фосфатдегидрогеназа

Глицерол-З-фосфатдегидрогеназа катализирует реакцию восстановления фосфодиоксиацетона в глицерол-З-фосфат [c.266]

Реактивы для определения глюкозо-6-фосфата энзиматическим методом с глюкозо-6-фосфатдегидрогеназой (с. 41). [c.65]

Активность альдолазы может быть измерена двумя методами химическим, основанным на определении концентрации продуктов реакции — фосфотриоз (по нарастанию щелочнолабильного фосфорл), и энзиматическим, в сопряженной системе, содержащей помимо альдолазы и фруктозо-1,6-дифосфата также НАД+ и глицеральдегид-З-фосфат-дегидрогеназу или НАДН и глицерол-З-фосфатдегидрогеназу. Скорость альдолазной реакции определяют по нарастанию или убыли НАДН. [c.246]

Метод основан на энзиматическом окислении глюкозо-6-фосфата в глюконолактон-6-фосфат ферментом глюкозо-б-фосфатдегидрогеназой (КФ 1.1.1.49) при одновременном восстановлении НАДФ+ в НАДФН. [c.40]

Определение активности глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназы [c.253]

Выделение глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназы [c.256]

Определение активности глицерол-З-фосфатдегидрогеназы [c.267]

Кристаллизация. К раствору, содержащему глицерол-З-фосфатдегидрогеназу (фракция 1,82 М сульфата аммония, pH 6,1—6,2), добавляют медленно, в течение трех дней, сухой сульфат аммония до повышения его молярности до 2,0 М. [c.268]

Раствор глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназы из дрожжей или скелетных мышц кролика в буфере А — концентрация [c.297]

Глюкозо-6-фосфат можно определить также энзиматическим методом в системе, содержащей глюкозо-6-фосфатдегидрогеназу и НАДФ (с. 40). [c.61]

Расщепление фруктозо-1,6-дифосфата на две фосфотриозы катализирует альдолаза (КФ 4.1.2.13). При этом образуется глицеральдегид-3-фосфат и диоксиацетонфосфат. Альдолаза мышц не требует для проявления ферментативной активности ионов металлов или каких-либо кофакторов. При исследовании превращения фруктозо-1,6-дифосфата в качестве источника альдолазы используют диализованные экстракты мышц. В процессе диализа из экстракта удаляются компоненты адени-ловой системы НАД и неорганический фосфат, в отсутствие которых становится невозможным дальнейшее превращение глицеральдегид-З-фосфата под влиянием глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназы. Альдолаза относительно термостабильна. Ферментативное расщепление фруктозо-1,6-дифосфата обратимо, положение равновесия с повышением температуры смещается в сторону образования фосфотриоз, константа равновесия при этом возрастает. [c.63]

Определение НАДФ+. Метод основан на специфическом восстановлении НАДФ+ в присутствии глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (с. 40). Количество НАДФ+ определяют по изменению оптической плотности при 340 нм. [c.188]

Определение активности альдолазы этим способом основано на лрименении сопряженной системы, в которой в качестве вспомогательного фермента используется глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназа (ГАФД) [c.247]

Глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназа. Кристаллическую суспензию растворяют в 5 мМ ЭДТА (pH 7,5) до получения раствора, содержащего 10 единиц активности/0,1 мл (см. также с. 253). [c.248]

В спектрофотометрическую кювету помещают 2 мл 0,1 М триэта- ноламинового буфера, pH 8,0, глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназу (30 единиц активности), а также растворы фруктозо-1,6-дифосфата (0,2 мМ), НАД+ (3 мМ) и арсената натрия (5 мМ) с таким расчетом, чтобы после доведения объема пробы до 3 мл их конечные концентрации соответствовали величинам, указанным в скобках. После переме-щивания начинают реакцию добавлением 30—50 мкл раствора альдолазы. Отмечают нарастание поглощения при 340 нм. [c.248]

Триозофосфатизомераза пивных дрожжей имеет молекулярную массу 53 000 Да, состоит из двух неидентичных субъединиц. Оптимум pH в триэтаноламин-НС1-буфере — 7,0—8,5 и 7,6—9,5 соответственно при определении активности с использованием в качестве вспомогательного фермента глицерол-З-фосфатдегидрогеназы или глицеральде-гид-З-фосфатдегидрогеназы. Константа равновесия реакции изомеризации D-глицеральдегид-З-фосфата при pH 7,5 и 25°С равна 19. Кт для этого субстрата при тех же условиях — 1,27x10 М, а для диоксиацетонфосфата — 1,23X10 М. Л ° 1см при 280 нм равна 9,9. [c.249]

Активность триозосфосфатизомеразы можно измерять по убыли или образованию НАДН в зависимости от того, используется ли в качестве субстрата глицеральдегид-З-фосфат, а в качестве вспомогательного фермента — глицерол-З-фосфатдегидрогеназа или соответственно диоксиацетонфосфат и глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназа. В обоих случаях за ходом реакции следят спектрофотометрически, определяя изменение оптической плотности при 340 нм (с. 7). [c.249]

Глицерол-З-фосфатдегидрогеназа — 70 Е/мл, свежеприготовленный раствор на 10 мМ триэтаноламиновом буфере, pH 7,5. В нем не должно содержаться сульфата аммония, который ингибирует триозофосфатизомеразу. [c.250]

В спектрофотометрическую кювету помещают реакционную смесь содержащую (указаны конечные концентрации) 80 мМ буфер, 0,25 мМ НАДН, 0,1 мл глицеральдегид-З-фосфата и 0,05 мл глицерол-З-фосфатдегидрогеназы. Перемешивают и устанавливают величину оптической плотности при 340 нм по шкале спектрофотометра на отметке 0,4—0,5. Добавляют 0,05 мл триозофосфатизомеразы (общий объем пробы — [c.250]

Глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназа (освобожденная от сульфата аммония), не содержащая триозофосфатизомеразы и глицерол-З-фосфатдегидрогеназы — 75 Е/мл, свежеприготовленный раствор на 30 мМ триэтаноламиновом буфере. [c.250]

Глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназа — тетрамер (м. м.= 144 000 Да), построенный из химически идентичных субъединиц. Центральную роль в катализе выполняет цистеиновый остаток. Фермент ингибируется ионами тяжелых металлов. Константы Михаэлиса гли-церальдегид-З-фосфатдегидрогеназы из мышц кролика для НАД+ — 13 мкМ, для глицеральдегид-З-фосфата — 90 мкМ, для фосфата — [c.253]

Активность глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназы измеряют сиектрофотометрически ио нарастанию (в прямой реакции) или по уменьшению (в обратной) поглощения при 340 нм. Ниже приводится только первый вариант. [c.253]

Получение апофермента. Для отщепления НАД+, прочно связанного с мышечной глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназой, препарат фермента обрабатывают норитом (активированный уголь), 500 мг норита суспендируют в 10 мл 10 мМ фосфата натрия, содержащего 5 мМ ЭДТА, pH 7,2. Через 2—3 мин надосадочную жидкость декантируют для удаления мелких частиц норита. Эту процедуру повторяют [c.256]

Активность 3-фосфоглицераткиназы определяют в сопряженной системе, используя в качестве вспомогательного фермента 1)-глицераль-дегид-З-фосфатдегидрогеназу, катализирующую реакцию восстановительного дефосфорилирования 1,3-дифосфоглицериновой кислоты [c.261]

Глицерол-З-фосфатдегидрогеназа — димер, состоящий идипали вых субъединиц. Молекулярная масса фермента из мышц кролика составляет 78000 Да. Глицерол-З-фосфатдегидрогеназа угнетается 5Н-реа-гентами, а также ионами тяжелых металлов. Константы Михаэлиса для НАДН — 11,9 мкМ, глицерол-З-фосфата — 0,18 мМ, НАД+ — [c.267]

Кристаллы отделяют центрифугированием, когда в супернатанте остается меньше 25% альдолазной активности (определение см. на с. 246). Чем полнее отделена альдолаза, тем лучше удается выделение глицерол-З-фосфатдегидрогеназы. Если глицерол-З-фосфатдегидрогеназа начинает кристаллизоваться на этом этапе (ее кристаллы имеют форму игл или пластинок), нужно быстро и на малой скорости от-центрифугировать осадок альдолазы так, чтобы более легкие кристаллы дегидрогеназы остались в супернатанте. Контроль за формой кристаллов осуществляют с помощью микроскопа. [c.268]

Появляются кристаллы с шелковистым блеском. Их отделяют центрифугированием и суспендируют в 1,9 М сульфате аммония ( ракг ия/). К супернатанту медленно (в течение 2—3 сут) добавляют сульфат аммония до достижения концентрации 2,1 М (pH 6,2). При этом кристаллизуется основная масса глицерол-З-фосфатдегидрогеназы. Осадок отделяют центрифугированием и суспендируют в 1,9 М сульфате аммония фракция 2). В супернатанте медленным (в течение нескольких дней) добавлением сульфата аммония молярность повышают до 2,3. Осадок отделяют центрифугированием и также суспендируют в 1,9 М растворе сульфата аммония фракция 3). [c.268]

Используя вспомогательные ферменты — триозофосфатизомеразу и глицерол-З-фосфатдегидрогеназу, за ходом транскетолазной реакции [c.279]

Сульфатно-аммонийная фракция, содержащая триозофосфатизомеразу и глицерол-З-фосфатдегидрогеназу (получение см на с. 290). Для использования ее растворяют в бидистиллированной воде до получения концентрации белка, равной 50— 100 мг/мл. Может несколько дней храниться при —16° С. [c.280]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология