Гибридомная техника

Значение инженерной энзимологии, как и вообще биотехнологии, возрастет в будущем. По подсчетам специалистов, продукция всех биотехнологических процессов в химической, фармацевтической, пищевой промышленности, в медицине и сельском хозяйстве, полученная в течение одного года в мире, будет исчисляться десятками миллиардов долларов к 2000 г. В нашей стране уже к 2000 г. будет налажено получение методами генной инженерии Ь-треонина и витамина В,. Уже к 1998 г. предполагается производство ряда ферментов, антибиотиков, О -, 3-, у-интерферонов проходят клинические испытания препараты инсулина и гормона роста. Гибридомной техникой в стране налажен выпуск реактивов для иммуно-ферментных методов определения многих химических компонентов в биологических жидкостях. [c.165]

Гибридомная техника позволила получать самые разнообразные моноклональные антитела против химически индиви- [c.269]

В последней, четвертой главе описана одна из самых интересных и важных для многих областей науки и практики технологий, а именно технология получения моноклональных антител с помощью гибридомной техники. Глава имеет введение, где кратко изложены те основы иммунологии и иммунохимии, которые раскрывают суть проблемы, а также описаны организация лаборатории, необходимое оборудование, компоненты питательных сред, выбор экспериментального животного. [c.6]

Особенно эффективно применение мкАТ в онкологии. Для диагностики опухолевых заболеваний необходимо получение гибридомных клонов, взаимодействующих только с раковыми клетками. Была разработана такая гибридомная техника, в результате чего оказалась возможной диагностика рака толстой кишки, щитовидной железы, нейробластом, лейкозов и других опухолей. Радиоиммунная диагностика на основе моноклональных антител дала возможность выявить опухоль передней доли гипофиза на ранних стадиях развития патологического процесса. В некоторых случаях с помощью мкАТ удается идентифицировать природу раковых антигенов. Так, антиген, локализованный на поверхности мела-номных клеток человека, представляет собой гликопротеин с разветвленной [c.495]

Гибридомная техника была с успехом использована и для получения гибридов опухолевых лимфоидных клеток с Т-лимфо-цитами. Получены гибридомы с сохранением дифференцированных функций Т-лимфоцитов киллеры, супрессоры, хелперы. Эти гибридомы синтезируют разнообразные иммунорегуляторные факторы, что позволяет выделять и исследовать их структуру. Получена и макрофагальная гибридома. Исследование этих гибридом внесло неоценимый вклад в изучение закономерностей функционирования отдельных популяций Т-лимфоцитов и макрофагов, однако их использование не имеет пока биотехнологического значения. [c.96]

Своеобразие рассматриваемых процессов состоит также в том, что. конечный продукт, находящийся первоначально в очень сложной смеси растворенных в воде веществ, должен быть получен со степенью чистоты, определяемой его последующим применением, т. е. с чистотой фармакопейных препаратов. Такая задача была бы крайне трудной, если бы не возможность использования специфических антител. Действительно, промышленное производство моноклональных антител из культур клеток, полученных методами клеточной инженерии (гибридомная техника), оказалось тем биотехнологическим производством, которое дало гигантский эффект в методах выделения особо чистых биопрепаратов. Иммобилизация моноклональных антител,. специфическим антигеном которых является, например, аг-интерферон, позволяет выделять последний в чистом виде из жидких смесей любого состава, пропуская их через колонку, в которой целевой продукт задерживается на твердом носителе, несущем антитело, а все остальные компоненты раствора, не дающие реакции антиген—антитело , проходят неизменными. После промывки комплекс интерферона с антителом легко разрушается и продукт получается в чистом виде. [c.28]

Когда в организм вводится АГ, в нем производится множество различных АТ. Каждое АТ синтезируется лишь одной определенной группой лимфоцитов и их производных — плазматических клеток (см. 17.10). Милстейн и Келер (1975) разработали так называемую гибридомную технику, позволяющую выделять клон идентичных клеток, производящих определенные моноклональные АТ. Метод состоит в слиянии клеток миеломы — злокачественной опухоли иммунной системы с лимфоцитами, иммуни-зованными определенными АГ. Гибридные клетки — гибрида-мы — размножаются. Таким способом удается получать большие количества моноклональных АТ, широко применяемых в исследованиях, для диагностики, а также в терапии. [c.126]

Большая роль в развитии методов работы с культурами клеток и, в частности, по конструированию новых клеточных систем принадлежит советским ученым. Работы по соматической гибридизации изолированных протопластов с получением новых сортов растений ведутся в Институте физиологии растений им. К. А. Тимирязева АН СССР, Институте ботаники им. Н. Г. Холодного АН УССР, Институтах картофельного хозяйства РСФСР и УССР, за что в 1984 г. авторский коллектив во главе с чл.-кор. АН СССР Р. Г. Бутенко был удостоен Государственной премии СССР. Работы по введению бактерий в культуры растительных клеток начинались в разных лабораториях страны и в настоящее время систематически ведутся в МГУ им. М. В. Ломоносова. На основе гибридомной техники в ряде научно-исследовательских институ- [c.7]

Одним из препятствий для использования гибридомной техники являлось то, что в гибридах синтезировались не только антитела клеток иммунной селезенки, но и иммуноглобулины родительской миеломной линии, а также гибридные молекулы, состоящие из полипептидных цепей как миелом, так и селезенки. Эта проблема была преодолена путем использования миеломных клеток, в которых отсутствовала экспрессия цепей иммуноглобулинов. Подобные варианты возникают довольно часто, и разработаны методы отбора таких вариантов. [c.95]

Закономерен вопрос, нельзя ли избежать отмеченных выше трудностей антигенного анализа, отказавшись от традиционной техники получения антител в результате иммунизации и оперируя вместо этого моноклональными антителами, полученными с помощью гибридомной техники (см. гл. 12). О чевидно, что для детального анализа антигенной структуры, например белков, необходимо использование большого числа индивидуальных клонов. Чтобы учесть генетические особенности иммунного ответа индивидуальных реципиентов, придется производить слияние с клетками плазмацитомы лимфоидных клеток от генетически неидентичных особей, отбор которых может быть ли,шь случайным. Тем самым степень неопределенности задачи не уменьшится. [c.30]

Практически значимая сторона проблемы полиспецифичности антител состоит в том, что никакими способами (в том числе и гибридомной техникой (см. гл. 12) не представляется в принципе возможным гарантировать узкую специфичность антител, поскольку она вряд ли запрограммирована на генетическом уровне. [c.102]

Селективную среду ГАТ используют и в системе фибро-бластов, поскольку эффективность переноса гена в эти клетки довольно высока, а частота спонтанной реверсии для линии Ltk очень низка (<10 ). В практическом плане существенным является вопрос о доступности агента, применяемого для селекции. Среда ГАТ хороша тем, что она недорого стоит и ее легко приготовить. Многочисленные линии В- и Т-лимфоцитов, адаптированные для гибридомной техники, обладают фенотипом tk , поэтому данную систему селекции в принципе можно применять и для этих клеточных линий. Однако частота стабильного переноса генов в лимфоидные клетки нередко очень близка к частоте спонтанной реверсии для многих из этих клеточных линий. [c.39]

Лизосомотропия — эндоцитоз связанного с полимерным носителем ФАВ с последующим перевариванием в лизосомах и внутриклеточным выделением свободного ФАВ [123] по-видимому, не единственный механизм, обеспечивающий попадание ФАВ в опухолевые клетки. Описан синергизм действия хлорамбуцила и опухоль-специфического глобулина, когда вообще никакой химической связи между ФАВ и полимером (во всяком случае к моменту введения в организм) не было [125]. Связывание противоопухолевых ФАВ с опухоль-специфическими антителами в форме комплексов или ковалентных конъюгатов приводит к увеличению эффективности терапии в результате целевого транспорта цитотоксичного ФАВ [125]. Наибольший эффект достигнут при связывании ФАВ с полиглутаминовыми цепями, присоединенными к иммуноглобулину С [120]. Однако широкому применению иммунологически специфичных ФАП препятствует малая доступность соответствующих иммуноглобулинов. Первоначально казалось, что гибридомная техника позволит получать антитела против опухоль-специфических антигенов в необходимых количествах. Однако эти надежды пока не оправдались, в частности потому, что опухоль-специфические антигены подвержены изменчивости и к тому же детектируются не во всех случаях. [c.115]

Таким образом, переход от противоопухолевых ФАВ к со держащим их ФАП даже без специфического транспорта уж< дает положительный эффект, а использование специфически) антител его повышает. Пока еще преждевременно судить о кли нических возможностях метода. Одним из возможных осложне НИИ может оказаться трудность получения антител, которьк имели бы in vivo сродство только к клеткам-мишеням. Во вся ком случае, даже при использовании гибридомной техники по лучения моноспецифических антител необходимо эксперимен тально показать преимущества конъюгатов как средства дл терапии далеко зашедшего рака, твердых опухолей и их мета стазов. Однако принцип получения ФАП с целенаправленны транспортом можно считать экспериментально доказанным. [c.130]

Метод генетической инженерии позволяет также заменить многие методы, основанные на получении продуктов in vivo, на способы получения этих продуктов in vitro. До последнего времени диагностические, лечебные и профилактические сыворотки получали из крови иммунизированных лошадей или вакцинированных людей-доноров. В настоящее время этот дорогой и непростой способ вытесняется гибридомной техникой получения антител. Эта техника основана на получении клеток-гибридом путем слияния В-лимфоцитов, взятых от иммунизированных животных и миеломных (раковых) клеток. Образующаяся гибридная клетка (гибридома) обладает способностью миеломной клетки быстро размножаться на искусственных питательных средах [c.104]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология