1 мкг ДНК), чем при введении метки in vivo. Радиоактивные ДНК-зонды, полученные с помощью ник-транс- [c.113]

Можно использовать ник-транслированный или меченный олигонуклеотидами зонд [22, 23]. В наших опытах, используя последнюю процедуру, мы получали значение удельной активности от 1 до ЗxlO имп./мин/мкг. Когда работают с гибридизационной смесью, содержащей декстрансульфат, необходимо добавлять не более 2—4 нг зонда в 1 мл. Для калибровки размеров при гибридизации в смесь можно включить SxlO имп./мин/мкг % [32р].днк. Показано, что ЯДНК не гибридизуется с человеческой геномной ДНК- [c.81]

РНКазное расщепление и ДГГЭ можно использовать для непосредственного исследования фрагментов геномной ДНК, минуя стадию клонирования. Работая с равномерно меченными зондами, обладающими высокой удельной активностью (примерно 200—400 Ки/ммоль по одному из нуклеотидов), можно любым из этих методов получить желаемый результат, имея изначально 5—10 мкг геномной ДНК человека и проводя радиоавтографию 24 ч. Чем проще организм, тем выше чувствительность методов. Хотя получаемые результаты в большинстве своем можно оценить высоко, непосредственное использование суммарной геномной ДНК ставит перед исследователем ряд проблем. Это, во-первых, нередко низкое отношение сигнала к фону, особенно при РНКазном расщеплении. Во-вторых, активность равномерно меченных фосфором зондов должна быть настолько высокой, чтобы использовать их в течение дня или двух (и избежать таким образом высокого фона за счет радиоактивного распада). В-третьих, при проведении некоторых анализов, особенно в случае множественных тестов, лимитирующим фактором может стать количество геномной ДНК. Любой тест тем предпочтительнее, чем меньшее количество ДНК требует. [c.138]

Меченые нуклеотиды. Приобретите один из четырех нуклео-зидтрифосфатов (NTP), меченный фосфором в альфа-поло-жении с удельной активностью 400 Ки/ммоль. Мы рекомендуем меченый GTP и приводим методику получения зонда на основе именно этого нуклеотида. Можно одновременно использовать и еще один меченый NTP, изменив соответственно количество взятых в реакцию немеченых нуклеозид-трифосфатов. [c.146]

Б этом разделе описывается синтез РНК-зондов пзггем транскрипции in vitro клонированных ДНК, несущих фаговый промотор [37, 38]. Заметим, что удельная активность таких РНК-зондов ниже, чем полученных стандартным способом и традиционно используемых при тестировании геномных ДНК (10 Ки/ммоль на один меченый NTP). Такой активности достаточно для работы с одной десятой от общего количества ДНК, получаемой в ПЦР, или с очень небольшим объемом клонированной ДНК- Преимущество этих зондов состоит в том, что они сохраняют стабильность более 1 нед (а не 1—2 дня, как зонды с высокой удельной активностью). Кроме того, длинные зонды с выступающими концами легче синтезировать так как при этом нуклеозидтрифосфаты не лимитируют реакцию транскрипции. Если исследуется геномная ДНК и не проводится ПЦР, то следует использовать зонды с высокой удельной активностью (200—400 Ки/ммоль по одному из NTP). Важно, чтобы концентрация меченого NTP в начале транскрипции была не менее 10 мкМ, поэтому для синтеза высокоактивного зонда требуется 40—80 мкКи меченого NTP. [c.149]

При использовании в качестве предшественника одного из нуклеотидов, меченного можно получить зонды с удельной радиоактивностью 10 распад./мин на 1 мкг в системе с обратной транскриптазой или 3-10 распад./мин на 1 мкг в системе ник-трансляции. Эти удельные активности пропорционально увеличиваются при использовании двух или трех меченых предшественников, но, когда используются все четыре предшественника, меченные происходит снижение активности обратной транскриптазы и системы ник-трансляции. При ник-трансляции с использованием 1-дезоксицитидина (уд. активность выше 1500 Ки/моль Amersham или NEN) без носителя удается в настоящее время получить зонды с удельной активностью 10 распад./мин на 1 мкг и выше. [c.306]

Для гибридизации используют зонды, полученные с помощью ник-трансляции (Maniatis et al., 1982) (удельная активность 10 —10 имп/(мин-мкг), и ДНК-конкурент (см. ниже). ДНК денатурируют путем инкубации в кипящей водяной бане или в нагревательном блоке (95 °С) в течение 5 мин и последующего быстрого охлаждения в смеси воды и льда в течение 1—2 мин. 1 мл гибридизационного раствора содержит от 10 до 10 имп/мин. Одновременно можно пользоваться несколькими зондами, однако общая радиоактивность в растворе для гибридизации не должна превышать 10 ими/(мин-мл), чтобы не возникало проблем, связанных с высоким фоном. [c.28]

Для измерения в натурных условиях активности ионов водорода (4...10ед. pH), натрия (О...Зед. рМа),/хлора (О...Зед. рС1), редокс-по-тенциала (-700...О ед. ЕЬ), концентрации растворенного кислорода (0... 15 мг/л), удельной электрической проводимости (0... 10" См/см), мутности (0...250 мг/л), температуры (О...40 °С), глубины погружения измерительного зонда (0...15м). [c.67]

Для измерения активности ионо шдорода (0..Л4 ед pH), натрия (0...4 ед рКа), хлора (0...4ед.рС1),редокс-потенциала ЕЬ (-150...+700 мВ), концентрации растворенного кислорода (О...20 мг/л), удельной электрической проводимости (0,01. ..0,1 0,1. ..1 1... 10 См/см), мутности М (0. .50 О...500 мг/л), температуры (0...40°С), глубины погружения измерительного зонда Н (0...15 м). [c.68]

Измеритель сопротивления заземления ЭС0201. Предназначен для измерения сопротивления заземляющих устройств протяженностью по диагонали до 100 м. Измеритель применяют для измерения сопротивления заземляющих устройств, удельного сопротивления грунтов и активных сопротивлений. Принцип действия основан на компенсационном методе измерения с применением вспомогательного заземлителя и зонда для создания цепи тока в земле. [c.64]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология