Выделение чистых аминокислот

Аминокислотный состав белков. — Анализ гидролизата белков, содержащего до двадцати различных аминокислот (см. табл. 39), является чрезвычайно сложной задачей. Риттенберг (1940) разработал метод изотопного разбавления, согласно которому радиоактивную кислоту определенной удельной активности, например меченую глутаминовую кислоту, добавляют в известном количестве к анализируемой смеси, после чего выделяют глутаминовую кислоту обычным образом. Так как химические свойства природной и меченой кислоты одинаковы, то выделяемое вещество является смесью добавленной аминокислоты и первоначально присутствовавшей в пробе. Количество кислоты в гидролизате вычисляют по изотопному составу выделенной кислоты. Если добавляется рацемическая меченая кислота, то аминокислоты гидролизата перед выделением рацемизуют или же из выделенного рацемата отделяют чистую -форму. Точность анализа не зависит от метода выделения, выхода кислоты или концентрации ее в гидролизате. [c.655]

Выделение чистых аминокислот [c.79]

Синджем [1943] было замечено, что важным препятствием для развития наших знаний о тонкой структуре белков является трудность выделения чистых продуктов частичного гидролиза белков. Весьма вероятно, что развитие методов выделения будет значительно облегчено развитием соответствующих методов маркирования или идентификации конечных аминокислот. Одним из оснований для такого утверждения является тот факт, что аминокислоты после конденсации с различными реагентами приобретают свойства, которые значительно отличаются от [c.213]

Технология получения аминокислот базируется на принципах ферментации продуцентов и выделении вторичных метаболитов, то есть размножают маточную культуру вначале на агаризованной среде в пробирках, затем — на жидкой среде в колбах, инокуляторах и посевных аппаратах, а затем в головных (основных) ферментаторах. Отработку культуральных жидкостей и выделение аминокислот проводят по схеме, аналогичной схеме получения антибиотиков (см.). Изолированные чистые кристаллы целевого продукта обычно высушивают под вакуумом и упаковывают. [c.446]

Метод Косселя основан на выделении чистых производных аминокислот. Поэтому естественно, что получаемые результаты имеют минимальную величину. Этот факт, установленный впервые Косселем и Кучером в 1900 г., в дальнейшем был подтвержден всеми исследователями. Однако было сделано много попыток получить более достоверные аналитические результаты. [c.33]

Выделенные фракции аминокислот можно подвергнуть новому хроматографированию и таким образом получить отдельные аминокислоты в чистом виде. [c.127]

Еще во времена Пастера было известно, что белки обладают оптической активностью. Впоследствии было установлено, что оптическая активность белков является следствием оптической активности входящих в их состав аминокислот. Далее, требовал решения вопрос, встречаются ли в белках только оптически чистые аминокислоты или могут встречаться также и частично или полностью рацемизованные. Э. Фишер впервые постулировал, что в белках аминокислоты встречаются только в оптически чистом виде. Противоречащие этому представлению факты, например выделение рацемического серина из продуктов гидролиза белков, Фишер объяснил рацемизацией, наступающей в процессе гидролиза белка и выделения аминокислот. Этот постулат в дальнейшем получил полное подтверждение. [c.587]

Мы являемся свидетелями исключительно важного по ожидаемым результатам прогресса в молекулярной биологии. Предпосылкой этого служит выпуск биологических препаратов небывало высокой чистоты. Одну из сторон этого процесса познания академик Н. П, Дубинин охарактеризовал так Использование... методов выделения из клетки химически чистых веществ, совместно с генетическим экспериментом, позволило понять, в каких группировках атомов внутри молекул нуклеиновых кислот реализуется явление наследственности . Теперь в распоряжении исследователей имеется внушительный ассортимент чистых аминокислот, нуклеотидов, в том числе меченных радиоактивными изотопами, ферментов, витаминов, гормонов, антибиотиков, ускорителей и угнетателей роста. [c.44]

Медные соли аминокислот хорошо кристаллизуются и поэтому используются для выделения аминокислот в чистом виде путем перекристаллизации. [c.101]

Структура амина, Лмин, который подвергают ацилированию, может быть взят в виде или соли, или эфира аминокислоты или пептида. Если применяют эфир, то получается нейтральный продукт реакции, от которого исходные кислотный и основной компоненты легко можно отделить экстрагированием раствором бикарбоната натрия и разбавленной соляной кислотой. Применение солн щелочного металла приводит к образованию кислотного продукта, для выделения которого в чистом виде и для освобождения от исходной ациламинокислоты или пептида часто требуется применение противоточного распределения. [c.178]

При попытках применения электрохимического метода выделения м-аминокарбоновых кислот, основанного на электрохимическом разложении хлористого аммония с выделением хлора, получить 10 аминокислоты чистыми от ионов хлора не удалось. [c.315]

Эти реакции проводили с миллиграммовыми количествами реагентов и продукты реакции выделены не были при работе с большими количествами реагентов для получения про-дуктов реакции в чистом виде, вероятно, пришлось бы прибегнуть к противоточному распределению. При pH от 6 до 8 выходы составляли 90% в растворе с концентрацией 0,01 М в отношении аминокислоты или пептида и около 100% при 0,1 М концентрации. Однако эти данные не соответствуют выходам выделенных продуктов. [c.291]

Основными задачами препаративной хроматографии амино кислот являются разделение максимальных количеств материала, выделение чистых аминокислот и, наконец, разработка и использование предельно простых методик. В отличие от аналитической хроматографии здесь вполне допустимы те или иные потери материала. Наибольшей емкостью в отношении аминокислот обладают сорбенты, используемые в адсорбционной хроматографии. В той или иной форме этот метод используют для разделения аминокислот на колонке с активированным углем (в виде фронтального, элютивного или вытеснительного анализа). Разработка этого метода связана главным образом с именем А. Тизелиуса [86]. Таким методом удобно отделять ароматические аминокислоты [87, 88], однако по эффективности этот метод значительно уступает ионообменной хроматографии. [c.355]

Слово белок (греч. proteios — первый, первичный) впервые было использовано Берцелиусом в 1838 г., и с тех пор изучение структуры и функций белка находится на переднем крае биохимических исследований. Период выделения чистых аминокислот охватывает 132 года — с 1806 г. (цистин) по 1938 г. (оксили-зин) и за это время было разработано много новых и изящных методов их выделения и разделения. [c.85]

Наиболее часто приходится решать задачу выделения чистой аминокислоты из ионита, на котором она была сорбирована в процессе извлечения из экстрактов, культуральных жидкостей и других производственных растворов, а также при ионообменном разделении аминокислот. Вытеснение аминокислоты из ионита проводят предпочтительно раствором кислоты или основания, которые могут быть затем удалены при нагревании раствора (СНдСООН, NH4OH). Однако некоторые кислые и основные аминокислоты нв- [c.149]

Новые исследования в биохимии, медицине, биологии и в дрз гих областях науки и техники требуют индивидуальных хроматографически чистых -аминокислот. Между тем практически не существует комплексных методов выделения аминокислот требуемого качества из белкового сырья. Ранее нами показана возможность электродиализного разделения гидролизата желатина на аминокислотные фракции и установлен ряд закономерностей про.хождения аминокислот через ио]юобмеиные мембраны [1, 2]. [c.63]

Органич. К. а. резко отличается от неорганич. анализа. Подавляющее большинство органич. соединений имеет ковалентный характер и потому каждое из них должно идентифицироваться индивидуально. Для этого сначала проводят реакции, определяющие принадлежность соединения к к.-л. классу органич. соединений, а затем — реакции, характерные для данного соединения. В органич, К. а. смесь веществ первоначально разделяют, основываясь на их разной летучести, растворимости или сорбции. К легколетучим относят вещества с т. кин. ниже 160°, к труднолетучим — ст. кип. выше 160°. Затем вещества разделяют по классам согласно их растворимости, преим. в воде и эфире. Наконец, применяют групповые реакции, с помощью которых устанавливают присутствие классов химич. соединений (спирты, фенолы, кислоты, амины и проч.). Некоторые химич. реакции позволяют перевести малоразличимую смесь веществ в вещества с достаточно различными физич. свойствами, что дает возможность отделять их далее посредством дистилляции или растворением. Напр., можно превратить смесь поликарбоновых к-т и аминокислот в летучие сложные эфиры, сравнительно легко разделяемые. При идентификации выделенного чистого вещества большое значение имеет элементарный К. а., проводимый обычными методами для открытия углерода, водорода, азота, серы, галогенов, фосфора, мышьяка и металлов, а также испытание основных физич. свойств (темп-р плавления и кипения, растворимости и определение молекулярного веса). См. также Элементарный анализ, Функциональный анализ. [c.252]

С помощью интегратора для чистых аминокислот определяются отношения площадей пиков при 440/570 нм и рассчитываются средние отклонения. Эти данные используются для сравнения с отношениями пиков для аминокислот, выделенных из анализируемого материала. Полученное соотношение выводится на цифропечать. Программа написана на ФОРТРАНе и позволяет оценивать любые аномальные пики. [c.299]

Работы ло качественному и количественному определению аминокислот, входящих в состав белка, проводились в течение многих лет. Большинство классических методов, основанных на оригинальных исследованиях Косселя, Фишера, Осборна, Форе-мана и других, были правиметрическими и требовали выделения аминокислоты ли одного ив ее производных. Обширная литература по этому вопросу свидетельствует о громадных трудностях, сопутствующих таким исследованиям. Применение классических методов ограничивалось в значительной степени тем, что для исследований требовались большие количества белка (100 г или более). Существовавшие в то время колориметрические методы нельзя было проверить путем анализа аминокислотных смесей, составленных специально для данной цели ввиду отсутствия чистых аминокислот (не было методов для надежной оценки их чистоты). [c.209]

При работе с микроколичествами существует естественная тенденция избегать выделения чистых веществ [И] и опускать приготовление производных в соответствии с этим идентификация часто основана на цветных или других специфических химических реакциях. Такая идентификация, по мнению автора, не является адекватной. Заключения, основанные на хроматографических данных, страдают тем же недостатком. Например, если на двух хроматограммах на бумаге неизвестного твердого вещества нингидри-новая и йодоплатиновая реакции положительны, то естественно предположить присутствие среди других аминокислот метионина. Если неизвестная смесь представляет собой белковый гидролизат и получены воспроизводимые хроматограммы смеси со значениями совпадающими с известного образца метионина, и если неизвестная смесь дает положительную пробу при выращивании специфических микроорганизмов, то наличие метионина в этом гидролизате можно считать твердо установленным. [c.352]

Ультрафильтрация представляет большой интерес для выделения декстринов из крахмала, спиртов из растворов, получающихся при брожении различных продуктов, аминокислот и многих других веществ из различных отходов пищевой промышленности. При непрерывной ульт-рафильтрацни через мембрану могут проникать целевой продукт и низкомолекулярные вещества, которые при необходимости можно разделить последующей ультрафнльтрацией через более микропористые ультрафильтры. Образующийся концентрат возвращается в реактор. Такой процесс не сложен, но позволяет получать чистый продукт и сохранять в реакторе оптимальную концентрацию микроорганизмов и ферментов. Количество отходов при этом мало. [c.293]

ИСКУССТВЕННАЯ ПИЩА, пищ. продукты, к-рые олуча -ют из разл. пищ. в-в (белков, аминокислот, липидов, углеводов), предварительно выделенных из прир. сырья или полученных направленны.м синтезом из минер, сырья, с добавлением пищевых добавок, а также витаминов, минер, к-т, микроэлементов и т. д. В качестве прир. сырья используют вторичное сырье мясной и молочной пром-сти, семена зерновых, зернобобовых и масличных культур и продукты их переработки, зеленую массу растений, гидро-бионты, биомассу микроорганизмов и низших растений прн этом выделяют высокомол. в-ва (белки, полисахариды) и иизкомолекулярные (липиды, сахара, аминокислоты и др ) Низкомол. пищ. в-ва м. б. получены также микробиол. синтезом из глюкозы, сахарозы, уксусной к-ты, метанола, углеводородов, ферментативным синтезом из предшественников и орг. синтезом (вкл очая асимметрич. синтез для оптически активных соед ). Высокомол. в-ва должны обладать определенными функциональными св-вамн, такими, как р-римость, набухание, вязкость, поверхностная активность, способность к прядению (образованию волокон) и гелеобразованию, а также необходимым составом и способностью перевариваться в желудочно-кишечном тракте. Низкомол. в-ва химически индивидуальны или являются смесями в-в одного класса в чистом состоянии их св-ва не зависят от метода получения. [c.273]

Примером из области биохимии, который можно непосредственно связать с уравнением (3-8), служит рацемизация аминокислот. Раствор Ь-аминокислоты можно легко превратить в рацемическую смесь, когда 50% аминокислоты находится в О-форме и 50%—-в Ь-форме, с помощью особого фермента рацемазы, причем этот процесс не будет сопровождаться ни поглощением, ни выделением тепла. Таким образом ДЯ = 0 и единственным изменяющимся параметром системы является энтропия. Обозначим й чистого изомера через Q Принимая во внимание, что каждая из N молекул 1 моля рацемата может находиться в одной из двух конфигураций, для рацемической смеси можем записать [c.206]

Токсичные аминокислоты, такие, как индопицин и аминопро-пионитрил [68, 106], оказывают действие, приводящее к порокам развития и уродствам. Наконец, сапонины, выделенные в чистом виде из растения Phytola a dode andra, вызывают выкидыши у мышей. [c.344]

Этот фермент может быть выделен из экстрактов поджелудочной железы в чистом виде [128], но до использования для определения последовательности аминокислот его рекомендуется инкубировать с диизопропилфторфосфатом, чтабы инактивировать возможные примеси химотрипсина, трипсина и субтилизина [122, 267, 300]. Основные свойства и специфич-кость действия карбоксипептидазы подробно рассмотрены в ряде работ [228 293]. В Других работах [114, 136, 226, 320] приводятся данные об использовании фермента для определения последовательности аминокислот в белках. Карбоксн-Пептйдаза специфична в отношении С-концевых аминокислот [c.232]

Выделение и характеристика пептидных гормонов — обычно кропотливая и трудная работа это относится и к гормонам гипоталамуса [19]. Гипоталамус является той областью ткани мозга, которая осуществляет тонкий контроль за эндокринной системой, влияя на активность продуцирования гормонов внещней долей гипофиза. В ткани одного животного присутствуют лишь нанограм-мовые количества гормонов. Первые исследования тиротропин-ре-лизинг гормона (TRH) представляли собой огромную работу по экстракции сотен тысяч свиных гипоталамусов и даже в результате ее удалось получить не полностью очищенный препарат. Аминокислоты, найденные в гидролизате, первоначально рассматривали как примеси, и только после того как в достаточно чистом препарате были обнаружены три аминокислоты гистидин, пролин и глутаминовая кислота в эквимольных количествах, предположили, что гормон имеет пептидную природу. Были синтезировавш шесть возможных изомерных трипептида, однако все они оказались неактивными. Дальнейшие исследования привели, наконец, к пептиду (7), содержащему пироглутаминовую кислоту и амидную функцию этот пептид и оказался идентичным природному ТКН [20, 21]. Таким образом, синтез гормона и определение его структуры были достигнуты одновременно. [c.292]

Инсулин выделен из препаратов поджелудочной железы в чистом кристаллическом виде. Это простой белок, молекулярный вес которого 12 ОО О. Однако имеется доказательство того, что минимальный вес инсулина, соответствующий наименьшей элементарной частице, которая объединяется ковалентными связями, — 6000 (Нейрат, Сангер). Молекула инсулина построена из 16 аминокислот (нет триптофана, метионина и оксипролина) и содержит 51 аминокислотный остаток, если молекулярный вес принять равным 6000. Эти аминокислоты образуют две полипептидные цепи, так как удалось обнаружить два N-концевых аминокислотных остатка (фенилаланин и глицин) и два С-концевых аминокислотных остатка (аланин и аспарагин), причем полипептидные цепи соединяются друг с другом поперечными мостиками, образованными дисульфидными группами. Фенилала-ниновая цепь содержит 30 аминокислотных остатков, а глициновая — 21. В настоящее время последовательность соединения аминокислот в молекуле инсулина полностью расшифрована. Схематически структуру инсулина [c.187]

Эти ферменты нельзя рассматривать как изолированные чистые чрерменты и химозин и пепсин состоят из группы ферментов. В сычуге телячьего желудка, из которого получают химозин, обнаруживаю ферменты как сычужного, так пептического действия. Трипсин составляет довольно сложную группу ферментов, которая не только производит разрушение пептонов с переводом их в полипептиды, но будучи активирован выделениями кишок, трипсин в состоянии ката визировать распад полипептидов до аминокислот при pH около 7,0 т. е. в нейтральной среде. [c.68]

ДНС-аминокислоты, необходимые для контрольных растворов, не обязательно выделять во всех случаях в чистом кристаллическом виде. Вполне достаточно дансилировать раствор аминокислот, жак это описано ниже, без выделения их из раствора. Такие побочные продукты, как ДНС-ОН и ДНС-ЫНг, не мешают идентификации, и поэтому их можно не удалять из смеси. [c.281]

В отличие от производства кормовых дрожжей промьнн.тенное полу чение лизина и других аминокислот осуществляется в строго асептических условиях, на стерильных питательных средах с использованием чистой ку льтуры продуцента. Принципиальная технологаческая последовательность процесса получения лизина след тощзя приготовление посевного материала приготовление и стерилизация питательной среды, всей аппаратуры и коммуникаций культивирование прод) -цента в промышленньк ферментаторах (ферментация) выделение целевого продукта (L-лизина). [c.33]

Если рассматривать удаление воды как чисто физический процесс, то ему должно способствовать повышение температуры, и, действительно, вся вода удаляется при 365 °С, т. е. при достижении критической температуры воды [238]. Однако для большинства органических веществ повышение температуры сопровождается выделением других летучих соединений. На рис. 3-4 показаны кривые зависимости давления паров воды от температуры для некоторых органических веществ. (Кривые построены в полулогарифмическом масштабе по табличным данным, опубликованным Стуллом [333 ].) Даже при относительно низких температурах давление паров воды над растворителями обычно превышает соответствующее парциальное давление паров воды в окружающей среде, что обеспечивает испарение значительных количеств воды в процессе относительно длительного высушивания. На ранних стадиях высушивания вместе с удаляемой водой могут также удаляться жиры, свободные кислоты, азотистые основания и т. д. [270]. При повышенных температурах заниженные результаты могут быть обусловлены гидролизом таких веществ,, как соли, дисахариды или крахмал [270]. После того как свободная вода будет в основном удалена, дальнейшее высушивание может сопровождаться выделением дополнительных количеств воды за счет протекания реакций окисления и конденсации, например самоокисление жиров [270], кислотная конденсация сахаров [129, 159, 229], конденсация восстанавливающихся соединений с производными аминокислот [58, 192, 310]. Таким образом, при определении воды по потере массы получаются заниженные результаты, если высушивание сопровождается гидролизом или окислением, или же завышенные результаты, если при высушивании происходят реакции конденсации. [c.73]

Точную аналогию с определением соответствующих элементов с помощью изотопного разбавления представляет использование меченых атомов для определения соответствующих соединений, присутствующих в смеси. Количественное определение содержания данного вещества в смеси обычными методами требует реагента, специфичного для этого вещества. Если такого реагента не существует, то необходимо количественно выделить индивидуал)эНое соединение из смеси. Применение предположительно специфического реагента опасно при наличии в смеси соединений со сходной структурой. Выделение индивидуального соединения обычно ставит нас перед альтернативой выделение малого количества рассматриваемого соединения без примесей либо полное его выделение с примесями чистота и полнота выделения взаимно исключают друг друга. В качестве примера можно привести исследование [1701] гидролизатов белков, содержащих около 24 а-аминокислот, количественное содержание которых должно быть определено для установления структуры белка. При использовании метода изотопного разбавления, представляющего единственный метод полного анализа, необходимо синтезировать каждую из имеющихся а-аминокислот в изотонически обогащенной форме. Например, глицин, содержащий обогащенный азот, образует неразделимую смесь с необогащенным глицином. Выделение малых количеств чистого глицина с последующим измерением отношения в нем позволит точно оценить содержание глицина в смеси. [c.114]

Полученный прозрачный раствор сгущается в вакууме, причем часть сахара выделяется в кристаллическом состоянии и центрифугируется. Оставшийся маточный раствор, называемый зеленым сиропом, вновь выпаривается, причем кристаллизуется менее чистый сахар. Второй маточный раствор, из которого уже не получаются кристаллы, называемый патокой, или мелассой, содержит еще 46 —50% сахара наряду с бетаином, аминокислотами и органическими кислотами. Патока служит кормом для скота и применяется для производства спирта. Для выделения больших количеств сахара, содержащихся в патоке, были предложены различные способы, из которых наиболее эффективный основывается на применении ионооб-менников. [c.285]

Метод изотопного разбавления (Фостер и Риттенберг, 1940 г.) основывается на следующем принципе в смесь аминокислот, полученную гидролизом известного количества белка, вводят некоторое количество определенной аминокислоты, содержащей изотоп или S ) и выделяют из смеси соответствующую аминокислоту в чистом В1вде (либо как таковую, либо в виде производного). Соотношение между мечено11 и немеченой аминокислотами в чистом выделенном продукте остается таким же, как и в исходной смсси (независимо от выхода чистого продукта). Определяя масс- спектрографически соотношетпге между меченой и немеченой аминокислотой в чистой выделенной аминокислоте и зная количество меченой аминокислоты, введенное в исходную смесь аминокислот, можно вычислить количество немеченой аминокислоты в смеси. Этот метод трудоемок, так как он требует синтеза большого числа меченых аминокислот. [c.419]

Эргот, содержит, кроме холина, аминокислот (тирозина, триптофана, гистидина, лейцина, аспарагиновой кислоты, бетаина) и биогенных аминов (гистамина и тирамина), несколько алкалог-гдов. Их трудно выделить в чистом виде вследствие превращений, которые они претерпевают в процессе операций очистки. Иоэтому алкалоиды спорыньи, описанные в более старой литературе, являлись вторичными аморфными продуктами илп не вполне определенными смесями. Выделение алка-. (оидов спорыньи в чистом виде и установление их строения было осуществлено В. А. Якобсом и главным образом А. Штоллом и их сотрудниками (1918—1950 гг.). [c.999]

В 1911 г. Абдергальден и Вейль [18] писали, что для наилучшего определения аминокислот нужно производить опыты по выделению их на чистых смесях. Они также отметили, что метод определения какой-либо аминокислоты, дающий хорошие ревультаты на одном балке, не обязательно подойдет для исследования другого. Это положение верно и в настоящее время, но с НИ41 редко считаются. [c.304]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология