Стабильные молекулярные векторы

Ретровирусные молекулярные векторы можно использовать для решения широкого круга задач. Прежде всего, это векторы, обеспечивающие высокоэффективную трансдукцию чужеродных генов в различные типы культивируемых клеток животных и их экспрессию. Получаемые линии клеток, как правило, стабильно сохраняют в составе своего генома гибридную ДНК дефектного ретровируса как дополнительный генетический элемент. [c.408]

Не все уверены в целесообразности патентования, некоторые считают, что предоставление монопольных прав ограничивает конкуренцию, приводит к повышению цен, сдерживает новые разработки, способствует процветанию больших корпораций в ущерб интересам отдельных изобретателей и небольших компаний. Несмотря на все это, патентная система стабильна и хорошо развита. Более того, стало ясно, что патентование не тормозит фундаментальные исследования и научную деятельность фирм и компаний. Так, если бы оно служило серьезным препятствием для инноваций, то патент США за номером 4 237 224, выданный Стэнли Коэну и Герберту Бойеру в 1980 г. на использование вирусных и плазмидных векторов для создания рекомбинантных ДНК, должен был в значительной степени затормозить развитие молекулярной биотехнологии (рис. 23.1). Совершенно очевидно, что ничего подобного не произошло. [c.539]

Благодаря созданию клонирующих векторов, способных реплицироваться и стабильно поддерживаться в разных грамотрицательных бактериях, появилась возможность получать библиотеки генов изучаемых бактерий, проводить молекулярно-генетические исследования организации и функционирования хромосомных и плазмидных генов, а также координируемо регулируемых наборов генов (оперонов). С помощью комплементационного анализа удается выявлять гибридные молекулы ДНК, несущие определенные локусы бактериальной хромосомы. При этом комплементация функций возможна и в неродственных, но относительно хорошо изученных бактериях. Рассмотрим некоторые исследования такого типа. [c.228]

Создавая на основе природного репликона удобные клонирующие векторы, необходимо прежде всего достаточно подробно изучить генетическую организацию данной автономно реплицирующейся молекулы ДНК и лишь затем выполнить ряд манипуляций по ее реконструкции. На получение каждого такого вектора, как правило, уходит много времени. Особенно это касается слабо изученных в генетическом плане видов бактерий. Поэтому крайне привлекательным выглядит подход, который предусматривает создание векторных молекул, способных стабильно реплицироваться в различных хозяевах. По сравнению с конструированием отдельных молекулярных векторов для каждого бактериального вида это, во-первых, существенно экономит время и, во-вторых, обеспечивает возможность изучать экспрессию любых генов в различном генетическом окружении в составе одной и той же генетической конструкции. Часто в этой схеме экспериментов грамотрицатель-ная бактерия Е. соИ, как наиболее хорошо разработанная генно-инженерная система, используется в качестве промежуточного хозяина. [c.211]

Ретровирусы обладают рядом уникальных свойств, что обусловило активное использование их в последние годы в качестве молекулярных векторов. Относительно небольшой геном ретровирусов позволяет довольно просто с ним манипулировать и вводить в его состав чужеродные гены. При этом нет жестких ограничений на размер генома, упаковываемого в вирион, и поэтому удается встраивать экзогенные фрагменты ДНК длиной до 10 тпн. Ретровирусная инфекция обычно приводит к стабильной интеграции единственной копии вирусного генома в ДНК клетки-хозяина. Данные вирусы можно легко нарастить в кулыуре клеток до высокого титра. Ретровирусы способны инфицировать как эмбрионы, так и кроветворные клетки, причем эффективность инфицирования очень велика и достигает в эксперименте практически 100 %. Ретровирусы содержат мощные усилители транскрипции, которые обеспечивают высокий 5фОвень экспрессии клонированных генов в клетках различных типов. [c.400]

Основная цель экспериментов по клонированию генов, которые предполагается использовать в биотехнологии, — подбор условий для эффективной экспрессии в нужном организме-хозяине. К сожалению, сам факт встраивания того или иного гена в клонирующий вектор еще не означает, что этот ген будет экспрессирован. В то же время, чтобы получение коммерческого продукта было экономически оправданным, уровень его синтеза должен быть достаточно высоким. Для достижения эффективной экспрессии уже сконструировано много специфических векторов для этого проводились манипуляции с целым радом генетических элементов, контролирующих процессы транскрипции и трансляции, стабильность белков, секрецию продуктов из хозяйской клетки и т. д. Среди молекулярно-биологических свойств систем экспрессии наиболее важны следующие 1) тип промотора и терминатора транскрипции 2) прочность связывания мРНК с рибосомой 3) число копий клонированного гена и его локализация (в плазмиде или в хромосоме хозяйской клетки) 4) конечная локализация синтезируемого продукта 5) эффективность трансляции в организме хозяина 6) стабильность продукта в хозяйской клетке. [c.105]

Оптимальный терапевтический вектор. Отметим еще раз, что векторы для доставки терапевтических генов, которые были бы одновременно эффективными и специфичными, пока не созданы. Теоретически такой идеальный вектор должен обладать 1) стабильной неиммуногенной оболочкой 2) специфическими лигандами для связывания с определенным типом клеток 3) молекулярными средствами для слияния мембран вектора и клетки 4) способностью внедрять векторную ДНК в клеточную хромосому путем гомологичной или сайт-специфической интеграции 5) регуляторным локусом для тканеспецифической экспрессии (рис. 13.14). [c.431]

Технология рекомбинантных ДНК открывает новые замечательные возможности для дальнейшего изучения экспрессии генов и функционирования их белковых продуктов у самых разных организмов. Что касается вируса гриппа, то молекулярное клонирование позволило не только быстро накопить обширную информацию о первичной структуре всех вирусных генов (хотя, например, для НА-гена этот подход оказался наиболее продуктивным), но и конструировать in vitro определенные мутанты. В настоящее время гены, кодирующие белки НА, NA, М и NS, уже вводятся в составе бактериальных плазмидных векторов в эукариотические клетки, где и экспрессируют соответствующие полипептиды [20]. В этих опытах обычно используют плазмидные конструкции, несущие промоторы SV40, поэтому клеточные РНК-полимеразы II могут эффективно инициировать синтез РНК, содержащих генетическую информацию вируса гриппа. Правда, экспрессия носит обычно временный характер и ограничена цитопатическим эффектом. С другой стороны, интеграция НА-гена вместе с селективным маркером (таким, как клеточный ген тимидинкиназы) приводит к стабильной экспрессии [20]. [c.469]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология