Полиакриламид, агарозные гели

ПОЛИАКРИЛАМИД-АГАРОЗНЫЕ ГЕЛИ [c.29]

Крупнопористые ПААГ [295, 244]. Крупнопористые гели используются для электрофоретического фракционирования макромолекул с молекулярными массами >10 Агарозные гели становятся темными при обработке комплексами серебра, поэтому описанная выше методика окрашивания не может быть к ним применена [35]. Ниже приводится методика окрашивания крупнопористых гелей, приготовленных на основе 2,55%-ного полиакриламида с 2,75% сшивок с метилен бис акрил амидом. [c.307]

Сефадекс (поперечно-сшитый декстран), который используется уже более 20 лет, будет и дальше использоваться, особенно при работе в промышленных масштабах, когда необходимо учитывать быстроту, стоимость и удобство выполнения опе- раций. Поперечно-сшитые полиакриламидные гранулы (биогели) также находят широкое применение и имеют сходные с сефадексом интервалы фракционирования. Для очень больших молекул белков, вплоть до агрегатов, приближающихся по размерам к вирусам, наиболее предпочтительны агарозные гели. Попытки ввести в белковую химию материалы на основе стекла с контролируемым размером пор не увенчались успехом из-за сорбции белка на его поверхности. Хотя эти трудности можно было бы преодолеть, преимущества стеклянных гранул, обусловленные их жесткостью, в значительной степени утратили свою ценность вследствие появления новых, более совершенных материалов. Основная проблема, связанная с использованием сефадекса и полиакриламида, заключается в мягкости их гранул даже очень слабое давление, в том числе осмотическое давление, возникающее в колонке во время хроматографиче- [c.200]

Электрофоретическая подвижность двухцепочечных ДНК в полиакриламидном или агарозном геле пропорциональна логарифму их молекулярной массы [107]. По вышеизложенным причинам это соотношение справедливо лишь в случае фрагментов со сравнительно низкой молекулярной массой. Для электрофореза обычно используют трис-буфер с низкой ионной силой, доведенный до pH 7—8 путем добавления NaH2P04, борной или уксусной кислоты [107]. Выбор геля определяется размерами фрагментов, которые необходимо разделить. Электрофоретическое разделение фрагментов, содержащих менее 400 пар нуклеотидов, проводят в 2—10%-ных полиакриламидных гелях, фрагменты длиной в 400—1000 пар нуклеотидов разделяют в комбинированных полиакриламид-агарозных гелях, а более длинные фрагменты —в 0,5—1,0%-ных агарозных гелях [107]. Соединения, существенно различающиеся по молекулярной массе, можно разделить в градиенте концентрации полиакриламидного геля [106]. [c.184]

Ультрогели АсА представляют собой полиакриламид-агарозные гели (рис. 9) с различной и стандартизированной пористостью в соответствии с типом геля. Выпускается пять типов АсА-гелей с различной пористостью, представляющих собой трехмерную полиакриламидную решетку с заключенным в ней агарозным гелем. Для этих гелей область фракционирования по молекулярной массе находится в интервале 1000- 1 200 ООО. Эти гели характеризуются наличием двух типов химических групп — гидроксильных групп агарозы и амидных групп полиакриламида, которые могут быть модифицированы для иммо- [c.29]

Скуде и Джеппсон [1191] в первом направлении проводили ИЭФ в полиакриламидном геле, а антитела включали в комбинированный полиакриламидно-агарозный гель (2% полиакриламида и 0,5% агарозы), вполне пригодный для иммунопреципитации. Во время электрофореза во втором направлении необходимо было накрывать гель тонкой полимерной пленкой, чтобы предотвратить сокращение объема полиакриламидного геля. Джонсон и др. [643] проводили электрофорез в первом направлении в комбинированном геле (5% полиакриламида и 0,8% агарозы), а во втором — в агарозном геле, содержащем антитела. [c.261]

Трудно представить себе биохимика, который не пользовался бы распределительной гель-хроматографией для фракционирования смеси молекул по их размерам. На рис. 12.14 схематически изображена одна гранула геля из тех, что используются в молекулярных ситах. Удобные в употреблении молекулярные сита с большими размерами пор, такие как сефадекс (сшитые поперечными сшивками полидекстраны) и биогель (сшитый поперечными сшивками полиакриламид), всегда имеются в свободной продаже. Для препаративных целей используются также гранулы из пористого стекла и агарозные гели. Применение подобных материалов дало в руки исследователей действенное средство для разделения смеси молекул на фракции, в которых молекулы имеют приблизительно одинаковые размеры. [c.294]

Фирмой ЛКБ (Швеция) предложен новый тип геля — ультрагель. Он представляет собой трехмерную полиакриламидную решетку, в промежутках которой находится агарозный гель. Оптимальный размер частиц ультрагеля составляет от 60 до 140 мкм. Это достаточно маленький размер, чтобы получать высокое разрешение и иметь при этом хорошую скорость потока. Четыре выпускаемых типа ультрагеля (с различными концентрациями полиакриламида и агарозы) обеспечивают следующие эффективные диапазоны фракционирования веществ с различной молекулярной массой АсА-54—5 ООО—70 ООО Д, АсА-44 — 10 ООО— 130 ООО, АсА-34 — 20 ООО — 350 ООО и АсА-22 — 100 ООО — [c.110]

Гель-электрофорез проводится в агарозном или полиакриламидном геле. Это исключительно гибкий метод разделения варьируя структуру геля и состав буферного раствора, можно проводить разделение на основе различия в молекулярных массах, изоэлектрических точках и биоспецифическом сродстве. Особенно высокого разрешения достигают при гель-электрофорезе в полиакриламиде [39], так как здесь дополняют друг друга электрофорез и молекулярноч итовой эффект. Сыворотка, например, расщепляется на 20 полос, в то время как при электрофорезе в агарозе появляется лишь 5 полос. [c.351]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология