Моноклональные антитела в асцитной жидкости

Для очистки больших количеств моноклональных антител из асцитных жидкостей применяют хроматографию на ДЭАЭ-целлюлозе. [c.316]

Асцитная жидкость полностью стабильна при хранении в стерильном состоянии при 4°С. В течение долгого времени моноклональные антитела могут храниться при 4°С в 50%-ном сульфате аммония. [c.169]

Кроликов иммунизировали глобулиновой фракцией мышиной асцитной жидкости, содержащей моноклональные антитела. Эту фракцию получали преципитацией 18%-ным сульфатом натрия и диализом против PBS. При каждом введении использовали 2,5 мкг белка. Первую инъекцию осуществляли в/ м в оба бедра в комплексе с НАФ. Бустерные инъекции осуществляли через 6 нед в две точки п/к с НАФ, а на четвертом месяце — также, но без адъюванта. Кровь брали спустя [c.87]

Самый простой путь определения концентрации моноклональных иммуноглобулинов в асцитных жидкостях — электрофорез с последующим окрашиванием гелей. На электрофоре-грамме должны быть видны отдельные полосы, характеризующиеся определенным положением в случае антител данной специфичности. Их интенсивность можно сравнить с интенсивностью полос, полученных при исследовании проб, отобранных на более ранних пассажах. Данный метод более удобен и информативен, чем титрование специфических антител, хотя время от времени следует применять и последний. [c.148]

Традиционный метод получения больших количеств моноклональных антител включает введение мышам или крысам гибри-домных клеток выбранного клона с последующем развитием опухолевых асцитов и отбором асцитной жидкости. От одной мыши можно полу> ить до 50 мг антител. Однако при получении очень больших количеств антител использование животных уже нецелесообразно, поскольку для получения 1 кг очищенного продукта потребуется 20 ООО мышей. Следовательно, необходимо развивать промышленную технологию получения моноклональных антител in vihv. [c.38]

Использование моноклональных антител, выделенных и асцитной жидкости или культуральной среды, существенно облегчает получение подклассов IgG мыши. Значительно более-высокая концентрация Ig олределенного изотипа в сочетании с гомогенностью белка позволяет с помощью протеина А получать иммуноглобулины высокой чистоты. [c.110]

Во-первых, в зависимости от области применения существует возможность выбора наиболее подходящего и удобного источника получения моноклональных антител культуральной или асцитной жидкости. При использовании препаратов асцитной жидкости возникают определенные трудности при интерпретации полученных результатов, обусловленные примесью естественных мышиных антител к моноклональным антителам (высокие фоновые уровни). Однако в 1 мл асцитной жидкости содержится несколько мг МКА. Поэтому, когда используют разведение 1 1000 или более, значительная часть посторонних мышиных антител удаляется разбавлением. Иногда необходимо полностью удалить из препарата примесь естественных иммуноглобулинов (например, при использовании моноклональных антител для выделения и очистки небольшого количества белкового антигена с целью биохимического анализа). В последнем случае предпочтительно выделять моноклональные антитела из культуральной жидкости. При использовании в иммунологических реакциях асцитной жидкости следует иметь в виду присутствие посторонних фоновых антител. В некоторых случаях в организме мыши может существовать высокий титр природных антител, реагирующих с антигеном, специфически распознаваемым моноклональными антителами. При использовании асцитной жидкости возникают и проблемы неспецифического характера. Например, культуральная жидкость дает более ясное и точное окрашивание образца в иммуногистологических исследованиях. [c.148]

На колонках для ГА-ВЖХ связываются все моноклональные IgG мыши и крысы (Henson, 1985). Профиль элюции моноклонального IgG2b из асцитной жидкости мышей приведен на рис. 7-5. Мышиные и крысиные моноклональные IgG элюируются с колонки ГА-ВЖХ при концентрациях фосфатов от 60 до 200 мМ. Очистка в одну стадию достижима для моноклональных антител, которые элюируются при высоких концентрациях фосфатного буфера. Некоторые моноклональные антитела элюируются при низких концентрациях фосфата и плохо отделяются от основной массы сывороточных белков. Предварительное осаждение глобулинов сульфатом аммония дает возможность получать с помощью ГА-ВЖХ очищенные препараты многих, но не всех типов моноклональных антител. Тем не менее из собранных иммуноглобулиновых фракций трудноочищае-мых антител после диализа и рехроматографии удается получать достаточно чистые препараты, хотя и с некоторыми потерями. [c.145]

Одна из наиболее трудных проблем при цитометрии связана с неспецифическим окрашиванием. Клеточный сортер с чрезвычайно высокой чувствительностью детектирует флуоресцирующие молекулы — обычно с большей, чем глаз. Поэтому реагенты, используемые при работе с сортером, должны быть более высокой степени очистки, чем для других методов анализа. Как правило, гетерологичные сыворотки должны подвергаться очистке на аффинных сорбентах даже в тех случаях, когда они достаточно специфичны для непосредственного использования при флуоресцентной микроскопии. Моноклональные антитела не всегда требуют очистки. Мы с успехом использовали супернатанты многих продуцирующих моноклональные антитела гибридом, которые культивировали в средах с добавлением и без добавления сыворотки, а также асцитные жидкости (конечно, в соответствующем разведении). В случае непрямых методов флуоресцентного окрашивания влияние контаминирую-щих молекул в культуральных жидкостях сводится к минимуму. Если конъюгированные с флуорохромом антитела строго специфичны по отношению к иммуноглобулинам, то даже при связывании клетками молекул, не относящихся к иммуноглобулинам, эти молекулы не будут детектироваться (по флуоресценции). В случае применения асцитных жидкостей активность моноклональных антител обычно настолько высока, что эффекты контаминирующих иммуноглобулинов и других компонентов чаще всего не выявляются. Однако при прямом конъ-югировании препаратов антител с флуорохромом наличие в них белковых примесей неиммуноглобулиновой природы может стать причиной высокого уровня неспецифического окрашивания. Следовательно, любой конъюгат используемый при сортинге клеток, должен быть тщательно очищен. [c.332]

П. Моноклональные мышиные антитела к антигенам клеточной поверхности добавляют к экстракту мембраи, солюбилизированных с помощью Ф-40 (примерно 25 мкл асцитной жидкости иа мембраны, выделенные из 10 клеток), и инкубируют 30 мин при комнатной температуре. Затем добавляют оптимальное (по данным предварительного титрования) количество кроличьих илн бараньих антител к иммуноглобулинам мыши и смесь инкубируют 16 ч при 4 С для осаждения иммунных комплексов. Иммунные преципитаты отмывают дважды 0,5%-ным раствором ЫР-40 в ЗФР н один раз 0,5%-ным раствором ЫР-40 [c.63]

В каждую лунку вносят по 50 мкл раствора моноклональных антител (культуральная иадосадочная жидкость или асцитная жидкость, разведенная буферным раствором с яичным белком) и выдерживают не менее 90 мин при 4 0 (рис, 2) можно оставить и на иочь, иотогда панель следует поместить во влажную камеру. [c.334]

В каждой из отобранных таким образом лунок еще содержалось около 200 ООО клеток. В силу полиспецифичности иммунного ответа (см. выше) они еще не были моноклональны, поэтому далее клетки из этих лунок рассеивали ло одной, выращивали колонии и снова их сканировали, т. е. производили обычные операции клонирования, позволяющие в конце концов отобрать наилучший по заданным параметрам клон гибридом, образующих совершенно одинаковые <смоноклональные> антитела. Моноклональные гибридомы в суспензии вырабатывают 5—10 мкг антител на 1 мл среды. Однако полученные от чистых линий BALB гибридомы сохраняют присущую миеломным клеткам способность к опухолевому росту. Ими инокулируют мышей и после нескольких пассажей получают в асцитной жидкости моноклональные антитела в огромном количестве — до 50 мг чистых антител на мышь (титр 10 10 ). [c.115]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология