Фидерные клетки

Смешать с суспензией фидерных клеток и распределить клетки по чашкам. Соотношение двух типов клеток влияет на характер последующего роста. [c.216]

Невысокие разведения агробактерий, совместно культивируемых в течение 5—8 дней с клетками в низкой концентрации на фидерном слое. 60—70% каллусов были Кт , и все они регенерировали в нормальные растения путем соматического эмбриогенеза. [c.184]

Цель этой стадии — отобрать линии гибридных клеток, образовавшиеся из одной клетки, и осуществить рассев гибридом на фидерный слой клеток селезенки. [c.141]

Необходимость применения фидерного слоя при культивировании ЭС клеток связано с продукцией LIF клетками первичных эмбриональных фибробластов, которые обеспечивают достаточный уровень концентрации этого фактора в непосредственной близости от ЭС клеток. Попытка стабилизировать плюрипотентные свойства ЭС клеток мыши линии R1 путем трансформации их геном lif подтверждает его участие в процессах раннего развития и дифференцировки. [c.298]

Расплавляют агар в водяной бане при 100 °С, охлаждают до 40°С и смешивают с равным объемом ростовой среды с 20% сыворотки ллода коровы при 40 °С (все делают быстро во избежание застывания агара). Из чашек Петри с фидерными клетками пастеровской пипеткой полностью отбирают среду, в чашки заливают агар и оставляют до застывания агара. К подготовленным клеточным суспензиям добавляют по 4 мл агара и разливают в чашки Петри с предварительно застывшим агаром. Для каждой гибридомы получают по две чашки Петри с концентрацией клеток, различающейся в два раза. Чашки ставят во влажный СОг-инкубатор с 5% СО2 при 37 °С. В течение 1 — [c.313]

Другой способ получения слоя фидерных клеток — это инкубировать монослой клеток с митомицином С (10- М), что приводит к образованию поперечных сшивок в клеточной ДНК (Iyer, Szybalski, 1964). Монослой затем трижды промывают СБСР для удаления митомицина С, после чего его можно использовать либо непосредственно, либо после пересева клеток в культуральные сосуды меньшего размера. Для клонирования используются чашки Петри диаметром 6 см, содержащие 2-105 клеток, убитых либо уоблучением, либо обработкой митомицином С. Эти клетки образуют слой фидерных клеток. Среду в чашках с фидерными клетками заменяют суспензией клеток, предназначенных для клонирования. На такие чашки -МОЖНО высевать 10 клеток, но наилучшие результаты получаются при высеве 1000 клеток. Клонируемые клетки прикрепляются к субстрату в свободных участках между фидерными клетками и начинают размножаться, что приводит к образованию колоний, которые можно выделить с помощью цилиндров для клонирования (разд. 8.1.2). [c.93]

Фидерные клетки. При увеличении количества клеток может не соблюдаться пропорциональность между эффективностью посева и числом высеваемых клеток. Когда под действием лекарств происходит лизис клеток, то снижение их числа может сопровождаться непропорциональным снижением эффективности посева, что скажется на наблюдаемой эффективности клонирования значительно сильнее, чем снижение клоногенности остающейся популяции клеток. Эта проблема может быть решена путем использования гомологичных фидерных клеток. Эти клетки не пролиферируют, поскольку облучены летальными дозами Со или или проинкубированы в течеиие 12 ч с митоми-цином (2 мкг/10 клеток). Дозу облучения следует экспериментально устанавливать для каждого типа клеток (например, 2000—3000 рад для лимфоцитов и 6000 рад для линий лимфоидных клеток). [c.284]

Фидерные клетки не обязательно должны быть гомологичны ксплантируемому интактному костному мозгу. Так, для КОКф еловека могут быть использованы облученные костномозговые [c.261]

Ниже описан метод выращивания кератиноцитов из полученных биопсией кусочков кожи с использованием фидерного слоя (Rheinwald, Green, 1975). В качестве фидерных клеток можно использовать клетки ЗТЗ или ВНК21, обработанные гамма-лучами или митомицином С, как описано в разд. 8.1.5. [c.216]

Опухолевые клетки (асцитные или диссоциированные из солидных опухолей) высевают на монослой фидерных фибробластов (разд. 8.1.5). Через несколько дней в культуре можно видеть много различных видов дифференцированных клеток, и в том числе колонии эмбриональных клеток. При повторном пересеве эти клетки доминируют, но возможно, что проще отобрать их вручную и пересеять на фидерный слой (Martin, Evans, 1975а). [c.218]

Анализируют рост высеянных клеток и определяют время вступления клеток в митоз, чтобы добавить агробактерии именно в тот момент, когда растительные клетки компетентны для трансформации. Это особенно важно для протопластов, которым может потребоваться около недели или более для дедифференциации, восстановления клеточной стенки, начала репликации генома и инициации клеточного деления. Высев на чашку суспензионной культуры с низкой плотностью клеток, как правило, тормозит деление до тех пор, пока клетки не кондиционируют среду, что может занять несколько дней. В большинстве случаев можно использовать фидерный слой, чтобы облегчить рост протопластов или суспензионной культуры с низкой плотностью кле- ок. Важно детально знать характеристики системы культивирования. Кроме того, система должна быть воспроизводимой, чтобы время, в течение которого живые агробактерии культивируются с растительными клетками, сократить до минимума иначе бактерии заполняют культуральную среду и вызывают гибель растительных клеток. [c.142]

НОЙ культуры высевают с низкой плотностью (250 клеток иа чашку) на фидерный слой суспензионных клеток моркови, поскольку при данной плотности они не способны к росту без посторонней помощи. В этих условиях клетки моркови быстро растут, формируя видимые колонии диаметром 0,1—0,2 мм в течение 7—10 дней. На данной стадии растительную ткань инокулируют А. tumefa iens и чашки инкубируют до 7 дней. После совместного культивирования переносные диски помещают на [c.161]

Меняют в лунках среду, если она в результате роста колоний закислилась. При этом следует соблюдать осторожность, чтобы не нарушить клеточный слой, поскольку гибридные клетки будут затем расти на фидерном слое спленоцитов в виде отдельных колоний. При смене среды необходимо избегать перекрестной контаминации лунок. [c.143]

Культуры, обладающие высокой специфической цитолитической активностью, клонируют в S-среде. В каждую лунку панелей для микротитрования вносят в среднем одну гибридную клетку и 2-10 облученных рентгеном (2000 Р) перитонеальных клеток в 200 мкл S-среды. -Перитонеальные клетки получают промыванием СР брюшной полости сингенных или аллогенных мышей. По достижении конфлюентности клоны переносят в лунку ostar 3524, наращивают клетки в S-среде и проверяют их на цитолитическую активность. Клоны, обладающие высокой цитолитической активностью, культивируют в S-среде и обычно повторно клонируют несколько раз, для того чтобы отобрать клоны со стабильной экспрессией цитолитической активности. Повторное клонирование обычно проводят в S-среде без каких-либо фидерных (питающих) клеток. [c.289]

Клоны ЦТЛ третьего типа происходят из тех клеточных вариантов, которые со временем вытесняют другие клетки. Клетки этих клонов конститутивно экспрессируют рецепторы ФРТК, что обусловливает их ростовые преимущества в среде, содержащей ФРТК, и не требуют каких-либо стимуляторов или фидерных клеток (рис. 17-2). Клоны ЦТЛ третьего типа имеют измененный хромосомный набор (ЛоЬпвоп е1 а1., 1982) и, вероятно, находятся на пути к злокачественной трансформации. Поскольку клоны третьего типа сохраняют специфическую литическую активность, они могут быть полезны при анализе антиген-специфических рецепторов и их генов. [c.295]

ЭС клетки обладают высокой пролиферативной активностью и способностью в течение длительного времени в культуре поддерживаться в недифференцированном состоянии. Для сохранения недифференцированного фенотипа ЭС клеток в культуре требуется наличие фидерного слоя, который может быть представлен первичными эмбриональными фибробластами или перевиваемыми фибробластами мыши линии STO (Evans, Kaufman, 1981). [c.291]

НО трансформированных в эмбриональную карциному. При фидерном способе культивирование формируются монослойные колонии округлой или удлиненной формы, с четко выраженными краями по периферии. Дифференцировка ЭС клеток приводит к морфологической гетерогенности и появлению колоний с неровными краями и тенденцией к вертикальному росту. Исследования ультраструктуры ЭС клеток показали, что клетки имеют относительно крупное ядро, содержап ее преимуп ественно эухроматин, одно или два ядрышка, в которых доминируют гранулярные компоненты. В отличие от обп епринятых представлений о том, что ЭС клетки лишены большинства органелл (Doets hman et al., 1985 Robertson, Bradley, 1986), в их цитоплазме были обнаружены многочисленные свободные рибосомы, шероховатый эндоплазматический ретикулум представлен единичными цистернами, что свидетельствует о низком уровне синтетической активности, комплекс Гольджи, около которого располагались 1-2 центриоли, митохондрии и многочисленные лизосомы (рис. 105). [c.296]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология