Вирусы идентификация

Идентификация по антигенной структуре. Реакция нейтрализации PH). Реакция нейтрализации инфекционного и цитопатического действия вирусов воспроизводится в чувствительных к вирусу живых системах. PH основана на нейтрализации инфекционной активности вирусов при связывании со специфическими противовирусными антителами. [c.270]

Иммунная электронная микроскопия. ИЭМ позволяет обнаружить специфически связанные с антителами вирусные частицы. Преимуществом этого метода является одновременная концентрация вируса и его идентификация с помощью специфической сыворотки. Предложенные модификации ИЭМ предусматривают обработку вирусосодержащего материала антисывороткой в высоком титре, добавление к осадку фосфорно-вольфрамовой кислоты или уранилацетата с последующим нанесением на пленку (подложку) и высушиванием. При электронной микроскопии видны скопления вирусных частиц. [c.276]

Рис. 21.10. Образование HSV-вектора с помощью рекомбинации. Проводят котрансфекцию кдетки-хозяи-на плазмидой, которая содержит терапевтический ген, фланкированный последовательностями ДНК из вспомогательных областей HSV-генома, и ДНК HSV дикого типа. HSV-геном реплицируется в клеточно1М ядре по типу катящегося кольца , при этом между фрагментами ДНК HSV, входящими в состав плазмиды, и ДНК HSV дикого типа может произойти рекомбинация (штриховая линия). Молекулы ДНК HSV дикого типа и рекомбинантного HSV упаковываются в вирусные частицы, высвобождающиеся из клетки после лизиса. Вирусы размножают и проводят скрининг бляшек для идентификации рекомбинантных HSV. Полученные HSV-векторы хранят в условиях, исключающих их загрязнение HSV дикого типа.

Для идентификации выделенных вирусов используют PH как наиболее специфическую. Менее специфичны РТГА и РСК они дают возможность выявить общие антигены, характерные для определенных групп арбовирусов. Реже применяют РИФ, РИА и др. [c.292]

Успехи современной медицины и сельского хозяйства часто зависят от того, удается ли обнаруживать специфические вирусы, бактерии, грибы, паразитические микроорганизмы, белки и низкомолекулярные соединения в организме человека или животных, в растениях, воде или почве. Например, профилактику и лечение любого инфекционного заболевания значительно облегчает ранняя и точная идентификация вызвавшего его патогенного микроорганизма. Для проведения многих диагностических процедур [c.181]

Вирусологическая диагностика — основана на выделении из исследуемого материала вируса и его последующей идентификации. [c.259]

После того как живые системы для культивирования вирусов подготовлены, дальнейшие этапы совпадают независимо от вида вирусов. Возможные отличия, связанные с различными способами культивирования, выявления и идентификации вирусов, будут рассмотрены по ходу изложения. [c.262]

Идентификация выделенных вирусов [c.270]

Методики перечисленных серологических реакций подробно описаны в разделах, посвященных выявлению и идентификации вирусов в культурах клеток. Здесь мы приводим их особенности и модификации, которые применяются при серологической диагностике вирусных инфекций. [c.273]

Выделение и идентификация вируса по биологическим свойствам [c.286]

Области применения методики флуоресцентных антител крайне многочисленны, поэтому приводим лишь некоторые примеры а) локализация антигенов в тканях, в том числе выявление антигенов пневмококков, риккетсий и патогенных вирусов б) специфическое выявление микроорганизмов (серологическая идентификация) в) выявление специфических антител в тканях и жидкостях организма г) локализация гормонов в клетках разных органов и тонкая локализация. [c.292]

Дальнейшие данные были получены с помощью актиномицина D [126]. РНК, экстрагированная из асцитных опухолей Кребс II и отцентрифугированная затем в сахарозном градиенте, образует три пика, поглощающих при 256 ммп. При идентификации оказалось, что пики эти соответствуют РНК с константами седиментации 30S, 19S и 4S. Если клетки в течение короткого времени (20 мин) инкубировать с уридином, меченным тритием, то радиоактивность обнаружится только в двух пиках меньшая — в пике 4S-PHK (растворимая РНК) и большая — в очень небольшом пике 40S-PHK. Обычные клетки и клетки, зараженные вирусом ЕМС, дают аналогичные результаты. При более длительной инкубации (2 час) радиоактивность находят не только в пике 40S-PHK, но и в трех пиках, поглощающих в ультрафиолете. Такая же картина наблюдается в зараженных клетках. [c.247]

Основным фактором, осложняющим изучение инфекций в их латентном состоянии, является ничтожно малый размер вирусных частиц или части провирусов и небольшие морфологические отличия этих низших таксономических единиц, в связи с чем идентификация одного и того же вируса в двух разных хозяевах или двух разных вирусов в одном хозяине представляет почти непреодолимую трудность. Учитывая большую частоту заражения хозяев латентными вирусами, очень трудно установить, идентичен ли выделенный после заражения вирус тому вирусу, которым заражался [c.74]

Отдельные пятна элюируют, и в тех случаях, когда не требуется дополнительной очистки, олигонуклеотиды идентифицируют и определяют молярную концентрацию по их радиоактивности относительно суммарной радиоактивности. Типичные фингерпринты, полученные для РНК вируса-сателлита вируса некроза табака путем гидролиза панкреатической иТ -РНК-азами, показаны на рис. 11.1 и 11.2. Совпадение картин, полученных в разных лабораториях, подтверждает, что для идентификации мономеров, димеров и тримеров достаточно знать их положение на фингерпринте. [c.265]

Идентификацией обширного круга энтомофагов, начиная с вирусов и кончая насекомыми и позвоночными животными, вклад систематики в прогресс биологических и интегрированных методов не исчерпывается. [c.41]

Предварительно клонированные гены вводят в клетку животных различными путями. Суть одного из них состоит в трансформации клеток требуемым геном, соедршенным с одним из генов, для которых осуществляется селекция. Для идентификации и последующего размножения клеток, содержащих интегрированную ДНК, был разработан метод, получивший название метода маркера. Примером может служить метод получения клеток, дефектных по синтезу фермента тимидинкиназы (ТК -клетки). Такие клетки трансформировались фрагментами ДНК вируса герпеса (HSV), содержащего ген фермента ТК, и после трансформации они приобретали способность к синтезу фермента на селективной среде, т.е. становились ТК -клетками. Клетки ТК легко отличаются от клеток TK , поскольку способны расти на средах с ами-ноптерином (ингибитор, блокирующий определенные стадии биосинтеза нуклеотидов), гипоксантином и тимидином. Следовательно, в данном случае для трансформации клеток животных бьши использовапы гибриды бактериальных плазмвд с геном ТК из вируса герпеса. Для этого предварительно проводили клонирование и идентификацию генов в клетках Е. соИ и затем полученная рекомбинантная плазмида вводилась в ТК -клетки. Анализ мето- [c.125]

Визуальная идентификация зон лизиса — утомительная и субъективная процедура. Вместо нее для обнаружения рекомбинантных бакуловирусов можно использовать ДНК-гибридизацию или полимеразную цепную реакцию (ПЦР). Кроме того, если под контроль промотора бакуловируса, активного с ранних и до поздних стадий литического цикла, поместить ген la Z Е. соН, кодирующий -галакгозидазу, и такую конструкцию включить во фрагмент ДНК, встраивающийся в геном A MNPV, то в присутствии хромогенного субстрата -галактозидазы зоны с рекомбинантными вирусами окрасятся в синий цвет. [c.144]

ELISA применяется для обнаружения различных белков, идентификации вирусов и бактерий, а также определения низкомолекулярных соединений в широком спектре биологических образцов. Чтобы повысить специфичность первых антител, для диагностики часто используют моноклональные антитела. При этом для уменьшения стоимости прибегают к технике клонирования их фрагментов в Е. соИ и получают комби-наторггую библиотеку, а на ее основе - широкий спектр комбинаций Fv-фрагментов. [c.201]

В 1980 г. Верховный суд США вынес определение, что изобретение, которое включает что-либо, созданное под солнцем руками человека , является охраноспособным. В 1988 г. было запатентовано первое животное, полученное с помощью методов генной инженерии, — трансгенная мышь. В ее ДНК бьш встроен ген, ответственный за образование злокачественных опухолей (онкоген), который находился под контролем промотора на основе длинного концевого повтора вируса опухоли молочных желез мыши (ЬТЯ ММТУ). Онкоген представлял собой ген туе вируса миелоцитоматоза цыпленка ОКЮ. Изобретение заключалось в клонировании химерного гена ЬТК ММТУ—т>>с в плазмиде, введении линеаризованной плазмидной ДНК в мужской пронуклеус оплодотворенных одноклеточных мышиных яйцеклеток, идентификации потомков, экспрессирующих ген туе, и получении линий трансгенных мышей. У животньгх одних линий ген туе экспрессировался в различных тканях, у животных других экспрессия ограничивалась одной или несколькими тканями. По утверждению Ледера [c.538]

Идентификацию вирусов проводят по следующим признакам вирусиндуцированным патологическим изменениям в чувствительных живых системах [c.270]

Реакция торможения гемагглютинации РТГА). Эта реакция основана на блокировании вирусных гемагглютининов специфическими антителами. Ее можно рассматривать как частный случай реакции нейтрализации. РТГА может быть использована как для серологической диагностики, так и для идентификации гемагглютинирующих вирусов. Феномен РТГА проявляется в образовании компактного осадка эритроцитов вместо зонтика гемагглютинации. Реакцию проводят на полистироловых пластинах и оценивают по отсутствию склеивания эритроцитов, добавленных к смеси вируса и специфической сыворотки. Для удаления или разрушения неспецифических ингибиторов гемагглютинации сыворотки, используемые для РТГА, предварительно обрабатывают перйодатом калия, каолином, бентонитом, ацетоном или другими веществами. Затем готовят двукратные разведения сыворотки в ИХН и к каждому разведению добавляют равное количество вирусосодержащей жидкости с активностью 4 ГЕ. Смесь инкубируют 30 — 60 мин при необходимой для данного типа вирусов температуре (0,4, 20, 37 °С), а затем добавляют равный объем 0,5 — [c.271]

Реакция торможения гемадсорбции РТГадс). Данная реакция основана на нейтрализации эффекта адсорбции эритроцитов на поверхности клеток, инфицированных вирусами. РТГадс используется для идентификации гемадсорбиррующих вирусов. По 0,2 мл специфической сыворотки, разведенной 1 5, вносят в пробирки и после инкубации в течение 30 — 60 мин добавляют по 0,2 мл 0,5%-й взвеси эритроцитов. В контрольные пробирки закапывают нормальную сыворотку (неиммунную сыворотку того же вида животного) и эритроциты. Пробирки инкубируют 20 — 30 мин при температуре, оптимальной для гемадсорбции выделяемого вируса. [c.272]

Для антигенной идентификации вирусов в клеточных культурах можно также использовать РПГ, РСК, РИФ, РОПГА ИФА, РИА со специфическими иммунными противовирусными сыворотками или моноклональными АТ. Методики этих реакций описаны в подразд. 3.2. [c.272]

Идентификация по другим признакам. Специфические вирусин-дуцированные патологические изменения в живых системах и морфологические свойства вирусов приведены при рассмотрении конкретных вирусных инфекций. Молекулярно-биологические методы диагностики вирусных инфекций детально описаны в подразд. 1.7. [c.272]

Для идентификации вирусов применяют РТГадс, РТГА, РСК, ИФА (в РТТадс используют сыворотки с титрами не менее 1 160). Если выделенный вирус имеет измененную антигенную структуру, то РТГадс и РТГА с имеющимися специфическими сыворотками могут быть отрицательными. В таком случае используют РСК, выявляющую более стабильные в антигенном отношении типоспецифические вирусные белки. Для идентификации вируса в куриных эмбрионах и тканевых культурах широко применяется PH. [c.280]

Идентификацию штаммов вирусов Коксаки А, В и E HO, обладающих гемагглютинирующими свойствами, осуществляют с помощью РТГА с использованием антигенов из зараженных клеточных культур и 1%-й взвеси эритроцитов человека группы 0(1). [c.298]

Выделение и идентификация вируса. Вирус выделяют путем заражения чувствительных животных (шимпанзе и обезьян-мармо-зеток), а также культуры человеческих лимфоцитов, стимулированных фитогемагглютинином, фильтратом фекалий. Вирусный антиген в цитоплазме гепатоцитов определяют с помощью РИФ, скопления вируса позволяет выявить также электронная микроскопия. [c.303]

Разработанные в последние годы методы селективного гидролиза, разделения и идентификации открыли новые возможности для химического изучения структуры полипептидов и белков. Как уже указывалось, эти природные продукты включают разнообразный материал антибиотики, гормоны, токсины, ферйенты,. вирусы, волокна и т. д. Хотя за короткий период времени был достигнут большой прогресс в выяснении структуры различных природных продуктов, работа по установлению химической структуры белков в значительной степени осложнена их макромолеку-лярной природой. Изучение последовательности аминокислот в полипептидах и белках показывает наличие в них своеобразных группировок аминокислот. Например, из семи основных аминокислот, имеющихся в АКТГ, четыре расположены по соседству, а все семь включены в последовательность из 14 аминокислот из семи кислых аминокислот, ирисутствуюпщх в этом гормоне, три находятся по соседству друг с другом. В рибонуклеазе три остатка серина и три остатка аланина находятся рядом аналогична располагаются три ароматические аминокислоты в инсулине. Для ряда ферментов — тромбина, трипсина, химотрипсина и фосфоглюкомутазы было отмечено наличие одинаковой последовательности из шести аминокислот. Отмечено, что в структуре-и механизме действия протеолитических ферментов важную роль играют определенные трипептиды [160]. В настоящее время из-за ограниченности наших знаний относительно точного молекулярного механизма действия гормонов и ферментов можно делать только предположения о значении тёх или иных аминокислотных группировок. Вопрос о связи определенной последовательности аминокислот с функциями различных соединений может быть выяснен лишь по мере накопления экспериментального материала. Тем самым, по-видимому, станет возможным значительно более полное понимание механизма действия природных соединений на молекулярном уровне. [c.418]

Для подтверждения диагноза мозг заболевших мышей исследуют на наличие телец Бабеша—Негри или антигена вируса бешенства в РИФ. Идентификацию проводят с помощью PH на мышах. [c.307]

Выделение вируса. При проведении вирусологических исследований следует учитывать, что для культивирования 5-19 обычные клеточные культуры не подходят. Он развивается в культурах клеток костного мозга человека, селезенки плода, пуповинной крови и культурах периферической крови, стимулированных эрит-ропоэтином. Выход вирусов при этом незначительный. Идентификацию вируса в культуре клеток проводят путем выявления специфических вирусных белков (преимущественно в ядре и периферической части цитоплазмы) в РИФ, а также путем выявления вирусной ДНК с помощью ПЦР или ДНК-гибридизации. При [c.309]

Эмбриональные и другие ткани для репродукции вирусов и получения вирусных вакцин. Из эмбриональных тканей наиболее широко используемыми являются эмбриональные ткани цыпленка, мыши и человека. Особенной выгодой отличаются куриные эмбрионы (по доступности) десяти-двенадцатисуточного возраста, используемые преимущественно для репродукции вирусов и последующего изготовления вирусных вакцин. Куриные эмбрионы введены в вирусологическую практику в 1931 г. Г. М. Вудруфом и Е. У. Гудпасчером. Такие эмбрионы рекомендуют также для выявления, идентификации и определения инфицирующей дозы вирусов, для получения антигенных препаратов, применяемых в серологических реакциях. [c.544]

Выделение (изоляция) вирусных частиц. Диагностика вирусных болезней основана на идентификации вирусных включений и частиц. Для этого необходимо прежде всего уметь обнаружить, и охарактеризовать по морфологическим признакам исследуемый материал в тканях хозяина. Изменения, происходящие в тканях насекомых под воздействием вирусов, описаны в разделах, посвященных различным типам возбудителей. Наиболее распространенные болезни, какими являются ядерные и цитоплазменные полиэдрозы или гранулезы можно диагностировать под микроскопом по массе полиэдров и включений, которых находят в пораженных тканях, в жировом теле, в гиподерме, трахейной выстилке, а также в кишечнике хозяина. Полиэдры и гранулы плохо окрашиваются анилиновыми красками, особенно в жировом теле, поэтому материал перед окрашиванием необходимо обрабатывать слабой кислотой или щелочью. Полиэдры и включения нерастворимы в воде, даже в горячей, в естественных препаратах лежат на дне, тогда как жировые капельки плавают на поверхности. В отличие от белковых частиц, имеющих подобные же свойства и расположенных в жировом теле гусениц бабочек перед окукливанием, вирусные частицы окрашиваются после обработки материала 1%-ным NaOH или 2%-ным НагСОз и видны внутри включений в виде мелких темных точек. При определении вирусов очень важно точное определение гистологическими методами мест включений. [c.78]

Помимо рассмотренных работ следует также указать па работы, в которых электронная микроскопия в сочетании со структурными методами применялась для исследования морфологических и структурных превращений, имеющих место при старении гелей гидроокиси алюминия [71—74]. Так называемые вильштеттеровские С-альфа-, С-бета- и С-гамма-гели гидроокиси алюминия, представляющие особый интерес ввиду их сорбционных свойств по отношению к энзимам и вирусам, отличаются разнообразгем формы частиц и изменением этой формы и свойств при старении. Электронно-микроскопическое исследование старения С-альфа-гелей показало, что сферические или бесформенные вначале частицы через несколько часов превращаются в кристаллические фибриллы, характерные для С-бета-гелей, которые далее переходят в соматоиды [71]. Электронномикроскопическое и рентгеновское изучение гелей позволило констатировать сложную морфологию и различную кристаллическую структуру частиц в зависимости от метода приготовления и возраста геля [72]. Например, С-гамма-гели и соответствующие золи состоят из гексагональных призм, которым мон<но приписать структуру гибсита, а также из конусообразных частиц со структурой байерита. Су уки [73], изучая старение гелей гидроокиси алюминия при повышенной температуре, описал превращение вначале аморфных частиц в волокнистые кристаллы бемита и далее в гексагональные монокристаллические пластинки гидратов байерита и гидраргиллита. Идентификация кристаллов осуществлялась электронографическпм методом. [c.153]

Хотя различные вирусы вызывают отличающиеся морфологические цитопатическне эффекты, этот феномен не может быть использован для окончательной идентификации вирусов, так как некоторые вирусы, принадлежащие к различным группам, образуют одинаковые БОЕ. [c.279]

После того, как Янак [210] впервые применил метод ПГХ в биохимических исследованиях, проявлен большой интерес к использованию метода для изучения и анализа различного рода биологических макромолекул животного и растительного происхождения. Особенно широкое распространение ПГХ получила и для идентификации микроорганизмов (бактерии, вирусы, грибки, плесень и т.п.), различных биополимеров (пептиды, протеины, углеводы, липиды), геополимеров, содержащих живые и неживые клетки (керогены, битумы, органическое вещество земли и планет), биомасса растительного происхождения (целлюлоза, лигнин, терпены). [c.217]

В отфильтрованных от Ni прогидрированных растворах параллельно с исходными растворами анализировали качественное и количественное содержание примесей методом газожидкостной хроматографии, основанным на идентификации компонентов по относительным удерживающим объемам Определение ЦГН и ЦГЛ проводили на хроматографе Цвет-1 с катарометром с использованием 10% ПЭГ 1500 на тефлоне, лри длине колонки 2 м, температуре 110°С и ско рости 1 одачи гелия 3,6 л ч, а определение ЦГО и АН —на хроматографе Вирус с катарометром с использованием 30% ПМФС-4 на хромосорбе W, при длине трубки 4 лг, температуре 190°С и скорости подачи гелия 3,6 л/ч. [c.55]

Рассмотрим негативное влияние микроорганизмов на здоровье человека, животных и растений. Необходимо иметь в виду, что развитие болезни — это обоюдный процесс, в котором не последнюю роль Ифает подвергшийся инфицированию макроорганизм. Болезнетворные микроорганизмы имеются среди вирусов, бактерий, грибов и простейших. Определение инфекционного агента проводится, как правило, по стандартной схеме с использованием дифференциально-диагностических сред и биохимических тестов. В настоящее время эта идентификация упрощена, так как разработаны тест-наборы для экспресс-методов, а также выпускаются готовые индикаторные среды. [c.307]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология