Дрожжи точки начала репликации

У дрожжей точки начала репликации не относятся к семейству повторяющихся последовательностей. Вполне возможно, что много разных последовательностей способны обеспечивать функцию точки начала репликации. Уменьшая размер клонированных фрагментов, можно определить минимальную последовательность, необходимую для обеспечения ars-функции. Единственная область гомологии ars-элементов представлена канонической последовательностью из 11 п. н. (в каждом элементе может быть не больше трех замен). Обычно эти последовательности находятся в окружении А—Т-богатой ДНК. [c.404]

ДНК области начала репликации может быть выделена благодаря ее способности поддерживать репликацию любой последовательности ДНК, к которой она присоединена. Принцип такого подхода состоит в клонировании ДНК из области, несущей точку начала репликации, в такой молекуле ДНК, которая имеет подходящие генетические маркеры, но утратила точку начала. Подобная реконструкция приведет к образованию плазмиды, способной автономно реплицироваться лишь в том случае, если ДНК из области точки начала репликации будет содержать все необходимые для функционирования последовательности. (Такой подход был использован для идентификации центромерной или теломерной ДНК у дрожжей по их влиянию на выживаемость плазмиды гл. 28.) [c.398]

Рис. 9-57. Метод выявления автономно реплицирующихся последовательностей (ARS-элементов) у дрожжей Эти последовательности выступают в роли точек начала репликации, содержащие их плазмиды способны самостоятельно реплицироваться в хозяйской клетке, не включаясь в состав хромосом.

Сайты, выполняющие роль точек начала репликации у эукариот, определены не достаточно четко. Более полные данные в этом плане имеются для дрожжей и нескольких вирусов животных. Можно сказать с уверенностью, что процессы инициации контролируются как в пространственном аспекте, так и во временном, поскольку соседние кластеры ori инициируются синхронно. Существует представление о том, что функциональные домены хроматина реплицируются как целостные единицы. При этом подразумевается, что точки начала репликации расположены вполне определенным образом по отношению к единицам транскрипции. [c.76]

При исследовании мутантных дрожжей были также получены важные сведения о биохимических процессах, связанных с клеточным циклом. Возник, например, вопрос, в скольких различных точках цикла действуют белки, идентифицированные с помощью мутаций d . Много разнообразных белков требуется, в частности, для репликации ДНК. Большое число различных продуктов, кодируемых генами d , должно работать одновременно для завершения фазы S так оно и оказалось в действительности. Аналогичным образом было показано, что белки у дрожжей распадаются по крайней мере на семь групп, каждая из которых участвует в одном из семи биохимических событий, необходимых для завершения цикла. Удалось определить последовательность, в которой действуют эти семь групп, и бьш поставлен вопрос необходимо ли завершение одного биохимического события из данной серии, для того чтобы мог начать работать какой-либо белок из следующего набора [c.171]

YA -векторы, которые также используются для клонирования больших фрагментов ДНК, представляют собой искусственную дрожжевую минихромосому. YA -вектор содержит центромеру, теломеры и точку начала репликации. В такой вектор можно встроить фрагменты чужеродной ДНК размером более 100 т. н. п., и такая минихромосома, введенная в клетки дрожжей, будет реплицироваться и вести себя аналогично другим дрожжевым хромосомам при митотическом делении. [c.41]

В группах активных репликонов средний размер реплицирующейся единицы определяется по расстоянию между точками начала репликации (т.е. между средними точками смежных репликонов). У многих высших эукариот они удалены друг от друга на 100-200 тысяч пар нуклеотидов. Следовательно, в гаплоидном геноме млекопитающих должно быть 20000-30000 репликонов. У D. melanogaster или у S. erevisiae репликоны меньше, их размер достигает в среднем 40 тысяч пар нуклеотидов. Это соответствует примерно 3500 репликонам на гаплоидный набор хромосом плодовой мушки и примерно 500 репликонам у дрожжей. Колебания в размерах отдельных репликонов большие, более чем десятикратные, так что указанные средние величины дают лишь приблизительные значения числа репликонов. [c.402]

Другая система предоставляет возможность для выделения дискретных точек начала репликации. Клетки дрожжей S. erevisiae, мутантные по какой-то функции, могут быть трансформированы путем добавления ДНК, которая несет копию гена дикого типа. Схема эксперимента представлена на рис. 31.13. Мутация клетки-хозяина должна затрагивать ген, продукт которого можно селектировать. ДНК клеток дикого типа выделяют, фрагментируют и клонируют в составе плазмид Е. oli. Гибридные плазмиды инкубируют с мутантными клетками дрожжей в таких условиях, в которых эти клетки способны выжить только в случае экспрессии гена дикого типа. В зависимости от частоты возникновения трансформированных клеток различают два типа трансформации. [c.403]

Вследствие различия в механизмах экспрессии генов у прокариот и эукариот, Е. oli может оказаться хозяином, мало подходящим для производства белков эукариотических организмов. Поэтому разработаны методы получения векторов для клонирования различных генов в клетках дрожжей - одноклеточных эукариот. Эти клонирующие векторы получают из репликонов дрожжевых клеток, так называемых 2 л-плазмид. Точки начала репликации этих векторов взяты у плазмид 2 л и у pBR322, в результате чего они могут реплицироваться как в дрожжевых клетках, так и в . соИ. Примером использования дрожжей для синтеза белков посредством клонирования генов эукариот может служить осуществленный таким образом синтез интерферона человека (интерферон-белок, обладающий противовирусным действием в клетках человека и, возможно, противоопухолевым действием вообще). [c.290]

Для того, чтобы молекула ДНК могла сформировать активную хромосому, она должна обладать способностью реплицироваться, разделяться при митозе и сохраняться в ряду клеточных поколений. Применение метода рекомбинантных ДНК к клеткам дрожжей позволило вьщелить и определить те элементы, которые превращают последовательность нуклеотидов в хромосому. Два из трех этих элементов были идентифицированы при изучении небольших кольцевых молекул ДНК, самостоятельно реплицирующихся в клетках дрожжей Sa haromy os erevisiae. Оказалось, что для репликации такой молекулы необходима специальная последовательность, которая выполняет роль участка инициации репликации ДНК (называемого также точкой начала репликации). В каждой хромосоме дрожжей таких участков несколько. Второй элемент, необходимый для функционирования последовательности ДНК как хромосомы, называется центромерой. Центромера соединяет содержащую ее молекулу ДНК с митотическим веретеном во время М-фазы (см. разд. 13.5.3). В каждой хромосоме дрожжей имеется только одна центромера. Если участок, выполняющий роль центромеры, встроить в плазмиду, то при делении каждая дочерняя клетка дрожжей обязательно получит одну из двух копий вновь реплицировавшейся молекулы плазмидной ДНК. [c.96]

Полагают, что автономно реплицирующиеся последовательност (ARS), сообщающие стабильность плазмидам дрожжей, являютс точками начала репликации. Однако доказать это весьма сложи Трудность состоит главным образом в выделении достаточно для анализа количества определенных реплицирующихся молек) [c.142]

Кольцевые дрожжевые плазмиды, содержащие точку начала репликации, но лишенные центромеры, особым образом распределяются по отдельным клеткам. При культивировании клета в условиях, когда требуется синтез кодируемого плазмидой продукта, только от 5 до 25% клеток содержат плазмиды. В то же время число копий плазмид в этих несущих плазмиды клетках составляет от 20 до 50 на клетку. Чтобы разрешить кажущийся парадокс-большое среднее число копий при малой численноств содержащих плазмиды клеток,-вы проводите анализ родословной, намереваясь выяснить порядок распределения плаз1шад митозе. Эксперимент основан на использовании штамма дрожжей, нуждающихся в гистидине, и плазмиды, содержащей ген синтеза гистидина, которого нет у клетки-хозяина. Штамм, несущий плазмиду, хорошо растет в селективных условиях, т. е. прн отсутствии в среде гистидина. С помощью микроманипулятора вы разделяете материнские и дочерние клетки на протяжении пяти циклов делений в селективной среде, а затем определяете число клеток, способных образовать колонию. На рис. 13-1(1 [c.254]

Некоторые особенности митохондриальной ДНК дрожжей (S. erevisiae). Гены, кодирующие белки, окрашены более интенсивно, а гены, кодирующие РНК,- светлее. Вставочные последовательности выделены точками (некоторые из них содержат открытые рамки считывания часть их указана). Серым цветом выделены неохарак-теризованные области некоторые из них содержат сайты начала репликации. Транскрипция в основном идет по часовой стрелке единственное известное исключение-транскрипция генов тРНК, начинающаяся в районе двух часов (отмечена стрелкой). [c.220]

Схематическое изображение челночного вектора для системы дрожжи-Е. соИ, сконструированного на основе дрожжевой 2мкм-плазмиды (выделена цветом). Часть вектора, произошедшая от Е oli, представляет собой плазмиду pBR322, Области начала репликации обозначены светлым овалом область HI S3, полученная из ДНК хромосом дрожжевых клеток, выделена точками. [c.253]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология