Субтилизины, комплексы

Механизм связывания субстрата аналогичен у всех известных-сериновых протеаз [537], включая субтилизин [627]. Поскольку-субстратами сериновых протеаз являются белки, выяснение механизма образования комплексов этих ферментов с их субстратами также дает информацию о взаимодействии белок—белок. [c.246]

Связь с 01у-193 слабая, однако по мере увеличения длины двойной связи между атомами углерода и кислорода в ходе реакции и превращения ее в одинарную связь между атомом кислорода и 01у-193 становится достаточно прочной [32]. По строение моделей для субтилизина приводит к аналогичному, хотя и отличающемуся в деталях механизму [35]. Изначально карбонильный кислород не располагается между двумя ЫН-группами в фермент-субстратном комплексе, а занимает это положение по мере образования тетраэдрического промежуточного соединения. Предполагается также, что водородная связь между Ы-ациламиногруппой субстрата и 5ег-214 образуется только в тетраэдрическом промежуточном соединении. [c.322]

Нековапентные семисинтезы основаны на том факте, что различные белки после расщепления на фрагменты и их разделения прн рекомбинации образуют биологически активные нековалентные комплексы. Классический пример — рибонуклеаза А из поджелудочной железы быка (рис. 3-24), которая расщепляется бактериальной протеазой субтилизином на так называемые 5-пептид (1—20) и 5-белок (21—124), а после рекомбинации разделенных продуктов расщепления показывает полную ферментативную активность. Для рекомбинации с нативным 5-белком использовались аналоги 5-пептида, синтезированные химически, при этом были получены ценные данные по связи между структурой и функцией. [c.218]

В 1958 г. Ф. Ричардс показал, что в определенных условиях субтилизин расщепляет в РНКазе пептидную саязь А1а-20— Ser-2l. Образующиеся фрагменты были названы S-пептидом (остатки 1 — 20) и S-белком (остатки 21 — 124) за счет нековалентных взаимодействий фрагменты образуют комплекс, названный РНКазой S. Этот комплекс обладает почти полной каталитической активностью нативного фермента в изолированном виде S-пептид и S-белок неактивны. Далее было установлено, что синтетический пептид, идентичный по последовательности фрагменту S-пептида, содержащему остатки с 1 по 13, восстанавливает активность S-белка, однако более короткий пептид, содержащий остатки с 1 по II, такой способностью не обладает. Полученные данные позволили сделать заключение о токГ, что соответствующие остатки His-12 или Met-13 (или оба этих остатка) входят в активный центр ферменту. [c.194]

Структурные различия комплексов EL и EL в большинстве случаев остаются неясными. Так, при взаимодействии субтилизина с арилборными кислотами име ются обоснованные данные [28641 о том, что первый комплекс является сорбционным, тогда как второй - продукт oлLобразования борнокислого остатка и гидроксильной группы серина активного центра [c.277]

При другом общем подходе полусинтеза белков используют протеолитические ферменты для лигирования пептидов. В этом случае для обращения протеолитической реакции условия реакции изменяют таким образом, что аминолиз промежуточного пептидил-ферментного комплекса становится предпочтительнее его гидролитического расщепления. Необходимые условия создаются путем включения в реакционную смесь органических растворителей, таких как глицерин, диметилформамид или ацетонитрил. При наличии в реакционной смеси второго пептида в процессе аминолиза происходит его объединение с пептидом из комплекса посредством амидной связи [52,53]. Обратный протеолиз был успешно использован для лигирования пептидов с папа-ином, трипсином и субтилизином. С использованием такого рода [c.307]

В связи с высокой чувствительностью фермента к протеолизу, образование разных форм КФ, активность которых в большей или меньшей степени зависит от Са +, связано, возможно, с действием тканевых протеиназ. Но в литературе отсутствуют какие-либо сведения, подтверждающие это предположение. По данным Коэна [19], концентрация Са + для полумаксимальной активации даже при незначительной деградации КФ трипсином равна 0,05 и 0,07 мкМ соответственно при pH 8,2 и 6,8, что в 300 раз ниже, чем для неактивированной КФ. После протеолиза КФ трипсином [14] ее активность и активность выделенных из неактивированной киназы комплексов уб и ауб на 25—307о проявлялась в отсутствие Са + [59, 120], а низкомолекулярный фрагмент, полученный после протеолиза КФ субтилизином, вообще не требовал для своей активности добавления металла (см. рис. 2) [34]. [c.69]

Аддукт сульфит-НАД связывается с аполактатдегидрогеназой сердца свиньи в 1000 раз прочнее, чем НАД. Такой комплекс устойчив против протеолитического действия субтилизина [24]. [c.18]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология