Введение радиоактивной метки в нуклеиновые кислоты

Значительные методические трудности создаются при определении специфических продуктов гидролиза, образующихся из концевых групп полинуклеотидной цепи, в присутствии большого избытка продуктов, возникающих из центральных звеньев цепи. Это особенно существенно для нуклеиновых кислот с высоким значением молекулярного веса. Существенное повышение чувствительности определения концевых групп достигается введением радиоактивной метки. Для этой цели могут быть использованы химические или ферментативные методы. [c.46]

Этот И все другие методы идентификации одного или нескольких нуклеотидов из общего числа 3000—200 ООО (число нуклеотидов, составляющих молекулу вирусной нуклеиновой кислоты) требуют огромных количеств дорогостоящего материала. Но задачу можно значительно облегчить, если использовать метод введения радиоактивной метки в нуклеиновые кислоты или в модифицирующие их соединения. Например, выдерживая инфицированные растения в атмосфере можно получить вирусы растений и их РНК с удельной радиоактивностью 1000—5000 имп/мин на 1 мг. А при наличии такого образца можно обнаружить и идентифицировать концевое основание, имея всего лишь около 1 мг вирусной РНК. [c.98]

Определение строения. олигонуклеотидов. Во всех совр>еменных способах определения первичной структуры нуклеиновых кислот первостепенную роль играют методы введения радиоактивных меток а 5 - и З -концевые звенья. Чаще всего роль концевой метки играет фосфатная группа, содержащая но иногда в качестве метки используют также тритий ( Н) или нод ( 1). [c.316]

Щелочные фосфатазы бактерий (ВАР) и кишечника теленка ( IAP) катализируют удаление 5 -фосфатных групп ДНК или РНК, а также расщепление макроэргических связей рибо- и дез-оксирибонуклеозидтрифосфатов. Их используют при подготовке фрагментов нуклеиновых кислот к введению З -концевой радиоактивной метки З2р а также для предотвращения лигирования векторных молекул ДНК самих на себя. Как уже упоминалось выше, ДНК-лигаза способна образовывать фосфодиэфирные связи в одноцепочечных разрывах лишь при наличии в них 5 -концевого фосфата. Удаление 5 -концевых фосфатных групп молекул вектора, линеаризованных с помощью одной рестриктазы во время подготовки его для клонирования соответствующего фрагмента ДНК, предотвращает образование кольцевых молекул вектора (без вставки), а также его олигомеров во время лигирования с клонируемой последовательностью. Необходимые для лигирования со вставкой фосфатные группы содержатся в самих клонируемых фрагментах ДНК, а остающиеся в результате неполного лигирования два одноцепочечных разрыва репарируются in vivo после введения вектора со вставкой в бактериальные клетки. Гены секретируемых щелочных фосфатаз находят применение и в качестве высокочувствительных генов-репортеров при исследовании функционирования регуляторных элементов различных генов в прокариотических и дрожжевых системах экспрессии, а также в клетках млекопитающих [91]. [c.65]

Исследование клеточного метаболизма с помощью радиоактивных предшественников белков и нуклеиновых кислот удобно осуществлять на культурах клеток. Введение метки при этом происходит через питательную среду. Аминокислоты, как правило, хорошо проникают через наружные мембраны клеток и исполь- [c.263]

Использование гель-фильтрации для освобождения от радиоактивных предшественников неоднократно цитировалось при описании методов введения радиоактивной метки в белки и нуклеиновые кислоты [Остерман, 1983]. Нередко обессоливание используют и на заключительном этапе очистки для освобождения не только от соли, но и от прочих низкомолекулярных примесей. Например, в одной из работ по выделению РНК-полимеразы очисткой белка на биогеле А-1,5т завершалась целая серия операций, включавшая различные варианты переосаждений белка и ионообмениой хроматографии [Vaisius, Horgen, 1979]. [c.138]

При введении радиоактивного изотопа в виде простого химического соединения в живой организм образуются более сложные продукты, содержащие радиоактивный атом. Биосинтетический способ получения меченых соединений применяют в тех случаях, когда химический синтез этих веществ слишком сложен. Этот способ был использован для метки многих природных соединений, например белков, полисахаридов, нуклеиновых кислот, пуринов, пиримидинов, витаминов, гормонов, стероидов, алкалоидов, терпенов, карбоновых кислот, аминокислот, жиров и жирных кислот из радиоизотопов чаще всего применяют и Р -. Биосинтезы приводят обычно к неспецифически меченным соединениям с низким выходом требуемого продукта. Однако, если большая часть образующихся меченых соединений может быть использована для различных целей, то их биосинтез экономически выгоден. [c.683]

Лиф [22] показал, что механизм метаболизма 2М-4Х подмаренником цепким Galium aparine заключается в разрушении боковой цепи, хотя только 7% метки из 2М-4Х-1- С или 2М-4Х-1- С, введенной в растение, выделяется в виде СОг. Тем не менее большая часть радиоактивного углерода из боковой цепи 2М-4Х отщепляется от арильной группы и включается в компоненты клетки, например в крахмал, белки и нуклеиновые кислоты. Степень разрушения боковой цепи в результате оказывается большей, чем получается по данным о декарбоксилировании. Вайнтрауб и сотр. [32] показали, [c.13]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология