Методы титрования вирусов

Количество вирусных частиц определяют методом титрования по ЦПД в культуре клеток. Для этого клетки культуры заражают десятикратным разведением вируса. После 6—7-дневной инкубации их просматривают на нмичие ЦПД. За титр вируса принимают наибольшее разведение, которое вызьшает ЦПД в 50% зараженных культур. Титр вируса выражают количеством цитопатических доз [c.59]

Рис. 8.4. Титрование вируса полиомы методом бляшек на первичной культуре клеток почки мыши, а — контрольная культура б — заражение культуры 10 -кратным разведением заготовки вируса приводит к образованию 14 бляшек в — заражение культуры 10 -кратным разведением заготовки вируса приводит к образованию 90—100 бляшек е — заражение культуры 10 -кратным разведением. Титр исходной заготовки вируса 1,2-10 БОЕ/мл. (Фотографии взяты иа статьи 15 и перепечатаны с разрешения авторов)

Если культуральная жидкость обладает антивирусным действием, ТО в среде, окружающей ткань, не будет обнаружено вируса. При отсутствии антивирусного действия вирусы будут интенсивно размножаться в клетках ткани, что может быть легко обнаружено методом титрования на эритроцитах. [c.161]

Оба описанных выше метода определения титра вируса страдают одним общим недостатком — необходимостью строить калибровочные кривые на основе точных стандартов. Кроме того, этими методами нельзя различить дефектные вирусы и полноценные инфекционные частицы. Очевидно, что наиболее информативными следует считать такие методы титрования вируса, которые основаны на определении количества инфекционных частиц с помощью биологических тестов. В случае репликационно-компетентного MLV этой цели отвечает анализ бляшек с использованием ХС-клеток [15]. Однако обычно нет нужды [c.298]

Методы титрования вирусов [c.169]

Из множества методов, применяемых для титрования аденовирусов, мы опишем три следующих титрование вируса методом бляшек, титрование вируса по ЦПД определением конечной точки и метод флуоресцирующих фокусов. [c.265]

Наиболее точным методом титрования, несомненно, является метод бляшек. Однако он предполагает сохранение стабильного монослоя клеток при длительном культивировании. Метод титрования вируса по ЦПД определением конечной точки, вероятно, наиболее прост в исполнении и достаточно чувствителен. В большинстве случаев можно ограничиться использованием этого метода. Метод флуоресцирующих фокусов, хотя и занимает меньше всего времени, однако требует большого количества реактивов и предварительного определения оптимального срока для подсчета фокусов первичной инфекции. [c.269]

Титр вируса в культуральной среде инфицированных клеток можно определить с помощью целого ряда методик, в основе которых лежат физические, биохимические или биологические методы анализа. Наибольшее распространение получил способ, заключающийся в количественном определении вирусной геномной РНК в культуральной среде с помощью гибридизации с меченным ДНК-зондом. Эту стандартную процедуру дот-блот-гибридизационного анализа проводят после концентрирования препарата вируса, как описано в табл. 9.4. Количественное определение достигается путем сравнения интенсивности полученного гибридизационного сигнала с интенсивностью контрольных сигналов гибридизации точно титрованного вируса (разд. 9.6.1.3) или известных количеств РНК, или ДНК, нанесенных на фильтр. Используя разные ДНК-зонды, можно оценить концентрацию индивидуальых компонентов в вирусном препарате и непосредственно определить, содержит ли вирус интересующие нас последовательности. [c.297]

Многие из описанных здесь методов титрования исходно создавались для диагностических целей тем не менее они вполне применимы и для исследования антигенного родства между вирусами или механизмов репродукции. Титры инфекционности одного и того же вируса, определенные разными методами, как правило, неодинаковы. Обычно максимальный титр получают при внутримозговом заражении новорожденных мышат, однако материал из мозга животных иногда невозможно использовать без дополнительной многостадийной очистки. [c.105]

Рабдовирусы, обладающие цитопатогенным действием на клеточные культуры, дают бляшки, число которых пропорционально количеству вируса. Определение числа бляшек, образующихся в результате дегенерации зараженных клеток, лежит в основе наиболее точного метода титрования. Число бляшек (х), сформировавшихся при нанесении на клеточный монослой определенного разведения вируса (у) в объеме V, можно использовать для расчета титра (п) в БОЕ/мл по уравнению [c.116]

Титрование вирусов гриппа методом бляшек [c.178]

Титрование вируса методом бляшек [c.236]

Использовагтие фрагментов эмбрионов, т. е. кусочков скорлупы 11-дневных оплодотворенных яиц с присоединенной к ним хорионаллантоисной оболочкой, вместо целых эмбрионов лежит в основе весьма экономичного способа определения инфекционности препаратов, содержащих вирус гриппа. Данный метод, предложенный для титрования вируса гриппа еще до введения в практику культур клеток [14], и теперь весьма полезен для титрования щтаммов вирусов, не размножающихся в культуре клеток или при отсутствии подходящей культуры. [c.176]

При использовании данного метода особенно важен выбор соответствующей клеточной линии. Как правило, инфицирование монослоя клеток ВПК приводит к образованию мелких бляшек. Кроме того, частота их возникновения, как свидетельствует наш опыт, также небольшая. При титровании вируса на [c.276]

Авторы рекомендовали при титровании вируса полиомиелита методом бляшек в однослойных культурах, выращенных в чаш ках Петри диаметром 60 мм, использовать только те чашки, в которых число колоний не больше 40—50. Однако и при таких условиях около 10% бляшек не могут быть учтены в результате слияния. [c.180]

Нередко при работе с малоизученными штаммами или при ограниченном числе пробирок с культурой ткани экспериментатору не удается довести титрование вируса до дозы, дающей 100 /о эффект, В данном случае, как уже упоминалось, оригинальный метод Кербера не может быть использован. Однако ряд авторов на основании весьма сложного теоретического анализа пришел к выводу, что в этих условиях может быть применена измененная формула Кербера. [c.197]

Большим достоинством метода Кербера является возможность вычисления стандартной ошибки. Однако это осуществимо только для тех опытов, в которых испытываются дозы с равными интервалами между ними. Обычно при титровании вирусов в культуре ткани указанное условие соблюдается. [c.198]

Открытие явления гемадсорбции у вирусов, активно размножающихся в культурах ткани, но не вызывающих при этом или вызывающих незначительную дегенерацию, позволило разработать простые методы титрования вирусов и антител. [c.164]

Этот метод подробно описали Роу и сотр. (Rowe et al., 1970). Для титрования вируса-помощника в комплексе Эбелсона мож- [c.385]

Некоторые штаммы вируса бешенства тоже образуют четкие бляшки на монослое клеток хомячка ER в настоящее время эта линия клеток широко используется для размножения и титрования вируса бешенства и других вирусов [17]. Метод бляшек с использованием клеток ER особенно чувствителен при титровании стандартного штамма вируса бешенства VS, При работе этим методом используют монослойные культуры, выращиваемые в шестилуночных планшетах (диаметр лунки составляет 35 мм). [c.117]

Вирусы гриппа — это содержащие однонитевую РНК оболочечные вирусы, вызывающие серьезные эпидемические заболевания человека и многих видов животных, в частности лошадей, свиней, тюленей и домашней птицы. Известны три типа данных вирусов, выделенные на основании различий между нуклеокап-сидами в реакции связывания комплемента они отличаются также по биохимическим и биологическим свойствам. Вирусы типа А, способные к быстрым и резким изменениям антигенных свойств (антигенный дрейф), являются главной причиной пандемий гриппа человека поэтому они исследованы наиболее подробно. Большинство методов выращивания, очистки и титрования вирусов гриппа разработаны именно для вирусов этого типа. Вирусы типа В, хотя и не способны к антигенному дрейфу, по всем остальным биохимическим и биологическим свойствам очень близки к вирусам типа А поэтому их, как правило, можно выращивать и титровать, пользуясь теми же методами. С другой стороны, вирусы типа С по своим биохимическим свойствам весьма далеки от вирусов типов А и В соответственно они имеют и другие ростовые свойства. Поскольку вирусы этого типа изучены намного хуже, чем другие, в настоящей главе основное внимание уделено методам, разработанным для вирусов типов А и В, в особенности тем, с которыми авторы знакомы по собственному опыту. Тем не менее большинство этих методов применимы и к вирусам типа С. Данная глава представляет собой практическое руководство, и соответственно теоретические основы методов, как правило, не рассматриваются. При необходимости упоминаются некоторые биологические особенности вирусов и даются ссылки на соответствующую литературу однако полное описание этих свойств можно найти в недавно опубликованных подробных обзорах [1—3]. [c.161]

Множество попыток было предпринято для разработки удобных методов титрования медленно растущих вирусов. В боль- шинстве лабораторий остановились на методе определения конечной точки T IDso. Сложность данной проблемы заключается в сохранении клеточного монослоя в течение времени, необходимого для формирования бляшек. В нашей лаборатории используют следующую модификацию метода бляшек, рекомендованную Вентвесом и Френчем [28] [c.289]

Титрование вирусов в однослойных культурах тканей в настоящее время является одним из основных методов их количественного определения. Впервые однослойные культуры почечных клеток обезьян для титрования вирусов полиомиелита были предложены Янгнером (1954). Вскоре было показано, что использование однослойных культур позволяет обнаружить цитопатогенные свойства у вирусов E HO и Коксаки, группы осповакцины, у герпетических вирусов, у многих трансмиссивных вирусов, аденовирусов, кори и др. [c.134]

Гош и Янгнер (Gaush, Jonngner, 1959) предложили применять цветную пробу для титрования вирусов гриппа разных типов и для определения нейтрализующей активности гриппозных сывороток, Авторы использовали для работы клетки почек обезьян. Они показали, что титр, вычисленный по результатам цветной пробы, обычно на 0,56 единицы логарифма ниже по сравнению с результатами титрования во вращающихся пробирках. Метод цветной пробы позволил обнаружить четкие антигенные различия между щтаммами вирусов гриппа свиней, гриппа А, А2 и В. Была также показана пригодность этого метода для серодиагностики гриппа по нарастанию титра вируснейтрализующих антител в парных сыворотках больных. Отмечена высокая степень корре- [c.161]

Бакли разработала метод титрования антител к ряду трансмиссивных вирусов с помощью реакции задержки гемадсорбции. Первым очень важным моментом является удаление неспецифических ингибиторов гемагглютинации с помощью каолина. Затем сыворотку разводят 1 10 в боратном буфере (pH 9,0). Из данного разведения приготавливают последующие. Равный объем соответствующего разведения сыворотки смешивают с 100 тканевыми гемадсорбирующими дозами. Смесь после инкубации вносят в пробирки с культурой ткани. На 5-й день все культуры исследуют с помощью реакции гемадсорбции. При нейтрализации вируса исследуемой сывороткой гемагглютинины не образовывались и реакция гемадсорбции была отрицательной. [c.166]

Для выращивания однослойных культур рекомендуют использовать флаконы с плоскими стенками. При закрывании флаконов резиновыми пробками отпадает необходимость подачи в термостат воздуха, содержащего Oj. Как показали авторы в специальных опытах, культивирование клеток в герметически закрытых флаконах не отражается на результатах титрования вируса полиомиелита методом бляшек в сравнении с результатами, полученными при использовании клеток, выращенных в атмосфере СОг. В случае отсутствия небольших стеклянных флаконов, удобных для культивирования клеток, можно использовать чашки Петри, как это предлагают С. Г. Дзагуров и К- Т. Касымов (1957). В своих опытах они применяли чашки, края которых были склеены лейкопластырем, что создавало достаточную герметичность. По сообщению Гендерсона и Тейлора (1959), удобными для получения бляшек оказались также культуры, выращенные в пробирках. Правда, использование таких культур не может найти применение при изучении вирусов, которые образуют крупные колонии, так как клеточный слой в пробирке весьма невелик по площади. [c.169]

Эти наблюдения побудили авторов использовать культуры данного типа для титрования вируса лимфоцитарного хориоме-нингита по методу бляшек. В чашки Петри диаметром 10 см вносят 10 мл клеточной взвеси, содержащей 1,2—1,5X10 клеток и 1 мл. После формирования монослоя в каждую чашку вносили 0,5 мл соответствующего разведения вируса. Период адсорбции составлял Vi часа. Затем в чашки наливали по 4 мл покрытия, состоящего из 15% триптозофосфатного бульона, 1% агара и 84% среды 199- На 2-, 6- и 10-й день в чашки вносили дополнительно по 3 мл покрытия, причем в последний раз питательная смесь содержала нейтральный красный в концентрации 1 8000. [c.172]

Были проведены опыты, чтобы выяснить возможность применения отечественных образцов нейтрального красного при титровании вирусов методом бляшек. Во всех опытах при использова НИИ препаратов фирмы Дифко и образцов, изготовляемых нашими заводами, получались одинаковые результаты. [c.173]

Титрование методом бляшек вируса лолиомиелита типа I (штамм 54—1342) в культуре почечного эпителия обезьян [c.178]

Титрование методом бляшек вируса полиомиелита типа I (штамм Брундеи) в разных культурах ткани [c.182]

ТТрежде чем изложить технику вычисления по методу Рида и Менча, остановимся на тех условиях, соблюдение которых обязательно при данном методе. Принцип кумуляции предполагает,, Дчто, ЛНтервалы между всеми исследуемыми дозами представляют одинаковую величину (обычно при титровании вирусов разница между логарифмами двух соседних доз составляет 0,5 или 1). При вирусологических исследованиях важно, чтобы каждым исследуемым разведением вируса заражалось равное число жи-" вотных, к сожалению, это требование не всегда выполняется. Беренс (1929) рекомендовал использовать не менее 6 особей для испытания одной дозы, однако, в последующем стали ограничиваться 4 животными. Попытки некоторых авторов ограничиться [c.190]

Обработка результатов титрования вируса полиомиелита в культуре ткаки по методу Рида и Менча [c.192]

Сообщение Д Эрреля вызвало сенсацию среди медицинских микробиологов, поскольку он высказал идеи о роли фагов в развитии естественного иммунитета и об их использовании в борьбе с инфекционными болезнями. Несмотря на такие весьма ошибочные заявления, Д Эррель довольно близко подошел к современному представлению о фагах. С самого начала своих исследований Д Эррель считал, что фаги — это особые невидимые фильтрующиеся, самовоспроизводящиеся вирусы, облигатно паразитирующие на бактериях. В течение двух-трех лет со времени своего открытия он разработал метод точного подсчета, или титрования, фагов, а к 1923 г. он описал их жизненный цикл следующим образом фаговые частицы прикрепляются к поверхности бактерии и затем проникают в клетки, где они размножаются, образуя потомство многих вирусных частиц. После разрушения, или лизиса, клетки эти частицы выходят в окружающую среду вполне готовыми к новому заражению. [c.252]

Пуэ [20] и Перлманн с сотр. [19] показали, что после обработки препаратов ГТХ человека нейраминидазой их электрофоретическая подвижность изменяется приблизительно от —8,4-10" до —6,7-10 см сек в при pH 7. Это может происходить в результате уменьшения отрицательного или (по данным титрования) увеличения положительного заряда ГТХ. При pH 7 гидроксильная группа тирозина не заряжена и не может обусловливать такое изменение в подвижности. Пейп и Максфилд [45] нашли, что молярное количество аргинина в ГТХ, определенное по методу Сакагучи, увеличивается после действия нейраминидазы пропорционально количеству отщепленной NANA. Благодаря этому факту становится понятным обнаруженное увеличение положительного заряда, о котором было сказано ранее. В противоположность необычному поведению тирозина в ГТХ человека увеличение количества аргинина наблюдается в каждом из четырех исследованных гликопротеинов, оказывающих тормозящее действие на реакцию гемагглютинации под действием вирусов. В гликопротеипе, не оказывающем тормозящего действия (например, в фетуине), никаких изменений количества аргинина не обнаружено. [c.161]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология