Апофермент, получение

Уже в 1926—1929 гг. лауреатами Нобелевской премии Дж. Самнером и Дж, Нортропом были выделены первые ферменты в кристаллической форме — уреаза, пепсин и трипсин, которые, как было установлено, представляли собой чистые белки. В 1930-х годах были выделены внутриклеточные ферменты — желтый фермент Варбурга и алкогольдегидрогеназа, полученная в кристаллическом виде. Число выделенных в кристаллической форме ферментов с тех пор постоянно возрастало. При этом приходили все новые доказательства системной природы ферментов, состоящих из белковой части (апофермента) и небелковой части (кофермента), которые обеспечивают целостность структуры молекулы фермента и единство его каталитического действия. [c.180]

СВЯЗЫВАНИЕ КОФЕРМЕНТА С АПОФЕРМЕНТОМ И ПОЛУЧЕНИЕ ИСКУССТВЕННЫХ ФЕРМЕНТОВ [c.199]

Константа скорости второго порядка, полученная для модельных систем, представляет собой произведение константы присоединения к внешней сфере (/(о) и константы скорости первого порядка ( 1 для замещения воды. Возможны различные предположения о причинах низкой скорости взаимодействия цинка с апоферментом. По-видимому, взаимодействие с металлом не сопровождается значительной перестройкой конформации белка. Необходимо учитывать, что в металлоферменте ион цинка находится на дне глубокой полости с несколько необычной геометрией (рис. 16.19). Вероятно, свой вклад вносят и процессы вытеснения воды из координационной сферы. [c.580]

Здесь ыетионинсинтетаза (апофермент ) связывается с сорбентом и может быть получен в виде холофермента путем элюирования после расщепления угле- [c.394]

Получение апофермента. Для отщепления НАД+, прочно связанного с мышечной глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназой, препарат фермента обрабатывают норитом (активированный уголь), 500 мг норита суспендируют в 10 мл 10 мМ фосфата натрия, содержащего 5 мМ ЭДТА, pH 7,2. Через 2—3 мин надосадочную жидкость декантируют для удаления мелких частиц норита. Эту процедуру повторяют [c.256]

Чтобы сделать выбор между двумя возможными объяснениями эффекта, определяют концентрацию НАД, необходимую для получения холоформы ЛДГ, добавляя к комплексу апо-ЛДГ с зондом (с. 340) НАД до тех пор, пока флуоресценция аурамина О не перестанет увеличиваться. Затем в отдельной пробе титруют холо-ЛДГ аурамином О (так же, как апо-ЛДГ) определяют число участков и величину к для комплекса аурамина О с холо-ЛДГ. В случае совпадения полученных значений с величинами, определенными для апофермента, увеличение интенсивности флуоресценции зонда при связывании НАД с апо-ЛДГ объясняют изменениями структуры аураминсвязывающих областей молекулы белка в результате изменения состояния активного центра. [c.344]

М. Пирас и В. Нокс [59] показали, что молекула апофермента имеет два участка один — каталитический, а другой — для связывания гематина. Они также установили, что некоторые гомологи триптофана, как и сам триптофан, способствуют реакции связывания апофермента с нростети-ческой группой. Более того, аналоги, способствующие этой реакции, оказались эффективными индукторами этого фермента у крыс с удаленными надпочечниками независимо от того, было у этих аналогов сродство к каталитическому участку или нет. Авторы попытались объяснить полученные результаты с помощью модели [60], предложенной ими за двадцать лет до создания модели оперона. Согласно этой модели, считается, что фермент находится в динамическом равновесии со своим предшественником. Субстрат или жестко связанный кофермент, соединяясь с белком, могут повышать его устойчивость к распаду и тем самым увеличивать количество активного фермента. Соответственно равновесие будет смещаться в сторону образования активной формы фермента, потому что синтез фермента продолжается, а распад — нет. В рассматриваемой [c.76]

Итак, цель данного обзора — понять, как природа использует белок для усиления свойственной простым железопорфиринам ка-талазной и пероксидазной активности до уровня, необходимого для нормального метаболизма живого организма. После общего описания ферментов в разд. 8.1 мы обсудим процессы обратимой диссоциации этих белков на апофермент и кофермент и использование такой диссоциации для получения синтетических ферментов, а также для изучения роли металла и порфириновых боковых цепей в построении белка и в ферментативных реакциях (разд. 8.2). Далее мы рассмотрим механизмы реакции и природу промежуточных соединений (разд. 8.3). Интересный вопрос о том, почему гидроперок-сидазы, по-видимому, всегда связывают протон одновременно с присоединением одноосновного аниона, будет обсуждаться в разд. [c.195]

В последнем варианте опыта образование фосфоглицериновой кислоты оказалось бы пониженным, то это указывало бы на повреждение белка—апофермента дегидразы глицеринальдегида. В наших опытах реакционная смесь состояла из равных объемов водного экстракта измельченной ткани сердца (нормального или миокардитного ) и фосфатносолевого буферного раствора (pH 7,7), который содержал ФрДФ и ЫаР. Полученную смесь делили на несколько порций, к которым добавляли креатин и затем пируват, АТФ, ДПН, порознь или вместе. Инкубацию проводили в течение 30 мин. при 26° и затем в безбелковом трихлоруксусном фильтрате определяли количество образовавшейся фосфоглицериновой кислоты [2]. На рис. 5 приведены данные, полученные на измельченной ткани нормального [c.121]

Принципиально важно определение максимальной скорости реакции и вычисление значения константы скорости лимитирующей стадии реакции, которая отражает наиболее медленный кинетический процесс, протекающий в активном центре фермента. Проведение реакции в условиях насыщения по субстратам и апоферменту (02>7-10- М, ВН2 1,3-10 М, концентрация апо-фермента Э>2-10- М, АА 2-10 М) позволяет определить максимальную скорость реакции. В этих условиях концентрация активных центров фермента соответствует концентрации гемина в предположении, что на один активный центр приходится одна про-стетическая группа. Из предельной максимальной скорости реакции определена константа скорости лимитирующей стадии кат= = 2,5 с- , представляющая собой число оборотов геминовой группы в единицу времени. Полученная информация является весьма важной с точки зрения количественного расчета скорости биосинтетической реакции и оптимизации ее протекания. [c.129]

Равновесные исследования показали, что присутствие 5-фос-фатной группы в кофакторе существенно увеличивает ассоциацию кофактора с апоферментом. Исследования были проведены с использованием методов спектрофотометрии, спектрофлуориметрци, кругового дихроизма. Полученные результаты указывали на то, [c.224]

Нужно отметить, что между этими двумя очень сходными реакциями нельзя провести резкой грани. В присутствии некоторых субстратов, папример спиртов, каталаза действует подобно пероксидазе [116]. Кристаллическая пероксидаза была выделена из хрена Теореллом [117]. Для очистки фермента им было использовано несколько методов адсорбция на алюминии, осаждение пикриновой кислотой, электрофорез и фракционированное осаждение сернокислым аммонием. Молекулярный вес полученной пероксидазы оказался равным 44 000 [пН Из молока была выделена другая пероксидаза с молекулярным весом 93 ООО, получившая название лактопероксидазы [118]. Молекула пероксидазы имеет резко выраженное асимметрическое строение (отношение осей 7 1) [117]. Простетическая группа может быть отщеплена от пероксидазы под действием ацетона и соляной кислоты при —15°. На основании данных, полученных при электрометрическом титровании и при изучении зависимости активности фермента от pH, было сделано заключение, что простетическая группа пероксидазы соединена с апоферментом не только посредством атомов железа, но также при помощи двух карбоксильных групп протогемина. Фермент-субстратные комплексы каталазы и пероксидазы были рассмотрены выше. [c.298]

Первый желтый фермент, открытый в дрожжах Варбургом и Христианом [139], был получен Теореллом [140] в кристаллическом виде. Из дрожжей этот фермент извлекается водой и осаждается из водного экстракта ацетоном или метанолом. При диализе против разбавленной соляной кислоты или при действии высоких концентраций метанола от фермента отщепляется активная группа, имеющая желтую окраску. Соляная кислота денатурирует белковый компонент фермента, на что указывает увеличение количества свободных сульфгидрильных групп после удаления соляной кислоты диализом белок (апофермент) рена-турируется и вновь приобретает способность соединяться с желтой активной группой [140]. Прежде предполагали, что этой группой является рибофлавинфосфат. [c.301]

Белковый компонент карбоксилазы (второго фермента, играющего очень важную роль в брожении) получен при действии на фермент разбавленных растворов щелочей. Простетической группой дрожжевой карбоксилазы является тиаминпирофосфат [173], фосфорные группы которого связаны, повидиз,юму, с белковым компонентом через ионы магния. Возможно также, что апофермент и кофермент соединены между собой через четвертичный азот тиамина [174]. Бактериальные декарбоксилазы отщепляющие углекислоту от тирозина и других аминокислот, содержат в качестве простетической группы пиридоксальфосфат [175]. Белковый компонент этих декарбоксилаз еще не изучен. [c.306]

При удалении из ФДФ-альдолазы из дрожжей связанного цинка с помощью диализа против ЭДТА получен каталитически неактивный апофермент, молекулярные свойства которого сходны со [c.481]

Обработка фермента 1,10-фенантролином или 8-оксихинолин-сульфонатом [20, 83, 84] в течение 15 дней при pH 5,5 привела к удалению цинка(II). Полученный апофермент совершенно неактивен, хотя и довольно стабилен, так как после прибавления цинка он полностью восстанавливает свою активность [20, 73, 83]. Удаление металла приводит к небольшому изменению спектров ДОВ, но основные физико-химические свойства апо- и металлофермента одинаковы. Существенны в этом отношении данные о том, что единственной особенностью разностных карт электронной плотности между кристаллами апо- и Zn-карбоангидразы является максимум плотности, отвечающий ионам цинка (рис. 16.4) [85]. Кристаллы металло- и апофермента изоморфны. Последние могут быть получены при длительной (16 суток) обработке кристаллов нативной карбоангидразы 0,01 М раствором 2,3-димеркаптопропанола-1, содержащим 2,45 М (NH4)2S04, в атмосфере водорода [85]. [c.577]

В присутствии восстановленного кофермента в среде инкубирования ЛДГ и мембран ее активность статистически достоверно не отличается от таковой для свободного фермента. Итак, полученные результаты можно объяснить тем, что NADH, соединяясь с апоферментом, вызывает его конформационные изменения, которые затрудняют адсорбцию- эермента на подложке биологической природы. Эти данные согласуются с результатами ряда работ [c.178]

Соединяя синтетическую и полученную из натуральных продуктов лактофлавинфосфорную кислоту с апоферментом, белковым носителем желтого фермента, удалось синтезировать желтый [c.97]

Получение препарата апофермента триптофаназы [c.72]

Букин Ю, В Сергеев А, В. Получение препарата апофермента триптофаназы Es heri hia oli, освобожденного от примеси холофермента.— Прикладная биохимия и микробиология , 1970, т. 6, № 4, с. 456-461. [c.371]

Найдено, что кофактор PQQ связывается с несколькими ферментами, в том числе метанолдегидрогеназой, способствующей окислению метанола в метилотрофных бактериях [10]. Выделить метанолдегидрогеназу из этих микроорганизмов нетрудно, следовательно, и получение кофактора не является проблемой. Более того, показано, что при объединении PQQ из других источников с апоферментом GDH получается активный холофермент. Поэтому в данном случае необходимо клонировать только ген, который кодирует апофермент. [c.97]

Смотреть страницы где упоминается термин Апофермент, получение: [c.507] [c.80] [c.198] [c.410] [c.372] [c.185] [c.242] [c.249] [c.200] [c.371] [c.304] [c.30] [c.457] [c.475] [c.371] [c.282] [c.124] [c.142] [c.70] [c.68] [c.70] [c.73] [c.96] [c.159] [c.162] [c.301]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология