Вирусные векторы

ДНК попадает в ядро. Однако вирусные векторы имеют ряд недостатков они дорогостоящи и часто обладают ограниченной клонирующей емкостью, что не позволяет регулировать экспрессию терапевтического гена с помощью тканеспецифичных последовательностей. Кроме того, вирусные белки могут вызывать воспалительную реакцию, что исключает повторное введение вектора. Поэтому были разработаны невирусные системы доставки генов. [c.499]

Ретровирусный вектор может включить лишь около 10000 пн. Имея в руках готовый вирусный вектор, им можно инфицировать подходящие клетки-мишени, например, фибробласты, экспрессирующие соответствующие поверхностные рецепторы. [c.585]

Трансдукция. Перенос генетического материала из одной клетки в другую с помощью вирусного вектора. [c.1019]

Вирусные векторы не получили широкого распространения. Характерной чертой эукариотических вирусов является компактное строение их генома и практически полное отсутствие генов, несущественных для их развития. По тому клонирование с их помощью чужеродной ДНК вызывает их дефектность и требует использования вирусов-помощников. [c.379]

Особенности вирусных векторов, используемых для генной терапии человека, описаны отдельно (см. с. 422). [c.395]

Очевидно, вирусные конструкции обладают уникальными свойствами в плане моделирования некоторых вариантов генной терапии. Однако классические вирусные векторы не могут быть прямо использованы для перспективных задач генной терапии (кроме, быть может, некоторых случаев терапии лимфо-пролиферативных заболеваний) ввиду потенциального трансформирующего действия собственных транс-действующих факторов, приводящего к нарушению основных требований по безопасности лечения. Безусловно перспективным направлением в данной области является разработка новых и тестирование имеющихся векторных систем, транс-действу-ющие факторы которых в значительной степени утрачивают трансформирующую способность (онкогенный потенциал). Однако даже и в этом случае в настоящий момент трудно адекватно оценить их воздействие на живой организм. [c.225]

Использование ретровирусных векторов. Трансдуцирующие вирусные векторы имеют одно преимущество, связанное с тем, что инфицирование [c.270]

Недостаток живой рекомбинантной вирусной вакцины состоит в том, что при вакцинации лиц со сниженным иммунным статусом (например, больных СПИДом) у них может развиться Т5гжелая вирусная инфекция. Чтобы решить эту проблему, можно встроить в вирусный вектор ген, кодирующий человеческий интерлейкин-2, который стимулирует Т-клеточный ответ и ограничивает пролиферацию вируса. [c.241]

РСлон кДНК С встроенным геном может обладать инфекцион-ностью и, как следствие, им заражают хозяйское растение. Если же кДНК с встроенным геном не обладает инфекционностью, то вирусный вектор может быть транскрибирован с образованием РНК, которая затем используется для заражения растения. [c.514]

При клинических испытаниях для доставки гена в клетки бьш использован аэрозольный ингалятор, подобный тому, который применяют больные астмой. кДНК нужного гена бьша встроена в особую липосому (разд. 25.5.1). Липосомы сконструировали специально для того, чтобы они могли проникнуть в клетку и высвободить там ДНК. Метод бьш успешно опробован на мышах в 1993 г. Начались также испьггания с использованием вирусного вектора. Бьш выбран аденовирус, который в норме атакует дыхательные пути. К сожалению, ДНК вируса не встраивается в хозяйскую ДНК. Если клетка делится, новая ДНК не реплицируется одновременно с ней, и со временем ее количество уменьшается. [c.264]

Описанный в гл. 19 метод клонирования чужеродных последовате ьностей в бактериофагах или плазмидах может быть использован и для встраивания генов в эукариотические вирусы. Путем внесения необходимых разрывов рестриктазами и последующего объединения полученных фрагментов глобиновый, инсулиновый и другие гены из множества источников были встроены в эукариотические вирусные векторы. Один из наиболее распространенных векторов-обезьяний вирус 8У-40, который может размножаться в клетках ряда млекопитающих. Новые гены могут быть встроены в область ранних или поздних генов транскрипционной единицы вируса. Их экспрессия включает стадию образования РНК-предше-ственника, на 5 -конце которого обычно имеются вирусные последовательности, за которыми следует последовательность встроенного гена. Такие РНК подвергаются нормальному сплайсингу, как показано на рис. 26.8. [c.325]

Использование с этой целью векторов ВРУ-типа удобно в том отношении, что довольно быстро устанавливается множество копий вируса (до нескольких сотен на клетку). Этим объясняется успешное применение вектора на основе ВРУ для высокоэффективной экспрессии многих белков [1]. Недостатки вирусных векторов связаны с ограниченным набором клеточных линий, в которых возможна репликация вектора, а уровень экспрессии и поддержание эписомного состояния конструкции в целом зависят кроме всего прочего и от конкретных последовательностей ДНК, клонированных в векторе. Альтернативный способ увеличения числа копий, описанный в данной главе, предусматривает селекцию клеток на амплификацию последовательностей вектора после его интеграции в ДНК клетки-хозяина такой подход не имеет принципиальных ограничений на использование того или иного типа клеток. При этом подходе можно выбрать клетки с любыми нужными свойствами, например способностью определенным образом модифицировать белковый продукт или узнавать конкретную регуляторную последовательность ДНК. [c.239]

Инфицирование предимплантированных эмбрионов рекомбинантными ретровирусами — относительно несложная процедура, не требующая дорогостоящего оборудования. Тем не менее любой интересующий ген необходимо сначала переклонировать в вирусный вектор и эту рекомбинантную конструкцию ввести в соответствующие клетки, чтобы получить клеточную линию, продуцирующую инфекционные рекомбинантные вирусные частицы. Здесь, однако, следует иметь в виду, что размер вставки, которую способен акцептировать вирусный вектор, ограничен (около 10 т. п. н.) кроме того, интересующая ДНК может содержать [c.309]

А. Экспрессия гемагглютинина в клетках обезьян с использованием рекомбинантных SV40 вирусных векторов [c.166]

Векторы с замещением поздних генов 8 40ДНК. Первые попытки конструирования вирусных векторов были осуществлены с вирусом SV40, в ДНК которого нет протяженных спейсеров. В вирусном геноме замещали на чужДНК поздние или ранние гены. Полученные конструкции являлись векторами замещения с емкостью не более 2,5 т.п.н., причем для работы с ними требовался вирус-помощник. [c.398]

Приведенный выше пример демонстрирует одну из возможностей изменять специфичность вирусного вектора путем присоединения к вириону дополнительного белка, узнающего клеточный рецептор. Другая возможность, реализуемая при работе с ретровирусными векторами, заключается в замене гена env на одноименный ген родственного вируса или в направленной модификации этого гена с целью изменить его специфичность. Например, когда у вируса саркомы Рауса заменили 3 -концевую часть гена env на ген гемагглютинина вируса гриппа, то он стал инфицировать человеческие клетки (Dong et al, 1992). Рекомбинантный белок Env эффективно встраивается в вирион, обеспечивая поддержание новой специфичности. Такой вектор потенциально полезен для генной терапии рака, поскольку способен осуществить инфицирование всех клеток ткани. Следует, конеч- [c.428]

Еще одним подходом, дающим надежду на увеличение эффективности переноса генов, является использование в качестве векторов ретровирусов. Основное преимущество этих векторов заключается в том, что они способны эффективно инфицировать большое число различных клеточных типов. Общий вид вирусного вектора, используемого для трансгеноза, изображен на рис. 66. Ретровирусные векторы обеспечивают интеграцию единичной копии трансгена в эмбрионы на разных стадиях развития. Первые эксперименты, продемонстрировавшие внедрение и наследование у мышей экзогенно введенного мышиного вируса лейкемии Молони (MoMLTV), были проведены еще в середине 70-х годов прошлого века Енишем с сотрудниками [c.191]

Данные эксперименты натолкнули исследователей на мысль об использовании определенных сегментов вирусного генома в качестве ам-плифицирующих вирусных векторов. Прежде всего была изучена возможность введения в дефектный геном вируса чужеродной ДНК. Р Спет и Н. Френкель (1982 г.) встроили по Bgal-участку плазмиды рКС7 (производная [c.388]

Для экспрессии клонированных генов в клетках животных были сконструированы два типа векторов в основе одного из них лежит геном SV40, а другого—геном патгилломавируса крупного рогатого скота (BPV). Основные свойства этих двух систем вирусных векторов описаны в разд. 5.7. Векторы на основе папилломавирусов особенно полезны для синтеза больщих количеств белка, а векторы на основе SV40 используются во многих экспериментах. [c.360]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология