Гомогенный анализ

Иммуноферментный анализ без разделения компонентов (гомогенный анализ) и с их разделением [c.12]

Гомогенный анализ. Все описанные выше методы анализа предполагают отдельные измерения. Для непрерывного мониторинга биологически важных соединений с помощью биосенсоров необходимо, чтобы сигнал был непрерывным и непосредственно зависел от изменяющейся концентрации анализируемого вещества, не требуя предварительного разделения пробы. Недавно на основе двух совершенно различных явлений были разработаны гомогенные методы иммуноанализа. [c.498]

Иммуноферментный анализ без разделения компонентов (гомогенный анализ) [c.13]

В этой главе мы рассмотрим принцип анализа гаптенов без разделения компонентов (т. е. гомогенного анализа). В табл. [c.37]

Показано, что модуляторы ферментов могут служить универсальными метками для иммуноферментного анализа без разделения компонентов (т. е. для гомогенного анализа). Предъявляемым требованиям лучше всего удовлетворяют модуляторы, легко образующие прочные конъюгаты с лигандами и обладающие высоким связывающим сродством к индикаторному ферменту. Для повышения чувствительности ИФА нужно использовать конъюгаты [модулятор — лиганд], проявляющие к индикаторному ферменту максимальное сродство. [c.66]

Основной проблемой гомогенного анализа, описанного вьш1е, является влияние мешающих веществ, что не дает возможности реализовать теоретическую чувстаительность. В табл. 7.9-4 проведено сравнение некоторых пределов обнаружения, полученных для отдельных вариантов с использованием флуоресцентной метки. [c.592]

Преимущество использования в качестве метки кофактора фермента, а не самого фермента, заключается в том, что его можио легко включить в схему усиления (рис. 7.9-17) н испольэовать в системе гомогенного анализа. Применяют конъюгаты гаптен-кофактор (например, NAD-гaпт н), и в присутствии соединения фepмeнт-NAD и субстрата конъюгат, связанный с антителом, неактивен, тогда как свободный конъюгат способен участвовать в ферментативном цикле. Каждый раз, когда конъюгат гаптен-кофактор претерпевает цикл уси- [c.596]

Однако все эти методы могут быть классифицированы согласно приведенной выше системе. Более детальную классификацию известных методов гетерогенного и гомогенного анализов можно осуществить с учетом схемы 4.2 и типа используемых в анализе меченных ферментами реагентов — антигентов, антител и вторичных антител. [c.83]

Гомогенный анализ разработан для определения циклического АМР из эритроцитов цыплят и IgG сыворотки крови. Корреляция полутенных результатов с данными обычных гетерогенных методов удоштетворительна (для сАМР коэффициент корреляции г=0,91, для IgG — 0,96). Основное преимущество систем с детекцией, основанной на определении отношения интенсивности излучения при Двух длинах волн, — это возможность устранения влияния образце, [c.145]

Совершенствование, сочетание и расширение этих способов и приемов позволили создать систему гомогенного анализа - нмму-ноанализ методом подсчета частиц (IMPA T). Эта глава посвящена описанию системы IMPA T и обсуждению основных направлений ее дальнейшего развития. [c.223]

Гомогенный анализ (homogeneous assay) - аналитическая система, в которой для количественной оценки иммунной реакции реагенты и системе не разделяют. [c.259]

Фермент-зависимые метки (ФЗМ) — универсальные и чувствительные метки для иммуноанализа. Они отличаются продолжительным периодом полуинактивации, не создают радиационной опасности и позволяют проводить, иммуноферментный анализ (ИФА) без разделения компонентов (гомогенный анализ). ИФА без разделения требует меньше манипуляций и легче поддается автоматизации. Однако на нынешнем этапе своего развития этот метод недостаточно чувствителен. В то же время ИФА с разделением компонентов (гетерогенный анализ) обладает высокой чувствительностью и дает возможность определять два различных вещества одновременно. Превосходным примером высокой чувствительности ИФА с разделением компонентов служит метод определения ферритина, позволяющий измерять 0,2 аттомоль, т. е. 2-10 моль вещества (Ishikawa et al., 1982). [c.32]

Иммуноферментный анализ с применением в качестве метки простетических групп (ИФАПГ) представляет собой метод иммуноанализа без разделения компонентов (т. е. гомогенного анализа). Метод основан на 1) способности прочного ковалентного конъюгата [лиганд—простетическая группа] активировать апофермент, который сам по себе не проявляет ферментативной активности 2) способности антител против лиганда соединяться с конъюгатом [лиганд—простетическая группа], лишая его возможности активировать апофермент. [c.69]

Хотя, строго говоря, метод ИААК должен быть отнесен к классу гетерогенных ИФА, этап разделения связанных и свободных реагентов в этом методе осуществляется настолько просто и быстро (особенно при использовании соответствующего оборудования), что позволяет сопоставить его с современными вариантами гомогенного анализа. Время инкубации после добавления к образцу препарата моновалентных антител, конъюгированных с ферментом, определяется главным образом концентрациями антител и антигена, поскольку их взаимодействие в данном случае представляет собой простую обратимую бимолекулярную реакцию, зависящую только от диффузии. В табл. 15-1 представлены результаты расчета скорости взаимодействия антиген — антитело в зависимости от их относительного содержания в реакционной смеси. Единственным допущением при расчетах является величина константы скорости прямой реакции ЫО л моль -с выбранная на основании данных, полученных для большинства исследованных систем взаимодействия небольших антигенов с антителами (Pe ht, 19 2). Из расчетных данных табл. 15-1 следует, что даже для определения тестируемого компонента, концентрация которого не превышает пикомолярного уровня, использование большого избытка конъюгата [фермент—антитело] (на наномолярном уровне) позволяет ожидать быстрого количественного связывания и завершения анализа не более чем за 5—10 мин. Кривая, построенная на основании изучения кинетики связывания дигоксина с мономерным конъюгатом [Fab — -галактозидаза] (рис. 15-2), подтверждает справедливость расчетных оценок. Концентрации дигоксина и конъюгата в этих экспериментах составляли 0,2 нМ и 10 нМ соответственно. Как видно на ри- [c.249]

Эти эффекты используют в модельной биотин-авидиновой системе, в которой при связывании интенсивность света, излучаемого люминольной меткой, возрастает в 10 раз. В нескольких методах гомогенного анализа стероидов используют дополнительное усиление света изолюмипольной метки при связывании стероида с антителом [22, 45]. [c.498]