Энзиматические методы

Реактивы для определения молочной кислоты с /г-оксидифенилом (с. 27) или энзиматическим методом (с. 28). [c.51]

Активность гексокиназы определяют энзиматическим методом. В качестве сопрягающего фермента в реакционную среду добавляют дегидрогеназу глюкозо-6-фосфата и НАДФ. Ферментативную реакцию [c.216]

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГЛЮКОЗЫ ЭНЗИМАТИЧЕСКИМ МЕТОДОМ [c.18]

Гликоген отделяют от мешающих определению веществ (глюкозы, сахарозы, гексозофосфатов, глицерина) путем осаждения спиртом на фильтровальную бумагу, затем гидролизуют глюкоамилазой (КФ 3.2.1.3) и определяют энзиматическим методом с глюкозооксидазой. [c.25]

После добавления экстракта пробы 3—6 ставят на инкубацию в водяной термостат при 26° С. После инкубации пробирки помещают в лед и в каждую добавляют по 3 мл раствора трихлоруксусной кислоты. Денатурировавшие белки удаляют. В безбелковом растворе определяют фруктозо-1,6-дифосфат и молочную кислоту. Если предполагают определять содержание фосфоглицериновой кислоты методом бумажной хроматографии и молочной кислоты энзиматическим методом, белки осаждают хлорной кислотой. Безбелковый фильтрат необходимо нейтрализовать 5 н. раствором КОН и осадок перхлората калия удалить (с. 29). В полученном растворе определяют фруктозо-1,6-дифосфат, фосфоглицериновую и молочную кислоты. [c.55]

Для некоторых биологических молекул разработаны энзиматические методы количественного определения. Они основаны на том, что под влиянием специфического действия фермента на определяемое ве щество образуется эквимолекулярное количество продукта реакции,. обладающего характерным спектром поглощения. Так, пировиноград-ную или молочную кислоту можно количественно определить с использованием лактатдегидрогеназы (с. 31). [c.7]

Для определения глюкозо-6-фосфата энзиматическим методом при осаждении белков используют 0,5 н. раствор хлорной кислоты. Из безбелкового раствора хлорную кислоту удаляют в виде перхлората калия (с. 29). Надосадочную жидкость используют для определения глюкозо-б-фосфата (с. 40). [c.66]

ЭНЗИМАТИЧЕСКИЙ МЕТОД С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ [c.31]

Пробы 3—6 после добавления экстракта ставят в водяной термостат при 37°С на инкубацию. После 30 мин инкубации их помещают в лед и приливают равный объем (3 мл) ССЬСООН. Осадок белка удаляют. В безбелковом растворе каждой пробы определяют содержание гликогена и молочной кислоты с /г-оксидифенилом. При определении молочной кислоты энзиматическим методом (с. 27) белки осаждают равным объемом 0,5 н. раствора хлорной кислоты. Из безбелкового раствора хлорную кислоту удаляют в виде перхлората калия (с. 29). Полученный раствор используют для определения молочной кислоты и гликогена. [c.51]

Реактивы для определения глюкозо-6-фосфата энзиматическим методом с глюкозо-6-фосфатдегидрогеназой (с. 41). [c.65]

При определении молочной кислоты энзиматическим методом безбелковый фильтрат нейтрализуют 5 н. раствором КОН и перхлорат калия удаляют (с. 29). В полученном растворе определяют фруктозодифосфат и молочную кислоту. [c.58]

Убыль глюкозо-6-фосфата можно определить и энзиматическим методом, как описано на с. 40. В этом случае белки осаждают хлоркой кислотой. Хлорную кислоту удаляют в виде перхлората калия (с. 29). [c.63]

Рис. 5.4. Схема энзиматического метода секвенирования нуклеиновых кислот, основанного на энзиматическом введении нуклеотида, терминирующего цепь

Глутаминовую-2-Н кислоту получали энзиматическими методами [4, 5], [c.95]

Определение активности пируваткиназы. Активность фермента определяют энзиматическим методом по количеству образовавшегося в ходе реакции пирувата. Метод основан на использовании сопряженной лактатдегидрогеназной реакции (с. 270). За ходом реакции следят на спектрофотометре по уменьшению оптической плотности при 340 нм в результате окисления НАДН. Показания прибора регистрируют каждые 30 с в течение 3 мин. [c.334]

Удаление металлов из вин химическими, физико-химическими и энзиматическими методами [2877]. [c.235]

В сравнительном плане более подходящим является энзиматический метод получения протопластов как более щадящий. Однако при любом способе важен подбор осмотического стабилизатора, [c.515]

Альдольная конденсация глицеринового альдегида с 1-фосфатом диоксиацетона легко протекает под влиянием фермента альдолазы [23, 24] или 0,001 н. раствора гидрата окиси бария [25] с образованием о-фруктозо-1-фосфата, выделенного из смеси углеводов. Вопрос об энзиматических методах синтеза моносахаридов подробно освещается в обзорной статье [26]. [c.7]

Рацемизация является серьезной проблемой в пептидной химии, другую проблему представляет определение степени рацемизации в ходе пептидного синтеза. Недостатком всех использовавшихся до настоящего времени методов была необходимость очистки исследуемых соединений перед проверкой их оптической чистоты. С другой стороны, чтобы получить достоверные результаты, в ходе очистки после синтеза любые фракционирования должны быть полностью исключены. Определенные трудности встречаются при измерении оптического вращения, так как нужно располагать чистыми соединениями и взвешивать их. Та же необходимость существует и в энзиматических методах, поскольку нужно избегать блокирования фермента примесями. Энзиматические методы вполне пригодны для исследования очищенных пептидов, но из-за названных причин в меньшей степени хороши для исследования сырой реакционной смеси. [c.174]

Реактивы для определения молочной кислоты с п-оксидифени-лом (с. 27) или энзиматическим методом с лактатдегидрогеназой (с. 28). [c.50]

Глюкозо-6-фосфат можно определить также энзиматическим методом в системе, содержащей глюкозо-6-фосфатдегидрогеназу и НАДФ (с. 40). [c.61]

Примечание. Если в препарате дегидрогеназы глюкозо-6-фос-фата имеется примесь дегидрогеназы-6-фосфоглюконата, при энзиматическом методе определения активности фосфоглюкозоизомеразы образуется 6-фосфоглюконат — конкурентный ингибитор фермента. Учитывая количество образовавщегося б-фосфоглюконата, вносят поправку при расчете активности фосфоглюкозоизомеразы. [c.234]

Определение активности аспартатаминотрансферазы. Активность фермента определяют энзиматическим методом по количеству образовавшейся щавелевоуксусной кислоты в процессе прямой аминотранс-феразной реакции. Метод основан на использовании сопряженной малатдегидрогеназной реакции согласно схеме [c.352]

Определение активности фруктозо-1,6-дифосфатазы. Активность фермента определяют энзиматическим методом по количеству образовавшегося фруктозо-6-фосфата. Метод основан на использовании системы двойного ферментного сопряжения с участием глюкозо-6-фос-фатизомеразы и дегидрогеназы глюкозо-6-фосфата согласно схеме [c.355]

Определение в супернатанте глюкозо-6-фосфата проводят энзиматическим методом в системе с дегидрогеназой глюкозо-6-фосфата согласно схеме (с. 41). За ходом реакции следят на спектрофотометре по увеличению оптической плотности при 340 нм в результате восстановления НАДФ. Показания прибора регистрируют после доведения реакции до конца. [c.372]

Энзиматический метод секвенирования основан на энзиматическом введении нуклеотида, терминирующего полинуклеотидную цепь (рис. 5.4). В этом случае обычно используют дидезоксирибо-нуклеозидтрифосфаты, в которых дезоксирибоза-З -ОН, представленная в нормальных нуклеотидах, отсутствует. Такой модифицированный нуклеотид, внедряясь в цепь ДНК с помощью ДНК-полимеразы, блокирует присоединение следующего нуклеотида. Синтез in vitro молекулы ДНК в присутствии затравки (праймера) и небольшого количества одного из таких модифицированных нуклеотидов приводит к образованию фрагментов ДНК в виде лесенки . Если для получения таких фрагментов применять меченую ДНК (обычно проводят четыре реакции синтеза с использованием различных нуклеотидов, терминирующих цепь), а электрофоретический анализ проводить на четырех дорожках геля, то можно определить последовательность нуклеотидов. В настоящее время используют модифицированный метод, сводящийся к флуоресцентному анализу наборов фрагментов ДНК в процессе движения по одной дорожке геля. [c.109]

Этот метод представляет собой видоизменение метода I с использованием более легкого способа разделения оптических изомеров по методу Фишера и Джекобса [4]. Разделение антиподов описано Веллуцом [5], а энзиматические методы разделения оптических изомеров были использованы в работе Элвина [6, 7]. Способ расщепления описан Накада [8]. [c.181]

Энзиматический метод разделения оптических изомеров в течение длительного времени применяли главным образом для того, чтобы определить, можно ли исследуемое оптически неактивное вещество разделить на антиподы. Так, например, мезовинная кислота не приобретает оптической активности под действием Peni illium glau um. Препаративное использование этого метода ограничено тем, что теряется наиболее интересный природный энантиомер. Однако иногда удается вместо разрушения природного субстрата осуществить при помощи энзимов лишь такое изменение его специфической функциональной группы, которое достаточно для отделения неизмененного изомера. Такой метод успешно применяется для разделения на антиподы ( )-а-аминокислот (см. том И 31.7). [c.103]

Окислению по Оппенауэру следует отдать предпочтение перед энзиматическим методом также и в случае ненасыщенных или других чувствительных к окисляющим агентам спиртов. Упомянутый метод был, например, с успехом применен для дегидрирования витамина А, который был превращен в соответствующий альдегид с помощью дизтилкетона в присутствии третичного бутилата алюминия [33]. [c.278]

Соотношение между конфигурациями двух соединений может быть установлено чисто химическими методами—-расщеплением или синтезом, не затрагивающим асимметрического центра, замыканием. цикла между заместителями в циклических соединениях или реакцией замещения, затрагивающей асимметрический центр, но являющейся стереоспецифичной. В ряде случаев необходимые сведения могут быть получены изучением кинетики реакции замещения у асимметрического центра или осуществлением частичного асимметрического синтеза. Иногда могут применяться и чисто физические методы-определение молекулярного вращения, обнаружение квазирацемических соединений по кривым плавления, а также рентгенография и электронная диффракция. Для многих биологически важных соединений могут оказаться полезными энзиматические методы. [c.167]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология