Мечения метод смеси меченых и немеченых

За поведением липидов в двух монослоях мембраны можно проследить, введя в отдельные молекулы в качестве метки нитро-ксильную группу, являющуюся стабильным органическим свободным радикалом (рис. 6-2). Такие спин-меченые липиды можно изучать методом электронного парамагнитного спинового резонанса (ЭПР) непосредственно в живых клетках. Перед тем как ввести спин-меченые липиды в мембраны клеток, смесь меченых и немеченых фосфолипидов обрабатывают ультразвуком с целью получения маленьких липидных везикул. При добавлении последних к суспензии целых клеток в определенных условиях везикулы сливаются с клетками, перенося меченые лиганды в их плазматическую мембрану. [c.49]

Изотопно-кинетический метод применялся при исследовании каталитических реакций. Промышленное значение имеет процесс каталитического окисления этилена на серебре. Продуктами реакции являются технически важная окись этилена и углекислый газ. Предстояло выяснить, происходит ли образование СОа в результате доокисления окиси этилена или независимым путем, в качестве побочного направления процесса окисления этилена. В реакционную смесь вводили меченый этилен и немеченую окись этилена. Удельная активность образующегося СОг оказалась во много раз выше активности окиси этилена. Следовательно, основная масса [c.235]

Рис. 4.12. Получение меченого ДНК-зонда методом случайных праймеров. К денатурированной двухцепочечной ДНК, содержащей нуклеотидную последовательность, которую предполагается использовать в качестве зонда, добавляют гексануклеотиды (смесь всех возможных комбинаций из шести нуклеотидов) и отжигают смесь. Некоторые из олигонуклеотидов гибридизуются с немеченой денатурированной ДНК, и в присутствии фрагмента Кленова и четырех с1НТР (один из которых меченый [ ]) служат затравкой для синтеза комплементарной цепи. После денатурации синтезированной ДНК получают смесь меченых фрагментов ДНК, которые вместе составляют практически полноразмерную исходную ДНК-матрицу.

Расчет по (11.21) возможен только при условии,что а 7 р. ПoiT му если В является промежуточным соединением, то нельзя вводить меченое соединение А в исходную реакционную смесь, в которой В отсутствует. В этом случае В будет образовываться с тем же содержанием изотопа, что и в исходном А, т, е, а и р будут равны и постоянны, с1 /(И = О и расчет V по (11.21) окажется неосуществимым. Поэтому кинетический изотопный метод предполагает введение меченого соединения А или В через некоторое время после начала реакции. Чтобы не изменить течение реакции, эту добавку делают достаточно малой (индикаторной) по сравнению с количеством немеченого компонента, уже присутствующего в реакционной смеси. Если исследуется обратимая реакция, то меченый компонент можно вводить в реакционную смесь, содержащую оба компонента, в частности, в заранее приготовленную равновесную смесь. [c.69]

Метод изотопного разбавления (Фостер и Риттенберг, 1940 г.) основывается на следующем принципе в смесь аминокислот, полученную гидролизом известного количества белка, вводят некоторое количество определенной аминокислоты, содержащей изотоп или S ) и выделяют из смеси соответствующую аминокислоту в чистом В1вде (либо как таковую, либо в виде производного). Соотношение между мечено11 и немеченой аминокислотами в чистом выделенном продукте остается таким же, как и в исходной смсси (независимо от выхода чистого продукта). Определяя масс- спектрографически соотношетпге между меченой и немеченой аминокислотой в чистой выделенной аминокислоте и зная количество меченой аминокислоты, введенное в исходную смесь аминокислот, можно вычислить количество немеченой аминокислоты в смеси. Этот метод трудоемок, так как он требует синтеза большого числа меченых аминокислот. [c.419]

Система бесклеточного синтеза белка in vitro включает в себя полисомы, мРНК, полный комплекс транспортных РНК, необходимые соли, АТФ, ГТФ, систему регенерации АТФ (например, креатинфосфат и креатинфосфокиназу) и, наконец, аминокислоты — обычно 19 немеченных и одну радиоактивно меченную. Чаще всего в качестве таковой используют [ 8]-ме-тионин с УА 500 Ки/ммоль или [ Н]-лейцин с УА>190 Ки/ /ммоль. Разумеется, можно вводить метку и через другие меченые аминокислоты или их смесь. В продаже имеются готовые смеси всех радиоактивных ( С или Н) аминокислот в пропорциях суммарного белка хлореллы. Анализ меченых полипептидов осуществляют методами электрофореза или ИЭФ с последующей флюорографией. [c.249]

Конкуренция между радиоактивно меченными и немеченными молекулами антигена может осуществляться как при одновременном, так и при любом последовательном внесении их в инкубационную смесь. Компоненты иммунных комплексов непрерывно обмениваются, и в конечном счете пропорция меченых и немеченных антигенов в составе комплексов устанавливается точно такой же, как в растворе. Полезно отметить также, что количество антигена в препарате может во много раз превышать количество радиоактивного антигена в исходной стандартной смеси, но это не помешает его точному определению, до тех пор пока остающаяся в составе комплекса (пусть даже малая) доля исходной радиоактивности измеряется надежно. Это означает, что в стандартную смесь можно вносить очень малое абсолютное количество высокомеченного антигена и соответственно иметь высокую чувствительность метода. Чувствительность, очевидно, определяется минимальным количеством холодного антигена, внесение которого дает эффект уменьшения связанной радиоактивности, надежно заметный на калибровочной кривой ( 10" мкг для рис. 73). [c.280]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология