Связывание количественные измерения

Константа равновесия для таутомерного перехода равна отношению мольных долей двух форм. Например, для енольной и кето-форм ацетона в воде это отношение равно 2-10 [8] для биполярных ионов и незаряженного пиридоксина [уравнение (2-3)] при 25 °С оно равно 4 [9]. Относительное содержание таутомеров урацила В, С и О по сравнению с таутомером А предположительно невелико, но количественные измерения здесь провести трудно [10, И]. Таутомерные отношения (определяемые для полностью протонированных форм) не зависят от pH, но меняются с изменением температуры, зависят от растворителя и весьма чувствительны к связыванию таутомеров с молекулами белка или другими молекулами. [c.79]

Качественное и количественное определение углерода и водорода в органическом соединении сводится к определению углекислого газа и воды в продуктах его сгорания. Азот при сгорании обычно выделяется в свободном виде и его объем (после связывания углекислого газа и воды) может быть измерен. [c.20]

При измерении манометрическим методом выделившиеся газы переводят в измеренный объем автоматическим насосом Теплера или диффузионным вакуумным насосом. Давление смеси измеряется манометром Мак-Леода. Затем по мере уменьшения числа молей газа измеряется падение давления. Вода удаляется из газовой смеси вымораживанием в ловушке при —78° С. СОа выводится из газовой смеси охлаждением до —145° С. Кислород количественно поглощается металлической медью при 500° С. СО переводится над СиО в СОа. Водород окисляется окисью меди до воды. В конце анализа в газовой среде остается только газообразный азот с примесью инертных газов, если они присутствовали в составе исходной газовой смеси. Парциальное давление азота в данной смеси может быть измерено связыванием азота металлическим кальцием при 900° С [54]. [c.154]

Другой метод изучения гомологии, который можно назвать методом реассоциации в растворе, основан на связывании одноцепочечных нуклеиновых кислот в растворе, т. е. в данном случае, в отличие от мембранного метода, когда один из компонентов связан, оба компонента находятся в растворе. За реассоциацией цепей ДНК можно следить с помощью ультрафиолетовой спектрофотометрии или, в случае инкубации небольшого количества денатурированной ДНК с высокой удельной радиоактивностью в присутствии большого избытка немеченой денатурированной ДНК, с помощью измерения радиоактивности. В последнем случае способность меченых фрагментов образовывать двухцепочечные комплексы с немеченой ДНК количественно определяют по адсорбции на гидроксилапатите или по устойчивости к гидролизу нуклеазой 51. [c.130]

Это быстрый и удобный метод измерения концентрации растворенных белков, основанный на количественном связывании белков с красителем. Он не применим для измерения белка в рассеивающих образцах. Хотя число соединений, мешающих определению белка этим методом сравнительно невелико, краситель реагирует более или менее сильно с различными очищенными белками. Поэтому определение концентрации различных по составу белков этим методом лишь до некоторой степени количественное. К преимуществам метода можно отнести быстроту определения (10 мин) и высокую чувствительность. К недостаткам — варьирование результатов при определении концентраций различных белков и необратимое денатурирование порции белка, пошедшей на определение. [c.140]

Другие методики. Когда определение ферментативной активности или прямые измерения радиоактивности не подходят для контроля элюирования, следует рассмотреть другие возможности для анализа связывания. Наибольшего внимания в качестве общего чувствительного метода количественного измерения подвижного компонента заслуживает, по-видимому, радиоиммуноанализ. Кроме того, может оказаться целесообразным измерение количества элюированного подвижного компонента с помощью количественного лигандсвязывающего анализа, например в случае доступности радиоактивно меченного лиганда, аналогичного по структуре иммобилизованному лиганду. [c.232]

Как и в варианте метода изотопного разбавления, не связанном с измерением химического выхода, главная задача заключается в выделении одинаковых количеств элемента из раствора и стандарта. Это выделение можно осуществить, используя субстехиометрический метод. К упомянутым растворам прибавляют совершенно одинаковые количества реагента, недостаточные для полного связывания носителя. Реагент должен взаимодействовать с элементом количественно, а образующееся соединение должно легко отделяться от избытка непроре5агировавшего элемента. Одним из лучших способов такого отделения является экстракция внутрикомплексных соединений с количеством реагента, меньшим субстехиометрического. [c.259]

Качественные результаты показывают, что константа равновесия связывания кислорода увеличивается с ростом донорных свойств аксиального лиганда в следующем ряду без аксиальных лигандовС Слиганды, координирующиеся атомом кислорода < лиганды, координирующиеся атомом азота. В ряду 7-замещенных пиридинов константа равновесия увеличивается в ряду СМ < Н <СНз < МНг. При замене экваториальных лигандов не наблюдается закономерного изменения константы равновесия реакции присоединения кислорода (см., например, работы [3, 69]). Большая часть аддуктов с кислородом образуется только при температуре ниже комнатной. Их образование, по-видимому, происходит очень быстро, однако количественных кинетических измерений этих реакций пока не проводилось. [c.147]

Все ферменты, содержащие металлы, подвергаются отравлению различными комплексообразующими реагентами. По карт1ше отравления судят обычно о том, какой именно металл содержится в белке. Следует помнить, однако, что константа устойчивости комплекса металла со специфическим реагентом, измеренная в растворе ионов металла, не дает количественной характеристики связывания металла, входящего в состав фермента с тем же реагентом. [c.169]

Для количественного О Пределения ЗН-групп была разработана методика, основанная на связывании ионов серебра сульфгидрнльньши группами, с обратным титрованием избытка серебра раствором глутатиона. Измерения проводили параллельно для обработанных и необработанных волос. Как видно из табл. 1, наиболее часто применяемые для пр1иготов-ления шампуней ПАВ не оказывают разрушающего действия на кератин волос, то ода как в случае обработки волос растворами щелочей разрушение значительное. [c.41]

Во-вторых, поскольку степень диссоциации а является мерой распределения противоионов между мицеллярной и водной фазами, изменения а будут отражать изменения концентрации противоионов в слое Штерна. Было разработано кшожество экспериментальных подходов для измерения сс, включая светорассеяние [12, 13], электропроводность [14], измерения электродвижущей сипы [ 15] и метод ион-селективных электродов [16]. Хотя количественное соответствие между различными методами для одного и того же ПАВ достигается довольно редко, появился ряд согласующихся друг с другом представлений [6, 17]. Обычно а увеличивается с ростом температуры, концентрации неэлектролита, с увеличением размеров полярной головки ПАВ и размеров гидратной оболочки гидрофильного противоиона (в соответствии с рядами Гофмейстера) и уменьшается с ростом длины углеводородной цепи ПАВ. Однако обшие тенденции не были выявлены дпя измерений а с ростом концентрации ПАВ и его гидрофильных противоионов. Напротив, в зависимости от примененного метода исследования и типа изученного ПАВ а может увеличиваться, уменьшаться или вообще остается постоянной. Сами изменения обычно малы, и для большинства ПАВ а меняется в интервале от 0,1 до 0,3 [6]. Исключения обычно удается объяснить наличием кроме кулоновских взаимодействий дополнительных сил связывания, таких, как перенос заряда или гидрофобные взаимодействия между мицеллой и противоионами [18—20]. [c.251]

Вся сумма имеющихся в настоящее время данных подтверждает мнение о том, что термодинамические константы, описывающие связывание железа с трансферрином, внутренне идентичны. Повторное изучение методом равновесного диализа связывания железа кональбумином также показало большое сходство в связывании металла этим белком и трансферрином [62]. По-видимому, более ранние данные Вернера и Вебера были получены до достижения равновесия, так как в этих опытах проходило только 18 ч между добавлением железа к раствору апокональбумина и временем наблюдения проведенное позднее исследование зависимости от времени показало, что для достижения истинного равновесия требуется по крайней мере несколько дней [56]. Физиологическое исследование Шэйда не содержало термодинамических измерений и поэтому не противоречит предшествующим результатам. Количественных данных о связывании железа с лактоферрином в настоящее время не имеется. [c.341]

Было найдено, что электрофоретические измерения наиболее подходят для оценки степени связывания противоионов в растворах ноли-электролитов. Нанример, Штраусс и др. [834] обнаружили, что электрофоретическая подвижность иона полифосфата почти не изменяется при добавлении 1 М раствора тетраметилбромида аммония к полифосфату тетраметиламмония, не содержащему солей наоборот, подвижность полифосфата снижается более чем в два раза при добавлении к полифосфату натрия 0,8 М раствора NaBr. Эта разница может быть объяснена специфическим связыванием противоионов натрия. Последующие исследования [835, 836] показали, что подвижность полииона, по-видимому, пропорциональна его эффективному заряду, и, таким образом, количественная оценка степени образования ионных пар может быть произведена в том случае, если подвижность полифосфата тетраметиламмония взята в качестве характеристики условий, при которых с полиионом специфически не связан ни один из противоионов. [c.305]

Выполнение указанного предположения требует очень тщательного выбора шкалы эффективностей - ведь мы можем использовать как саму экспериментально измеренную величину (например, константу связывания), так и функцию от нее (например, логарифм). Далеко не очевидно, что экспериментально измеренная величина или ее функция отражают аддитивную связь эффектов отдельных признаков. Клетка - слишком сложный организм и в нем присутствует много механизмов регуляции, изменяющих наблюдаемый эффект. Даже в случае измерений, проведенных in vitro, и выборе разумной функции, нет уверенности в аддитивности эффектов признаков. Быть может, правильнее использовать данные об эффективности функционального сигнала для ранжирования сигналов в порядке возрастания эффективности и требовать от алгоритмов распознавания не максимально точного количественного предсказания эффективности, а правильного порядка следования сигналов в одном ряду (или в нескольких рядах, если исследования были проведены в разных работах). [c.131]

Перспективный метод ИФА основан на применении антител, иммобилизованных на водорастворимом полимере. Принцип анализа состоит в следующем. К раствору иммобилизованных на полианионе антител добавляют определяемый и меченный ферментом антиген и проводят реакцию конкурентного связывания. Для разделения свободного и связавшегося в комплексе конъюгата вносят поликатион, который быстро и количественно образует с полианионом нерастворимый поликомплекс. После разделения жидкой и твердой фаз регистрируемая в надосадочном растворе или осадке ферментативная активность дает информацию о начальной концентрации исследуемого антигена. Для удобства измерения активности полученный осадок может быть вновь легко растворен при увеличении ионной силы. [c.112]

Несмотря на эти критические замечания, следует отметить, что симметричная модель означала большой шаг вперед в понимании кооперативности белковых молекул. Хотя в настоящее время имеются данные по отрицательной кооперативности, которые не удается объяснить с позиций симметричной модели, кинетические свойства ряда ферментов эта модель описывает вполне удовлетворительно. Например, Бланжи, Бюк и Моно [11] использовали симметричную модель для количественного описания кооперативных свойств фссфофруктокиназы из Es heri hia oli. Этот фермент представлял особый интерес в связи с возможностью проводить измерения связывания одного субстрата, фруктозо-6-фосфата, в широком интервале концентраций аллостерического активатора, АДФ, и аллостерического ингибитора, фосфоенолпирувата. Точное согласие между теорией и экспериментом для всех полученных данных можно рассматривать как веский довод в пользу адекватности симметричной модели. [c.185]

В 1959 г. Ялоу и Берсон разработали количественный иммунологический метод определения инсулина в плазме человека с использованием инсулина, меченного радиоактивным изотопом йода. Предложенный метод основан на конкуренции между немеченым инсулином плазмы и Ч-инсулином за постоянное и ограниченное число специфических мест связывания на антителах к, инсулину. Количество меченого инсулина, связавшегося с антителами, обратно пропорционально количеству инсулина в образце плазмы. Метод, столь простой и изящный по своему замыслу, удалось осуществить благодаря легкости измерения предельно низких уровней радиоактивности, а также благодаря высокой специфичности связывания определяемого, вещества антителами. Сочетание чувствительности и специфичности составляет основу этого гибкого аналитического инструмента, названного радиоиммунологическим анализом (РИА). [c.8]

Рассмотрим два примера. Первый пример — исследование связывания лиганда ферментом в ходе иекатализируемой реакции. При этом могут произойти два физических события связывание и индуцируемое лигандом конформационное изменение фермента. Чтобы установить число промежуточных стадий и определить соответствующие им константы скорости, прежде всего необходимо определить число времен релаксации и найти их концентрационную зависимость. В идеальном случае число времен релаксации будет равно числу стадий данной реакции. Если найдено даже одно время релаксации и его концентрационная зависимость нелинейна, это может означать, что процесс протекает в две стадии [например, уравнения (4.71) и (4.74)], Далее стоит воспользоваться несколькими физическими методами (например, исследовать флуоресценцию и поглощение лиганда и белка), поскольку некоторые стадии могут быть выявлены только с помощью одного из этих методов. В ходе рассматриваемой реакции могут протекать и другие физические процессы, например отдача или присоединение протона или изменение степени агрегации белка. В первом случае весьма полезен еще один метод — измерение pH, для чего можно использовать просто цветные индикаторы. Агрегация осложняет кинетические исследования, однако ее можно обнаружить и количественно охарактеризовать, что также даст дополнительную информацию. Для исследования простых реакций релаксационные методы часто оказываются эффективнее струевых, поскольку позволяют изучать более быстрые процессы. Однако иногда метод остановленной струи более ценен, например, при исследовании процессов, слишком медленных, чтобы применять метод температурного скачка. Кроме того, некоторые эксперименты (такие, как исследование влияния сильных изменений pH) можно осуществить только в том случае, если использовать методы, включающие быстрое смешивание реагентов (хотя небольшого изменения pH можно добиться, применив метод темпера- [c.151]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология