Диализный мешок

Если растворы белков слишком разбавлены, для анализа их можно сконцентрировать несколькими способами. Например, для этой цели удобна лиофилизация, однако после нее препараты нужно диализовать против буфера для нанесения , так как концентрация солей выше 50 мМ мешает электрофоретическому разделению белка. Можно также воспользоваться вакуумным диализом преимущество его в том, что одновременно с концентрированием раствора он обеспечивает и удаление избытка солей. Кроме того, можно поместить образец в диализный мешок и по- [c.98]

П1. Колонку промывают в течение ночи, затем наносят на нее раствор выделенного осаждением белка и пускают ток жидкости при давлении 6—8 см. Собирают фракции по 5 мл и регистрируют поглощение при 280 нм. Фракции второго пика, содержащие главным образом 7S-IgG, объединяют и концентрируют. Для концентрирования выделенную фракцию иммуноглобулинов можно поместить в закрытый диализный мешок, обсыпанный снаружи порошком полиэтиленгликоля, при 4°С. Концентрат анализируют в иммуноэлектрофорезе с кроличьей антисывороткой к белкам сыворотки мыши. Концентрацию белка определяют по Лоури. [c.215]

Рис. 1.13. Ультрафильтрация белковых растворов. А. Подвешенный диализный мешок сообщается с внешней атмосферой, а в колбе создается вакуум, так что максимальная разность давлений составляет менее 1 атм. Б. Ячейка для ультрафильтрации может работать при давлении до 5 атм. Фильтрат продавливается сквозь мембрану.

Для извлечения макромолекул из сегментов полиакриламидного геля можно воспользоваться электрофорезом. Сегменты кладут в диализный мешок и содержащиеся в них биополимеры под действием электрического поля переходят в раствор, который пипеткой отстаивают из мешка [451]. Другой способ состоит в том, что сегменты геля помещают в стеклянную трубку и за Ключают их в новый полиакриламидный гель низкой концентрации. На нижнем конце трубки закрепляют небольшой диализный мешочек и проводят электрофорез, в результате чего белки мигрируют через разбавленный гель и попадают в этот мешочек [763, 1246]. Для электроэлюции ДНК из сегментов геля [1479] был применен прибор, предназначен- [c.118]

Переносят раствор плазмиды в приготовленный диализный мешок "), один конец которого пережат хирургическим зажимом, и пережимают другой конец аналогичным образом. [c.48]

Если поместить раствор в диализный мешок и мешок оставить на воздухе, вода из него испарится и раствор сконцентрируется. Если мешок окружен сухим высокорастворимым полимером, который не может проходить через мембрану, вода будет стремиться покинуть мешок, чтобы растворить сухой полимер. Этот процесс протекает быстрее, чем сушка на воздухе. Материал, который наиболее часто используется в качестве внешнего полимера,—полиэтиленгликоль (ПЭГ). [c.533]

Д —раствор макромолекул макромолекулы, О растворитель) помещают в диализный мешок, который покрывают порошком сухого полиэтиленгликоля (ПЭГ) 5 — молекулы растворителя выходят из мешка и проникают в ПЭГ. Ни ПЭГ, ни макромолекулы не могут проникнуть сквозь мембрану, таким образом раствор концентрируется. 1 — мешок для диализа 2 —зажимы 3 — порошок полиэтиленгликоля. [c.166]

Равновесный диализ. Диализный мешок, в котором в начальный момент времени (1) находится раствор макромолекул (штрихованные кружки) помешают в раствор, содержащий способные диализоваться и связываться с макромолекулами малые молекулы (черные точки). В условиях равновесия (2) концентрация свободных малых молекул внутри и снаружи мешка одинакова. Так как макромолекулы связывают часть малых молекул, суммарная кон-центрация малых молекул внутри мешка больше, чем снаружи. [c.523]

При диа.лизе морской воды отфильтрованную пробу по.угещают в диализную трубку из целлюлозы со средним размером пор 4.8 нм [725]. В процессе диализа, окончание которого определяют по отрицательной реакции на хлориды, периодически меняют дистиллированную воду. Значительная часть цинка (до 30 ) не подвергается диализу, видимо, вследствие образования соединений с органическими веществами. При диализе п situ диализный мешок со средним размером пор 4.8 нм помещают непосредственно в природный водоем и выделяют растворенные формы микроэлементов без опасения их адсорбции стенками посуды и аппаратуры [726]. Этот метод также используют для изучения взаимодействия гумуса с микроэлементами в озерной воде [724]. [c.111]

Простейший способ обсцвечивания фона состоит в вымачивании поддерживающей среды в жидкости, в которой свободный краситель хорошо растворяется, а его комплексы с макромолекулами не диссоциируют. Такой растворитель (часто смесь растворителей) либо идентичен растворителю, использованному для получения окрашивающего реактива, либо имеет другой состав. Процесс обесцвечивания гелей путем их вымачивания занимает много времени. Один из способов его ускорения — это частая смена растворителя, который можно использовать многократно, если удалять из него экстрагированный краситель, например, посредством адсорбции на активированном угле. Нетрудно изготовить специальное устройство для непрерывной замены и очистки обесцвечивающего раствора. С этой целью к сосуду с обесцвечивающим раствором присоединяют насос, который прокачивает его через слой активированного угля и вновь возвращает в ванну с отмываемыми гелями [198]. Еще более простой, хотя и менее эффективный способ непрерывной очистки обесцвечивающего раствора заключается в том, что в него помещают диализный мешок, наполненный активированным углем. Перемешивание раствора также помогает увеличить скорость обесцвечивания. Если такая автоматическая система применяется для обработки столбиков полиакриламидного геля, то их целесообразно сначала вложить в перфорированные пробирки, прежде чем погружать в обесцвечивающий раствор. [c.188]

Для дезоксихолатной солюбилизации необходимо прежде всего приобрести партию реагента с низким значением поглощения при 280 нм (<0,025 для 0,05%-ного раствора). Такой дезоксихолат можно без предварительной обработки использовать почти на всех этапах очистки, однако реагент, применяющийся на последней стадии очистки антигена, должен быть свободен от неудаляемых диализом примесей. Для приготовления такого реагента 250 мл 10%-ного дезоксихолата помещают в диализный мешок и диализуют против 5 л буфера. Мы обычно используем 10 мМ трис-НС1-бусЬер, pH 8,2 (при комнатной температуре), содержащий 0,02% NaNs, и получаем после диализа 5 л 0,5%-ного раствора дезоксихолата в этом буфере. [c.187]

Еще один метод концентрирования состоит в удалении воды за счет осмотических сил. Образец помещают в диализный мешок, который затем погружают в раствор или порошок, оттягивающий воду из мешка. Обычно для этого используют поли-этиленгликоль (мол. масса 20 ООО) или высокозамещенную карбоксиметилцеллюлозу. Оба этих полимера очень сильно поглощают воду, поддерживая низкую активность воды снаружи мешка и высокую внутри. Фирма СаШюсЬет выпускает эти вещества под названием Aqua ide . Они очень удобны при работе с небольшими объемами в течение 1 ч раствор объемом 10 мл можно сконцентрировать практически досуха, обсыпая диализный мешок порошком и периодически удаляя с его поверхности гидратированный гель. При работе с большими объемами можно использовать концентрированный раствор поли-этиленгликоля (например, 20%-ный). Диализный мешок оставляют в этом растворе при постоянном перемешивании на несколько часов. Метод можно считать вполне удовлетворительным при условии, что полимеры не содержат низкомолекулярных примесей, вредных для фермента. [c.28]

Очень прост и эффективен метод концентрации растворов макромолекул при помощи диализа против полиэтилен-гликоля или карбовакса (554, 607). Этот метод основан на способности сухого полиэтиленгликоля впитывать в большом количестве воду и соли. Обычно используют карбовакс с молекулярным весом 4000, 6000, 20 ООО и 40 ООО. Применение карбовакса с более высоким молекулярным весом экономичнее, и он удобнее в обращении, чем поли-винилнирролидон. Метод состоит в следующем [554] Жидкость наливают в диализную трубку Вискинг небольшого диаметра или в диализный мешок и на несколько часов (от 1 до 18) помещают в сухой полиэтиленгликоль. Затем жидкость переносят на несколько часов в дистиллированную воду для диализа. Процедуру можно повторить со свежей порцией карбовакса. Таким образом, объем диа-лизуемой жидкости уменьшается в несколько раз. Для этого можно использовать любое водоотнимающее высокомолекулярное вещество, например сефадекс Г-200 или по-ливинилнирролидон с мол. весом 10 ООО и выше. Недостатком этого метода является продолжительность процедуры, что, конечно, невыгодно для концентрирования лабильных вирусов [377], [c.95]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология