Трансфераза терминальная

Рис. 30-20. Использование терминальной трансферазы для достраивания концов ДНК с целью обеспечения фрагментов ДНК комплементарными липкими концами.

Существует также большое число ферментов, аналогичных полимеразам, но способных к безматрнчному синтезу полинуклеотидов. Из них наибольшее применение нашла концевая дезокси-нуклеотидилтрансфераэа (терминальная трансфераза). Концевая нуклеотидилтрансфераза (из тимуса теленка) осуществляет последовательное присоединение нуклеотидных звеньев к З -ОН-кон-цевым группам ДНК. Субстратами служат дезоксирибонуклео- [c.351]

Терминальная трансфераза. Фермент, способный добавлять нуклеотидные остатки какого-то одного вида к З -концу цепей ДНК. [c.1019]

Терминальная дезоксинуклеотидилтрансфераза. Терминальная трансфераза (добывается из тимуса теленка) способна наращивать на концах фрагментов ДНК однонитевые участки путем последовательного присоединения к З ОН-концам обеих нитей нуклеотидных остатков из тех дезоксинуклеозидтрифосфатов, которые [c.185]

Концевые нуклеотиды, присоединенные ферментами — нуклеотидные остатки, присоединяемые к концам полинуклеотидных цепей концевой, или терминальной, трансферазой. Этот фермент наряду с ДНК-полимеразой присутствует в экстрактах клеток. Он не требует участия матрицы и катализирует присоединение нуклеотидных звеньев одного из трифосфатов в концевые положения молекулы затравочной ДНК. [c.57]

Терминальная трансфераза. Фермент, присоединяющий нуклеотиды одного типа к З -концам молекулы ДНК. [c.52]

Субстратом для терминальной трансферазы являются также однонитевые разрывы в ДНК. Поэтому препараты ее не должны содержать эндонуклеазы [c.186]

Применение терминальной трансферазы в секвенировании ДНК ферментативным методом будет рассмотрено ниже, в разделе 2,7. [c.78]

Как видно из рис 65,терминальная трансфераза катализирует реакцию присоединения гомополимерных последовательностей дезоксицитидина Таким образом создаются предпосылки для последующего клонирования, в частности, используя плазмидный вектор (см) PBR322, несущий гены устойчивости к ампициллину и тетрациклину После расщепления рестриктазой (см) Pst 1 (из Providen ia stuartii) эта плазмида имеет гомополимерные последовательности dr [c.187]

Новые комбинации генов можно создать и искусственным путем в лабораторных условиях с помощью таких ферментов, как рестриктирующие эндонуклеазы, ДНК-лигаза и терминальная трансфераза. Чтобы встроить чужеродный ген в геном клеток Е. соИ, этот ген сначала пришивают к вектору, которым служит либо плазмида Е. соИ, либо ДНК фага Х. Полученная рекомбинантная ДНК может затем попасть в клетку Е. oli, ковалентно включиться в ее хромосому и в составе этой хромосомы реплицироваться. Если новый ген, содержащийся в рекомбинантной ДНК, обладает подходящими сигнальными последовательностями, указывающими начало и конец транскрипции, то такой ген будет транскрибироваться и транслироваться с образованием соответствующего белкового продукта. Многие гены из животных клеток уже были введены в бактерии, а бактериальные гены в свою очередь были встроены в эукариотические клетки. С помощью бактерий, в геномы которых введены соответствующие гены, можно получать применяемые в медицине белковые препараты-инсулин, гормон роста и интерфероны. [c.991]

Терминальная трансфераза из тимуса теленка (терминальная дезоксирибонуклеотидилтрансфераза), осуществляющая последовательное присоединение дезоксирибонуклеозидмонофосфа-тов из пула дезоксирибонуклеозидтрифосфатов к З -ОН-группам молекул ДНК, используется для введения радиоактивной метки в составе меченых нуклеотидов в 3 -концы ДНК, а также присоединения к 3 -концам фрагментов ДНК (особенно кДНК) протяженных гомополимерных последовательностей нуклеотидов коннекторов) для последующего их клонирования. [c.65]

Экспрессия Т-клеточных маркеров в процессе созревания Т-клеток у человека. В стволовых клетках тимуса присутствует фермент терминальная дезоксинуклеотидил-трансфераза (ТдТ) на стадии II ее активность уменьшается, а в клетках мозговой зоны полностью исчезает. В процессе дифференцировки появляется несколько поверхностных гликопротеинов. На мебране корковых тимоцитов, находящихся на II стадии развития, присутствует молекула D1. которой уже нет на клетках мозгового слоя. Маркеры D2 и D7 (общий маркер Т-клеток) появляются на очень ранних стадиях дифференцировки и сохраняются до стадии зрелой Т-клетки. Зрелые Т-клетки сохраняют и молекулу D5, которая также появляется на ранней стадии. Молекула СОЗ вначале, на стадии I, экспрессируется в цитоплазме (цито), а затем и на клеточной поверхности, одновременно с ТкР. У большинства клеток на стадии II поверхностные молекулы СОЗ и аР-ТкР присутствуют в небольшой концентрации, но она значительно возрастает на стадии [c.222]

Терминальную трансферазу используют для создания на соединяемых фрагментах ДНК искусственных липких концов, например, олиго(0А) и олиго((1Т). Этот фермент способен синтезировать гомополимеры длиной до нескольких сотеч нуклеотидных остатков. Однако для эффективного объединения фрагментов к каждому из их концов добавляют не более 10—40 остатков. Длина образующихся на концах фрагментов ДНК гомополимеров контролируется изменением условий реакции. [c.186]

Терминальная трансфераза осуществляет нематричный синтез по-линуклеотидной цели ДНК и способна включать произвольное количество нуклеотидов на 3 -конце. Однако в связи с тем, что для секвенирования ДНК требуется наличие фрагментов с гомогенными мечеными концами, необходим этап щелочного гидролиза, обычно осуществляемого пиперидином, с целью удаления достроенных нуклеотидов, кроме первого, и остатка фосфорной кислоты от второго. Таким образом, фрагмент ДНК, меченый подобным образом, будет нести в своем 3 -конце один дополнительный нуклеотид и два меченых остатка фосфорной кислоты. Более простой путь, исключающий этап гидролиза, для получения фрагментов ДНК с гомогенными мечеными 3 -концами с помощью терминальной трансферы достигается при использовании в качестве меченого предшественника или дидезоксинуклеотид трифосфа- [c.23]

Место расщепления субстрата не играет роли при физическом картировании ДНК. Но существует ряд задач, для которых структура концов имеет вполне определенное значение. Фрагменты с выступающим З -концом могут быть удлинены с помощью терминальной трансферазы [326]. Это находит применение в опытах по клонированию ДНК [187]. Наличе липких концов облегчает получение рекомбинантных ДНК in vitro. Однако рекомбинанты можно получать только с фрагментами, образованными действием на субстрат одной и той же рестриктазы или рестриктаз, узнающих различающиеся последовательности, но образующих идентичные липкие концы. Примерам может быть пара рестриктаз BamH I и Sau3A I, узнающих соот- [c.64]

В тех случаях, когда рестриктаза расщепляет ДНК с образованием З -выступающих концов, 5 -киназная метка фрагментов позволяет определить лишь меньшую часть узнаваемой последовательности. Для полной идентификации сайта необходимо провести анализ З -концевой структуры рестриктов. Робертсом [217] было предложено в таких случаях для введения З -концевой метки использовать терминальную трансферазу. Практически этот подход впервые был реализован в опытах по определению специфичности рестриктазы Крп I [274]. Анализ З -меченой ДНК проводится как и в случае 5 -концевой метки, с той лишь разницей, что для получения продуктов частичного гидролиза используются микрококковая нуклеаза и фосфо-диэстераза селезенки, т. е. нуклеазы, расщепляющие ДНК с образованием З -фосфатов. [c.176]

Смотреть страницы где упоминается термин Трансфераза терминальная: [c.209] [c.103] [c.272] [c.529] [c.303] [c.456] [c.500] [c.186] [c.188] [c.981] [c.302] [c.39] [c.58] [c.71] [c.71] [c.160] [c.40] [c.186] [c.252] [c.22] [c.113] [c.161] [c.229] [c.288] [c.291] [c.292]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология