Область начала репликации

Для осуществления такого тасования целых комплексов информационных единиц (генов) необходимо, чтобы последовательности ДНК, являющиеся местами действия регуляторных белков, лежали поблизости от генов, кодирующих сами эти белки. Так, репрессор и белок Сго связываются с операторами, фланкирующими ген с1 белки О и Р действуют на область начала репликации (Ori), которая лежит внутри са- [c.76]

Нуклеосомы отсутствуют и в области потенциально активного промотора РНК-полимеразы II, даже когда транскрипция еще не началась. Так организована область вблизи начала транскрипции ранних генов ЗУ 40 (она же является областью начала репликации). Не обнаруживаются нуклеосомы и в регуляторных участках генов овальбумина кур, активных в клетках яйцевода, а также глобинов ых генов. [c.254]

Главным условием автономной репликации является наличие в составе плазмиды участков ri, т.е. области начала репликации. Эти участки резко отличаются у прокариот и эукариот. Поэтому челночный вектор должен содержать два таких участка. [c.304]

ДНК области начала репликации может быть выделена благодаря ее способности поддерживать репликацию любой последовательности ДНК, к которой она присоединена. Принцип такого подхода состоит в клонировании ДНК из области, несущей точку начала репликации, в такой молекуле ДНК, которая имеет подходящие генетические маркеры, но утратила точку начала. Подобная реконструкция приведет к образованию плазмиды, способной автономно реплицироваться лишь в том случае, если ДНК из области точки начала репликации будет содержать все необходимые для функционирования последовательности. (Такой подход был использован для идентификации центромерной или теломерной ДНК у дрожжей по их влиянию на выживаемость плазмиды гл. 28.) [c.398]

Один из источников этой вариабельности, а именно транскрипционное блокирование области начала репликации из-за наличия гомологов промоторных зон клонируемой ДНК, может быть частично элиминировано в результате использования сай- [c.71]

Генетические способы отбора требуют значительно меньших затрат труда, чем методы скрининга, что позволило разработать новые подходы, позволяющие проводить генетическую селекцию клонов, содержащих последовательности, гомологичные любой желаемой последовательности-зонду. Это дало возможность расширить применение этого метода, распространив его на задачи, обычно решаемые с помощью более трудоемких (и часто менее специфичных) методов скрининга. В общих чертах в основе всех этих подходов лежит следующее обстоятельство хотя в случае большинства специфических эукариотических последовательностей нельзя обеспечить генетическую селекцию в клетках Е. соИ, можно сконструировать пары векторов, позволяющие селектировать продукты гомологичной рекомбинации, обусловленной гомологией последовательностей между клонами. Такая селекция основана на том факте, что процессы, подобные репликации ДНК, транскрипции, мобилизации плазмид или упаковке ДНК в фаговые частицы, могут происходить только по is-схеме в отношении соответствующего регуляторного элемента (области начала репликации, промотора, сигнала мобилизации или упаковки). Чтобы исключить рекомбинацию между векторными последовательностями, нужно подбирать векторные пары, не обладающие взаимной гомологией (или в случае рекомбинации фагов без взаимной гомологии в пределах той области, которая определяется маркерами, используемыми для селекции). Соблюдение этого главного принципа лежит в основе и скрининга фаговых клонов с использованием рекомбинации между [c.77]

Можно рассматривать и другие подходы к селекции, дополняющие или заменяющие селекцию при упаковке. Такие подходы могут пригодиться в особых случаях — например, когда отбираемые рекомбинантные молекулы слишком велики, чтобы быть упакованными в Х-частицы, или когда проводят селекцию на высокую частоту рекомбинационных событий. При таких способах селекции может, в частности, использоваться контролируемая внешними условиями репликация одного из двух репликонов (такую возможность дают, например, космидные производные с температурочувствительной областью начала репликации К6К) или специфическая мобилизация плазмидных или космидных последовательностей. [c.80]

Последовательности бактериальных плазмид, включающие область начала репликации для размножения в Е. соИ и селективный бактериальный маркер. [c.241]

Область начала репликации [c.160]

Принципы конструирования и функционирования челночных векторов одинаковы, они должны включать в себя репликоны тех генетических систем, в которых будет происходить репликация челночного вектора. При этом используются области начала репликации генетических элементов, которые автономно суще- [c.103]

ORI - область начала репликации. [c.61]

Для некоторых лямбдоидных фагов (один из которых лямбда) была также определена нуклеотидная последовательность участков начала репликации. Оказалось, что они родственны между собой, однако отличаются от со-ответствуюшей области бактериальной ДНК. Теоретически фаговые области начала репликации способны образовывать клеверные листы (с более тесно расположенными ответвлениями). Как показано на рис. 31.8, консервативная последовательность находится справа от потенциального места этой структуры. Такая последовательность присутствует в ДНК Е. соИ, лямбда и другого фага, G4. Если допустить, что именно консервативные последовательности выполняют функции участков начала репликации, то следует отметить их вторичную структуру, которая скорее всего узнается именно благодаря своей структуре, а не нуклеотидной последовательности. [c.399]

ВЗЯТЫ области начала репликации) и ген устойчивости к кана-мимну из транспозона Тп903 как селективный маркер ([4] Эрик и др., в печати Крэг, неопубликованные данные). [c.81]

Недавно начали применять другие космидные или плазмид-ные векторы на базе репликонов, отличных от семейства olEl, которые также используют в рекомбинационных экспериментах в сочетании с подходящими векторами. В качестве примеров можно назвать селективные плазмиды, несущие область начала репликации R1 [11], космиды на основе pS lOl [17] и космидные векторы, использующие область начала репликации фага К [18]. [c.81]

Большая часть манипуляций, необходимых для конструирования плазмид и их размножения, осуществляется в Е.соИ. Поэтому такие плазмиды обязательно должны нести область начала репликации, наличие которой необходимо для их репликации в клетках Е. oli. Чаще всего с этой целью в состав вектора вводят соответствующие сегменты бактериальных плазмид, например pBR322. Кроме этого необходим маркер для селекции трансформантов в E. oli в случае плазмиды, показанной на рис. 7.1, эту функцию выполняет ген устойчивости к ампициллину. [c.211]

I ла репликации — либо SV-40 [22], либо вирус полиомы, [28],— I которая обеспечивает их высококопийную внехромосомную реп-i ликацию в подходящих клетках. В составе провируса присутст-f вует также область начала репликации плазмиды pBR322, [c.285]

Так называемые ретровирусные челночные векторы (один из прототипов — pZIP-Neo SV(X) 1 i[22]) разработаны специально для того, чтобы облегчить клонирование соответствующих провирусных ДНК. Как описано в разд. 9.3.2.4, челночные свойства pZIP-Neo SV(X) 1 обусловлены сочетанием в единой конструкции трех элементов области начала репликации SV-40, области начала репликации pBR322 и гена neo. [c.301]

Таким образом, способность к автономной репликации является важнейшим биологическим свойством любой плазмиды, обеспечивающим ее независимое (в определенных пределах) существование [95]. Автономная репликация обеспечивается наличием области начала репликации, на котором происходит сборка макромолекулярного комплекса, осуществляющего инициацию и продолжение синтеза плазмидной ДНК. Для своей репликации различные плазмиды имеют разную потребность в ферментах клетки-хозяина. Так, плазмиды olEl, используемые в качестве основы при конструировании многих векторных плазмид, для синтеза своей ДНК используют исключительно белки клетки-хозяина, в том числе ДНК-полимеразу I Е. соИ на ранних стадиях репликации и ДНК-полимеразу III - на заключительных. Синтез ДНК на этих плазмидах можно моделировать с использованием бесклеточных экстрактов бесплазмидных штаммов бактериальных клеток. [c.69]

Искусственные хромосомы дрожжей YA . Первые минихромосомы дрожжей были получены А. Мюрреем и Дж. Шостаком в 1983 г. Мини-хромосомы дрожжей YA представляют собой кольцевые молекулы ДНК, содержащие большинство вышеупомянутых генетических элементов, которые позволяют им стабильно существовать во внехромосомном состоянии в клетках дрожжей (рис. 10). Типичный вектор включает в себя две теломерные последовательности нуклеотидов TEL (Tetrahymena), необходимые для репликации концов мини-хромосомы, и область начала репликации ARS1, соединенную с последовательностью центромеры (СЕМ). Все эти функциональные элементы требуются для репликации YA -вектора и его [c.88]

Конструирование MA методом снизу вверх . При этом подходе искусственную минихромосому собирают из отдельных последовательностей, соответствующих теломерам, центромерам и областям начала репликации природных хромосом, с которыми объединяют требуемую рекомбинантную ДНК. Теломерные последовательности животных представляют собой тандем-но повторяющиеся последовательности вида (TTAGGG) , которые, будучи объединенными в повторы длиной 1 т.п.о., эффективно функционируют в клетках человека. В качестве областей начала репликации могут быть использованы различные последовательности, среди которых наиболее изучены соответствующие последовательности -глобинового гена человека. [c.99]

На рис. 9 представлена схема конструирования клонотеки геномной ДНК с использованием космидного вектора. Следует иметь в виду, что общие принципы получения клонотек генов приложимы и к любым другим векторам. На первом этапе конструирования осуществляют подготовку вектора и клонируемой ДНК. Космидный вектор расщепляют рестриктазами ВатШ и Smal, причем рестриктаза Smal расщепляет ДНК с образованием тупых концов. В результате образуются два плеча космидного вектора, содержащих область начала репликации ori, используемую системой репликации бактериальных клеток, и два селектируемых маркера, которые представляют собой гены устойчивости к антибиотикам - ампициллину (Атр ) и канамицину (КапО, а также два со -сайта хромосомы бактериофага X. Параллельно со всеми необходимыми предосторожностями получают препараты высокомолекулярной ДНК, которую необходимо клонировать. [c.156]

Получение временной экспрессии генов в клетках OS часто используется для быстрой наработки рекомбинантных белков и ДНК. При конструировании клеток OS клетки зеленой мартышки V-1 были трансформированы вирусом SV40 с дефектной областью начала репликации. В результате были получены три линии клеток ( 0S-1, 2 и 7), конститутивно экспрессирующих большой Т-антиген вируса. После проведения трансфекции клеток экспрессирующими плазмидами, содержащими область начала репликации вируса SV40, последняя эффективно взаимодействует с эн- [c.180]

Смотреть страницы где упоминается термин Область начала репликации: [c.403] [c.16] [c.42] [c.80] [c.81] [c.140] [c.206] [c.206] [c.211] [c.213] [c.243] [c.259] [c.280] [c.300] [c.301] [c.176] [c.162] [c.29] [c.70] [c.72] [c.87] [c.95] [c.98] [c.134] [c.171] [c.172] [c.358]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология