Электрофорез эндосмос

Так, при электрофорезе в агаровом геле интенсивность эндосмоса преобладает над электрофорезом и частицы многих крупных белков (Р2- и у-глобулинов), несмотря на то, что они имеют отрицательный заряд,, движутся к катоду. [c.191]

Из этих выведенных для эндосмоса и электрофореза уравнений. можно сделать следующие выводы [c.204]

Если есть опасение, что некоторые белки, особенно щелочные, при pH 8,6 окажутся заряженными положительно и при электрофорезе будут мигрировать к катоду, то лунку препарата следует еще отодвинуть от края пластины. После окончания электрофореза, особенно если его ведут в агаре, нередко оказывается, что некоторые белковые зоны и соответствующие им дуги преципитации (см. ниже) располагаются со стороны катода по отношению к лунке чаще это бывает не за счет положительных зарядов соответствующих белков, а в результате эндосмоса. Среди белков крови наиболее расположены к смещению в сторону катода иммуноглобулины, слабее других мигрирующие под действием электрического поля. [c.135]

На стыке гелей ПААГ и агарозы в силу заметного различия степени эндосмоса может иметь место смазывание линий иммунопреципитации и искажение ее картины, поэтому используют специальный метод наложения полосы ПААГ на гель агарозы. Последний формируют из двух частей. У края пластины, который впоследствии будет обращен к катоду, заливают слой геля агарозы без антисыворотки с таким расчетом, чтобы он был на несколько миллиметров шире, чем полоса ПААГ, которую предстоит уложить на этот слой вровень с наружным его краем. Вплотную к пустому слою агарозы на остальной площади пластины слоем такой же толщины формируют гель агарозы в смеси с антисывороткой. Линия раздела двух слоев должна быть параллельна катодному краю пластины и ориентированной по нему полосе ПААГ. Переносить и накладывать эту последнюю на гель агарозы удобно с помощью упомянутой выше тонкой металлической пластинки. Перед наложением пластинку следует повернуть полосой геля к себе, а затем перевернуть гелем вниз и таким образом уложить его на поверхность агарозы. Электродные фитили накладывают на наружный край полосы ПААГ (катодный) и на противоположный край пластины геля агарозы. В ходе электрофореза во втором направлении антигены из ПААГ переходят в гель агарозы и далее мигрируют в ней, образуя пики преципитации. Различие степени эндосмоса в этом случае никаких проблем не создает. [c.151]

Температуры плавления и гелеобразования зависят от содержания в агарозе метоксильных групп, которое может достигать 3—4%. Наличие этих групп затрудняет гелеобразование. В агарозе неизбежно содержатся и эфиры серной кислоты. Их присутствие существенно влияет не только на температуры плавления и застывания гелей, но и на сам процесс электрофореза. В частности, именно эфиры серной кислоты обусловливают сильно выраженное при электрофорезе в гелях агарозы явление эндосмоса, сущность которого сводится к следующему. [c.17]

В частности, именно эфиры серной кислоты обусловливают сильно выраженное при электрофорезе в гелях агарозы явление эндосмоса, сущность которого сводится к следующему. [c.17]

Когда влажную бумагу помещают в электрическое поле, неподвижная бумажная фаза, будучи заряжена отрицательно, вызывает эндосмотический поток жидкости по направлению к катоду. Полярность бумаги можно изменить химической обработкой [6], но обычно мирятся с наличием этого потока или нейтрализуют его до некоторой степени наложением противоположно направленного гидростатического течения. Эндосмотический поток приблизительно пропорционален градиенту потенциала и уменьшается с увеличением ионной силы буферного раствора. Его можно измерить при помощи электронейтральных или имеющих очень малую подвижность веществ. В тех случаях, когда требуется внести поправку на эндосмос в величины подвижности, подбирают такое вещество, молекулярный объем которого близок к молекулярному объему исследуемых молекул.В опытах по электрофорезу белков для этой цели используют декстраны, а в опытах по электрофорезу несложных ионов, таких, как аминокислоты или пептиды, используют глюкозу, сахарозу, перекись водорода, о-нитроанилин [6] или 2,4-динитрофенил-этаноламин [7]. [c.248]

Большинство преципитирующих антител относится к классу иммуноглобулинов О (1дО), обладающих лишь очень слабым отрицательным зарядом при pH 8—9. Поэтому электроосмоти-ческий поток смещает 1 0 к катоду. Электроэндосмос заметно уменьшается при замене агара агарозой. Путем подбора определенных соотношений агара и агарозы можно регулировать скорость эндосмоса, создавая тем самым оптимальные условия для электросинереза. Очевидно, что антитела следует помещать ближе к аноду, а антиген — ближе к катоду. Если расположить рядом несколько лунок с антигенами, то последние можно сравнивать между собой подобно тому, как это делается в методе двойной иммунодиффузии [186]. Видимые линии преципитации образуются в течение 1—2 ч. Избыток реагентов удаляют, продолжая электрофорез после образования преципитатов. При этом нет надобности отмывать гель перед окрашиванием, что позволяет в течение 3—4 ч получить полную картину окрашенных полос преципитации. [c.247]

Заметим еще, что для ИЭФ, особенно после установления градиента pH н соответственного снижения электропроводности, характерны более высокие значения напряженности электрического поля, чем для электрофореза. Между, тем, явления эндосмоса выражены тем сильнее, чем выше напряженность поля. Следует также иметь в виду, что эта напряженность вследствие различия электропроводности разных амфолитов (см. выше) оказывается неодинаковой в разных участках градиента. Отсюда следует, что и течение жидкости в результате эндосмоса будет неравномерным вдоль градиента. Из областей повышенной напряженности поля жидкость будет вытекать быстрее, чем поступать в них из соседних областей, где напряженность поля ниже и эндосмос выражен слабее. Это может привести к обсыханию некоторых областей геля и переполнению других. Обсыхание влечет за собой дальнейшее увеличение сопротивления, напряженности поля и эндосмоса. В конечном счете могут развиться существенные искажения градиента pH. [c.19]

Для разделения антигенов вместо электрофореза можно воспользоваться ИЭФ. Такая замена описана еще в 1978 г. [Weiss et al., 1978]. В то время еще не выпускалась агароза со слабой способностью к эндосмосу, пригодная для ИЭФ. Авторы были вынуждены воспользоваться 4%-ным ПААГ, что приводило к значительному увеличению продолжительности иммунодиффузии (до 3 сут). Использование названных в части I специальных марок агарозы для ИЭФ делает иммуноэлектрофокусирование столь же доступным методом, как иммуноэлектрофорез. Впрочем, высокая разрешающая способность ИЭФ имеет в этом случае и оборотную сторону. Независимо от формы лунки белки будут фокусироваться в виде узких полос, поэтому дуги преципитации будут, очевидно, иметь менее удобную для расшифровки форму. [c.139]

В большинстве случаев электрофорезом в агарозе разделяют отрицательно заряженные макромолекулы, мигрирующие к аноду. Эндосмос направлен в противоположную сторону и ухуд- [c.17]

Насколько существенно эндосмос может влиять на результаты электрофореза, видно из даннь/х Джонсона и др. [Johnson et al., 1980]. Авторы использовали три типа агарозы с различной способностью к эндосмосу (значения — т, составляли соответственно 0,081, 0,175 и 0,441 см. ниже). В одном II том же опыте на параллельных полосках 1%-ной агарозы этих типов они разделяли смесь трех форм репликативной ДНК фага ФХ 174-сверхскручеиной, кольцевой и линейной. С усилением эндосмоса не только происходило сильное замедление скорости миграции всех ДНК (более чем втрое), но и (что хуже) менялось взаимное расположение полос (рис. 4). По-видимому, различные формы ДНК увлекаются потоком эндосмоса по-разному. [c.18]

Степень эндосмоса количественно оценивают с помощью коэффициента относительной миграции (—/п,). Знак минус здесь только напоминает о том, что за счет эндосмоса нуклеиновые кислоты сносит в сторону, противоположную направлению их миграции. Коэффициент представляет собой отношение скоростей миграции незаряженного полимера (за счет только эндосмоса) и сходного с ним по структуре полианиона при электрофорезе в агарозе данного типа. Для обозначения типов агарозы ниже будет использована номенклатура фирмы Miles . По данным каталогов, в частности по значениям — /Пг, ее нетрудно сопоставить с обозначениями других фирм, тем более что большинство из них получает свои препараты от одного- и того же производителя — фирмы Marine olloids In . . [c.18]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология