Диализ равновесный

Недостаток метода равновесного диализа состоит в том, что диффузионное равновесие через мембрану устанавливается в течение нескольких часов, хотя в большинстве случаев действительное химическое равновесие для реакции связывания достигается за доли секунды. Этот недостаток преодолевается использованием быстрого способа определения скорости отщепления радиоактивного лиганда при диализе от равновесной системы [103] фермент — лиганд. В таком случае даже при работе с неустойчивыми веществами быстро получают точные результаты. [c.408]

Взаимодействие между коллоидными частицами и небольшими лигандами можно изучить с помощью равновесного диализа или ультрафильтрования. Для диализа раствор, содержащий протеин и лиганд, помещался в полупроницаемый мембранный мешочек, который соприкасается с внешним раствором почти той же концентрации свободного лиганда. Лигандные формы диффундируют через мембрану до тех пор, пока не установится равновесие. Таким образом, равновесная концентрация незаряженного лиганда во внутреннем растворе равна общей концентрации лиганда во внешнем растворе. Концентрация сво- [c.386]

В наших работах для определения растворимости жидких углеводородов в растворах белков применяли методы равновесного диализа, спектрофотометрический, рефрактометрический, весовой. [c.21]

Равновесный диализ является обычным методом измерения связывания малых молекул (лигандов) с макромолекулами. В ходе диализа лиганд проходит через мембрану в отделение, содержащее макромолекулы, и его концентрация снижается за счет связывания с последними [87, 101, 102]. По уменьшению концентрации лиганда (например, НАД) и по известной концентрации макромолекул (например, фермента) можно рассчитать число связывающих участков и константу диссоциации комплекса фермент — кофермент. Объемы внутреннего и внешнего отделений аппарата для диализа должны быть очень точно известны и проверены на удобной контрольной системе. Этот метод был использован, например, при исследовании связывания НАД+ с глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназой мышц кролика [90]. [c.408]

Кривые элюирования, полученные математическим моделированием на вычислительной машине с использованием уравнений (3.37а) и (З.ЗТб), хорошо согласуются с экспериментальными результатами и показаны на рис. 3.10. Изотерма связывания, использованная в этом расчете, была выведена из уравнений (3.33) и (3.34), поскольку их параметры лучше соответствуют экспериментальной кривой для равновесного диализа (рис. 3.8). [c.40]

Измерение А (и с° или с ЕС) нельзя произвести непосредственно. Его оценивали методами 1) удерживаемых объемов, наблюдаемых при хроматографировании методом гель-проникающей хроматографии растворов неэлектролита вместе с амфифильным соединением (водный N проникает в гель, мицеллярный N - нет) 2) равновесного диализа систем мицелла - солюбилизат 3) кинетики реакции в условиях, когда реакционная способность мицеллярного N значительно отличается от реакционной способности водного N 4) изменения рН буферных растворов, обусловленного сорбцией слабой кислоты неионными мицеллами. Полученные величины К сведены в табл. 3.13. Результаты, полученные с помощью методов (1) и (2), были проанализированы в рамках моделей 1 или Г. Однако в этих измерениях [c.578]

ПЭК — новый класс полимерных материалов, ограниченно (ок. 50%) набухающих в водных средах. В воздушно-сухом состоянии ПЭК прозрачны и хрупки, в равновесно-набухшем (в воде) — эластичны. При введении органич. растворителей ПЭК становятся жесткими. В солевых средах ПЭК поглощают низкомолекулярные электролиты, поэтому их используют в качестве амфотерных ионообменников. ПЭК обладают высокими транспортными характеристиками, что позволяет использовать их в качестве полупроницаемых мембран, в частности для диализа и ультрафильтрации. Благодаря высокой биологич. совместимости ПЭК являются перспективными материалами для применения в медицине. [c.50]

Для определения положения равновесия между свободными антителом и антигеном и их комплексом или между антителом и гаптеном и их комплексом использовали различные методы. Среди них — метод равновесного диализа (I), прямой анализ преципитатов и надосадочной жидкости (II), электрофорез и ультрацентрифугирование (III) и метод рассеяния света (IV). Эти эксперименты подробно описаны в цитированных работах. Здесь мы можем только сказать, что все это методы определения или расчета концентраций свободных антител, свободных антигенов, свободных гаптенов и их комплексов в состоянии равновесия. На основе таких измерений можно вычислить константу равновесия К и AF°. Если эти измерения произвести при нескольких значениях температур, можно определить также величины ДЯ° и А5°. [c.166]

В среднюю камеру наливают раствор или суспензию полимера, а в боковые камеры, в которые впаяны электроды, — воду. Ионы диффундируют из средней камеры к противоположно заряженным электродам. При электродиализе применяется напряжение от 300 до 10 000 в. В случае больших напряжений происходит сильный разогрев воды, поэтому боковые камеры всегда снабжают охлаждающим устройством. Так как в процессе диализа концентрация ионов в боковых камерах постепенно увеличивается, достигая равновесного значения, то периодически производится смена воды. Следует отметить, что при диализе вместе с электролитами в воду. могут диффундировать низкомолекулярные при.меси, молекулы которых меньше пор полупроницаемой перегородки. [c.310]

Процесс диализа протекает очень медленно, поэтому в настоящее время применяют электродиализ. В среднюю камеру прибора, называемого электродиализатором, наливают растйор или суспензию полимера, а в боковые камеры, в которые впаяны электроды,— воду. Ионы диффундируют из средней камеры через полупроницаемую мембрану к противоположно заряженным электродам, При электродиализе применяется напряжение от 300 до ЮООО В, В случае больших напряжений происходит сильный разогрев воды, поэтому боковые камеры всегда снабжают охлаждающим устройством. Так как в процессе диализа концентрация ионов в боковых камерах постепенно увеличивается, достигая равновесного значения, периодически производится смена воды. Следует отметить, что при диализе вместе с электролитами в воду могут диффундировать низкомолекулярные примеси, молекулы которых меньше пор полупроницаемой перегородки,, [c.294]

Таким образом, сорбционные свойства мембраны при проведении первых опытов приведут к значительному снижению выхода по веществу. Однако можно предполагать, что при достижении равновесной концентрации в мембранах процесс диализа или электродиализа будет проходить практически с теоретическим выходом по веществу. [c.447]

Полностью освободиться от примесей электролитов диализом нельзя, как бы долго он ни длился. В пределе устанавливается некоторое равновесное соотношение между количеством коллоида и ионов примеси электролита в диализаторе (мембранное равновесие Доннана, на котором мы останавливаться не будем). [c.382]

Кон определил молекулярный вес единицы ферментного белка, содержаш его 1 активный центр, с помощью метода равновесного диализа ингибиторов ферментативного катализа, т. е. измерения количества белка, связывающего 1 моль ингибитора. Найденная им цифра молекулярного веса — 135 ООО. На самом же деле очищенный белок представляет собой гексамер этой элементарной единицы, т. е. имеет молекулярный вес 810 ООО. [c.486]

Число связывающих центров и их сродство можно определить прямыми методами, такими, как равновесный диализ [2] или хроматографическая гель-фильтрация [3]. Во всех исследованиях такого типа число связанных ионов металла определяется непосредственно анализом концентрации комплекса металла с белком как функции равновесной концентрации свободного иона металла. При изучении связывания с металлом особенно важны значения pH как для получения достоверных данных, так и для их интерпретации (разд. 3), и в зависимости от цели исследования значения pH могут поддерж иваться постоянными или изменяться. По возможности следует избегать большинства буферов из-за конкуренции между белком и буфером за металл, а также из-за возможности образования тройного комплекса, включающего металл, белок и буфер [4]. Со спосо бами обработки первичных данных с целью определения числа различных центров связывания и оценки их сродства можно ознакомиться в специальных руководствах [c.275]

Степень связывания ионов белками можно определять различными методами из них наиболее широко распрострапен метод равновесного диализа. При диализе (так же как и при осмометрии) используют мешочек, стенки которого непроницаемы для молекул белка, но проницаемы для небольших ионов. Диализный мешочек с раствором белка помещают в раствор, содержащий необходимый ион. После установления равновесной концентрации диффундирующего иона по обе стороны мембраны измеряют концентрацию иона в растворе, не содержащем белка разность начальной и конечной концентраций иона в не содержащем белка растворе позволяет определить концентрацию иона в растворе белка. Если концентрации иона по обе стороны мембраны равны друг другу, то это означает, что связывания не произошло. Если связывание имело место, то концентрация иона в белковом растворе должна быть выше, чем в растворе, не содержащем белка разность концентраций может служить мерой числа ионов, связанных с одной молекулой белка. Для того чтобы исключить влияние эффекта Гиббса — Доннана, равновесный диализ проводят обычно либо в изоэлектрической точке белка, либо при высокой ионной силе. Такие методы, как ультрафильтрация, распределительный анализ, а в некоторых случаях и адсорбционная спектрофотометрия, также могут служить для определения степени связывания ионов с белками. [c.73]

В 34 главах изложены методы определения, выделения и очистки антител (включая дансилироваиие, двумерную хроматографию, изоэлектрофокусирование, электрофорез в полиакриламидном геле и изотахофорез) методы определения констант равновесия (равновесный диализ, равновесная фильтрация и седиментация) способы маркировки реагентов изотопами и флуоресцентными красителями и определение компонентов клеточной поверхности меры предосторожности при работе в изотопной лаборатории методы химической модификации белков, гаптенов и нерастворимых носителей приемы получения аитн-сывороток к аллотипам и антигенам гистосовместимости и получения антител доминирующего клонотипа методы оценки гистосовместимости и реакций в смешанной культуре лимфоцитов методы разделения клеток на гелях, несу- [c.7]

Растворы высокомолекулярных соединений не являются коллоидными системами. Они отличаются от последних характерными признаками, будучи термодинамически равновесными системами, агрегативно устойчивыми без стабилизатора. Однако некоторые свойства коллоидных систем и растворов высокомолекулярных соединений одинаковы молекулы полимеров близки по размерам к коллоидным частицам, поэтому и те и другие системы обладают небольшой способностью к диффузии их можно диализовать растворы высокомолекулярных соединений, как и коллоидные системы, обнаруживают опалесценцию. Наконец, при определенных условиях в растворах полимеров и в коллоидных системах возможно структурирование. Поэтому многие физико-химические свойства высокомолекулярных соединений рассматриваются в курсе коллоидной химии. [c.69]

Связывание аденозина с поли(и) было изучено методом равновесного диализа (Huang, Ts o, JMB, 16, 523, 1966). В приведенной ниже таблице указаны доли занятых центров в молекулах поли(и), т. е. значения у при разных молярных концентрациях свободного аденозина (А) в растворе при 5°С. Определите истинную константу ассоциации для присоединения аденозина к поли(и) и свободную энергию взаимодействия между расположенными по соседст- [c.333]

Аналитические методы, используемые при изучении взаи Л)дей-ствия альбумина с молекулами лекарств, делятся на неспектроскопические и спектроскопические [316, 317]. Первая группа включает так называемые классические методы равновесный и кинетический диализ, ультрафильтрацию, ультрацентпифугирование и электрофорез. Ко второй группе относятся ультрафиолетовая и видимая спектроскопия, флуоресценция, дисперсия оптического вращения и кругового дихроизма, ЯМР. [c.235]

Здесь могут быть использованы методы, известные из энзимологии и белковой химии равновесный диализ, ультрацентрифугирование, гель-хроматография и ультрафильтрация. Основной проблемой является здесь выяснение различий между специфическим и неспецифическим связыванием, в особенности при изучении связывания, проводимом на препаратах мембран и на частично очищенных белковых фракциях. В центральной нервной системе концентрации рецептора могут составлять несколько пикомолей на 1 г ткани, а нейромедиаторы благодаря своим полярным свойствам легко взаимодействуют, хотя и слабо, с полярными мембранными компонентами, расположенными вне рецепторной области. Если даже такое неспецифическое связывание имеет сродство на несколько порядков ниже, чем специфическое связывание с рецептором (т. е. более высокую Ко), оно все же оказывается важным фактором, который следует принимать во внимание из-за большого числа присутствующих неспецифических связывающих центров. Таким образом, обнаружение рецептора в центральной нервной системе посредством изучения связывания возможно, если имеется лиганд с очень высоким сродством и с очень высокой удельной радиоактивностью (>185-10 ° раоп./(с-ммоль). [c.249]

Применение промежуточного бака 17 позволяет создать второй циркуляционный контур щелочи, в котором концентрация гемицеллюлоз, по данным Кириллова на 4 г/л выше, чем в рабочем растворе. Это позволяет повысить эффективность работы диализаторов. Поэтому на диализ отбирают избыток щелочи из промежуточного бака 17. Количество отбираемой щелочи на диализ зависит от заданного содержания гемицеллюлоз в отжатой щелочной целлюлозе и исходной целлюлозе. В зависимости от соотношения указанных величин устанавливают ту или иную концентрацию гемицеллюлоз в рабочей щелочи. Без применения диализа при переработке облагороженной сульфатной целлюлозы с содержанием а-целлюлозы, равным 96%, в производстве высокопрочных волокон в рабочей щелочи устанавливается равновесная концентрация гемицеллюлоз 18—20 г/л при переработке сульфатной целлюлозы с содержанием а-Целлюлозы 91—937о при выпуске обычной продукции равновесная концентрация гемицеллюлоз воз- [c.62]

Взаимодействие аргинил- РНК-синтетазы из Е.соИ с субстратом аргинином, содержащим радиоактивную метку [ С]-аргинина, исследовали с использованием метода равновесного диализа. Диализ проводили в кювете, разделенной на два равных по объему отсека целлюлозной мембраной, проницаемой для а згинина и непроницаемой для фермента. В кювету запива.пи раствор субстрата различной концентрации в стандартном буфере. Далее в один из отсеков кюветы вносили раствор фермента в стандартном буфере. Концентрация фермента во всех опытах была постоянной, равной 6,5 мкМ. После проведения диализа и установления равновесия определяли концентрацию арпшина в отсеке, не содержащем фермент. [c.126]

Т. Лорент развил иную трактовку механизма эксклюзии, которая в большей степени соответствует реальной структуре геля. Он считал, что набухший гель можно уподобить раствору полимера. Влияние, которое кислый полисахарид (гиалуроновая кислота) оказывает на седиментацию макромолекул, можно объяснить лишь образованием из полимерных цепей трехмерной сетки, которая действует в отношении макромолекул как молекулярное сито [23]. Если к раствору белка прибавлять высокомолекулярный декстран, то по мере увеличения концентрации полисахарида белок осаждается [24, 25]. Можно представить, что при растворении декстран связывает часть воды за счет гидратации, что приводит к осаждению белка. Фактически в этом случае высокомолекулярный белок осаждается в большей степени, чем низкомолекулярный [24]. В другой серии опытов Лорент [26] сравнивал эксклюзию белков (при равновесном диализе против раствора гиалуроновой кислоты) с их поведением при хроматографировании на геле гиалуроновой кислоты равной концентрации [27]. Расчеты подтвердили предположение, что гиалуроновая кислота (независимо от присутствия поперечных мостиков) образует в водном растворе непрерывную сеть, состоящую из длинных линейных цепей. [c.118]

Анализ кривых элюир.ования макромолекул, специфически сорбируемых на аффинном сорбенте, является потенциальным аналитическим методом для изучения специфических взаимодействий биополимеров. Кривые элюирования очень близки к изотермам связывания элюируемого вещества с иммобилизованным аффинантом, и, следовательно, из хроматограммы можно получить термодинамические параметры молекулярных взаимодействий. Метод эквивалентен повторяющемуся диа-лизу и имеет много преимуществ по сравнению с обычным равновесным диализом. Например, он требует намного более низких концентраций и небольших количеств образца, несколько образцов разных молекул можно наносить одновременно и обнаруживать небольшие различия в связывающих способностях при хорошем разделении. [c.55]

Систему растворенное вещество — солевой раствор обычно рассматривают как двухкомпонентную. Всегда ли это оправдано Вопрос об электростатических эффектах рассматривается в обзоре Криса и Пейна [4], посвященном существующим методам определения молекулярной массы. Кассаса и Эйзенберг [5, 6, 7] показали, что так называемые безводные молекулярные массы можно определять в трехкомпенентных системах без точного учета взаимодействий между компонентами, если раствор подвергнуть равновесному диализу. Все теоретические трудности, связанные с учетом взаимодействий, возникающих в трехкомпонентной системе, при этом, пб-видимому, полностью устраняются. Соли, используемые в качестве третьего компонента, должны иметь малую молекулярную массу и присутствовать в достаточно больших концентрациях, чтобы не создавать заметного доннановского эффекта. Этот эффект, как известно, состоит в том, что если по одну сторону полупроницаемой мембраны находятся заряженные макромолекулы, например белки, то концентрация солей с разных сторон мембраны будет различной. [c.62]

Можно попытаться ввести поправку на избирательное связывание с белком компонентов растворителя. Степень связывания можно определить различными способами. В работе [14], например, для этой цели применен равновесный диализ, Хейд и Тенфорд [15] воспользовались изопиестическим методом, а Эдельштейн и Шахман ставили ряд равновесных седиментационных экспериментов, меняя плотность растворителя изменением концентрации гуанидинхлорида и экстраполируя величину кажущегося парциального удельного объема к нулевой концентрации. [c.220]

Вторая область концентраций находится между точкой, соответствующей максимуму нерастворимости, и концентрацией ПАВ, при которой начинается образование мицелл. Считается, что в этой области изменения концентрации ПАБ происходит образование второго слоя анионов додецилсульфата на первом, связанном ионными силами, слое ПАВ на молекулах полимера. В этой области концентраций особенно интересны две точки. Первая точка соответствует концентрации, при которой наклон кривой зависимости амплитуды поглощения красителя от концентрации ПАВ принимает то же значение, что и в отсутствие полимера. Эта концентрация близка к насьщ1ающей концентрации, что хорошо видно на графиках зависимостей поверхностного натяжения и вязкости от концентрации ПАВ. При этом все места на полимере, с которыми могут взаимодействовать молекулы ПАВ, заняты, и начинается образование обычных мицелл ПАВ. Вторая точка соответствует уменьшению наклона графика зависимости амплитуды поглошения от концентрации ПАВ. Такое уменьшение наклона указывает на снижение эффективности (в ресчете на молекулу ПАВ) солюбилизации красителей комплексами. Это может быть связано с изменением размеров или конформации кластеров. К сожалению нельзя получить информацию о собственной солюбилизующей способности адсорбированных анионов додецилсульфата, поскольку неизвестна концентрация свободного ДСН. Эту концентрацию, по-видимому, можно было бы определить, проводя равновесный диализ. Очень низкая вязкость растворов во второй области изменений концентраций ПАВ также представляется интересным свойством исследованных систем. Сравнительно высокая вязкость растворов катионных полимеров объясняется наличием у них заряда, а также хорошо известной жесткостью молекулярного остова целлюлозы. Модель, предлагаемая нами для комплексов во второй области изменения концентрации ПАВ, заключается в том. [c.523]

Для системы метилцеллюлоза/ДСН имеются лишь две области солюбилизации, и свойства смешанных систем такого типа аналогичны свойствам систем катионный полимер/ДСН вне области осаждения. Свойства смесей метилцеллюлоза/ДСН детально были исследованы в работе [22] методами вискозиметрии и равновесного диализа. Было показано, что связывание ПАВ начинается при его концентрации около 4 мМ. Сделан вывод о том, что уменьшение вязкости при этой концентрации является результатом дезагрегации ассоциатов молекул метилцеллюлозы. Авторы считают, что метилцеллюлоза сильнее связывает анионы додецилсульфата вследствие небольшого остаточного положительного заряда на кислороде эфирной связи. Это приводит к образованию кластеров, возникновению солюбилизационной способности и, несомненно, вызывает конфигурационные изменения полимера, аналогичные тем, какие наблюдаются в катионных полимерах. Более гидрофобный характер полимера, на который указывают измерения поверхностного натяжения, вероятно, способствует образованию комплексов с ПАВ. [c.524]

Сывороточный альбумин — белок с молекулярной массой приблизительно 69 000, который содержит (наряду с полным набором других аминокислот) 16 остатков гистидина. Проведенное ранее методом равновесного диализа исследсвание связывания с 2п(П) и влияние этого связывания на равновесие сывороточного альбу- [c.280]

В 1963 г. Мальмстрём с сотр. [56] опубликовал серию работ, в которых изложил результаты тщательно выполненных экспериментов с использовании классического термодинамического метода равновесного диализа, дополненного методом электронного парамагнитного резонанса. Уделяя особое внимание тому, чтобы показать, что равновесие действительно достигается, и обрабатывая свои данные новым методом графического анализа, эти исследователи заключили, что связывание железа трансферрином можно описать, предположив участие в связывании двух эквивалентных невзаимодействующих центров. Если это так, то напрашивается вывод, что трансферрин в растворах не полностью насыщен железом и должны сосуществовать три типа белковых частиц частицы с двумя связанными атомами железа, частицы только с одним связанным атомом и частицы, не содержащие металла [59]. Вернер и Вебер [21] на основании электрофоретических диаграмм, скорее интуитивно, различили три типа молекул в неполностью насыщенных железом растворах кональбумина. Однако они не сопоставили это наблюдение со своими заключениями, сделанными на основании исследования равновесия. Позднее это предположение было детально подтверждено для трансферрина с помощью фронтального электрофореза методом движущейся границы [59], а окончательно для кональбумина методом изоэлектрического фокусирования [60]. Было высказано предположение, что частицы, обладающие промежуточной подвижностью при электрофорезе и в опытах по изоэлектрическому фокусированию, могут представлять собой димер апопротеина и белка, насыщенного железом [61]. Однако позднее было доказано, что это предположение несостоятельно [41]. [c.341]

Вся сумма имеющихся в настоящее время данных подтверждает мнение о том, что термодинамические константы, описывающие связывание железа с трансферрином, внутренне идентичны. Повторное изучение методом равновесного диализа связывания железа кональбумином также показало большое сходство в связывании металла этим белком и трансферрином [62]. По-видимому, более ранние данные Вернера и Вебера были получены до достижения равновесия, так как в этих опытах проходило только 18 ч между добавлением железа к раствору апокональбумина и временем наблюдения проведенное позднее исследование зависимости от времени показало, что для достижения истинного равновесия требуется по крайней мере несколько дней [56]. Физиологическое исследование Шэйда не содержало термодинамических измерений и поэтому не противоречит предшествующим результатам. Количественных данных о связывании железа с лактоферрином в настоящее время не имеется. [c.341]

Существуют некоторые разногласия по поводу значения чисел, полученных при измерении связывания металла с сидерофилинами методом равновесного диализа. Константы связывания К и /Сг характеризуют химические реакции, представленные выше уравнениями (1) и (2), и записываются в следующем виде [55] [c.342]

Многие из общих подходов к исследованию механизма действия ферментов также применимы и к изучению роли ионов металлов в ферментативном катализе. Схемы координации, описывающие взаимодействие фермента, металла и лиганда, могут быть изучены методами, применяемыми при определении стехиометрии и сродства связывания белками небольших молекул. Эти методы включают гель-фильтрацию в присутствии или в отсутствие небольших молекул [49], метод скоростного диализа [50], ультрафильтрацию, метод ультрацентрифугирования по Хейесу — Велику [52], равновесный диализ [53], а также методы для измерения только сродства взаимодействия [54—58]. Выбор схемы координации ионов металлов и лигандов с ферментами с помощью этих методов возможен только при отсутствии влияния других факторов. Например, если образуется комплекс Е — лиганд — М +, фермент должен проявлять значительное сродство к иону металла только в присутствии лиганда. И, наоборот, если образуется комплекс Е — М + — лиганд, то не должно происходить значительного связывания лиганда в отсутствие иона металла. Однако практически ферменты часто проявляют склонность к связыванию обоих компонентов комплекса, невзирая на выбранную схему координации. Следовательно, важны данные, полученные с учетом стехиометрических и кинетических критериев. Такие важные типы комплексов, как Е — лиганд — М + и Е — М + — лиганд, обычно содержат все три компонента в эквимолярных количествах. Более [c.449]

Новые методы анализа аминокислот, пептидов и белков (1974) -- [ c.408 , c.413 ]

Основы биологической химии (1970) -- [ c.73 ]

Теория и практика иммуноферментного анализа (1991) -- [ c.42 , c.43 ]

Методы исследований в иммунологии (1981) -- [ c.23 , c.32 , c.50 ]

Физическая Биохимия (1980) -- [ c.523 , c.524 ]

Мембранная фильтрация (1978) -- [ c.355 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология