Вирус дефектный

Ретровирусы можно рассматривать как природные векторы для переноса и экспрессии чужеродных генов. Ретровирусы с высокой степенью онкогенности быстро и весьма эффективно вызывают опухоли у млекопитающих и, как правило, способны трансформировать соответствующие клетки в культуре. За одним лишь исключением (разд. 9.3.3), эти вирусы дефектны по репликации, поскольку онкогенные последовательности клеточного происхождения заместили у них те вирусные последовательности, которые кодируют гранс-действующие функции [16]. Вирусные продукты, необходимые для репликации и интегра ции таких дефектных вирусов, обеспечиваются по транс-схеме не- [c.278]

Эукариотические вирусы до сих пор нашли более скромное применение в качестве векторов. Практически используются только онкогенный вирус SV 40 и его производные. Все эти векторы — дефектные вирусы, не способные давать полноценные вирусные частицы в клетке хозяина. Анализируемую ДНК можно вводить и в другие репликоны, способные размножаться в клетках, например бактериофаги. Чаще всего из известных фагов в качестве векторов применяют сконструированные производные фага X и фагов М13 и fd. В векторах на основе бактериофага I. используется его особенность, состоящая в том, что большая часть его ДНК не участвует в размножении фага в клетке. Это позволяет вводить чужеродную ДНК в ДНК фага X в качестве вектора. [c.120]

Использование ретровирусных векторов имеет и еще один большой недостаток. Хотя эти векторы создаются так, чтобы они были дефектными по репликации, геном штамма ретровируса (вируса-помощника), который необходим для получения большого количества векторной ДНК, может попасть в то же ядро, что и трансген. Несмотря на все принимаемые меры, ретровирусы-помощники могут реплицироваться в организме трансгенного животного, что совершенно недопустимо, если этих животных предполагается использовать в пищу или как инструмент для получения коммерческого продукта. И поскольку существуют альтернативные методы трансгеноза, ретровирусные векторы редко используются для создания трансгенных животных, имеющих коммерческую ценность. [c.419]

Дефектный вирус-сателлит вируса некроза табака. [c.30]

Термины неполноценный вирус и дефектный вирус можно определить следующим образом вирусы, лишенные способности синтезировать функциональную репликазу (как, например, вирус-сателлит вируса некроза табака), можно обозначить как неполноценные, тогда как вирусы, неспособные осуществлять синтез только одного или нескольких структурных белков, можно назвать дефектными. Недавно был опубликован обзор [262], в котором рассматриваются различные формы вирусов. Однако четкого различия между этими двумя терминами там не проводится. [c.169]

Оба описанных выше метода определения титра вируса страдают одним общим недостатком — необходимостью строить калибровочные кривые на основе точных стандартов. Кроме того, этими методами нельзя различить дефектные вирусы и полноценные инфекционные частицы. Очевидно, что наиболее информативными следует считать такие методы титрования вируса, которые основаны на определении количества инфекционных частиц с помощью биологических тестов. В случае репликационно-компетентного MLV этой цели отвечает анализ бляшек с использованием ХС-клеток [15]. Однако обычно нет нужды [c.298]

С методической точки зрения изучение болезней, вызываемых нуклеиновыми кислотами, аналогично изучению дефектных мутантов вирусов, которые не способны синтезировать функциональные белки оболочки. Такие мутанты были получены для ВТМ и РНК-содержащих фагов (см. разд. Л этой главы и гл. IX, разд. Б). [c.170]

Рис. 38.4. У дефектных в отношении репликации трансформирующих вирусов часть вирусной последовательности замещена последовательностью клетки. Длина замещенной последовательности характерна для каждого вируса.

ВИРУС-ПОМОЩНИК. Обладает функциями, отсутствующими у дефектного вируса, компенсирует их при смешанной инфекции. [c.520]

Чтобы получить вирусный препарат на основе дефектного по-репликации рекомбинантного ретровирусного вектора, плазмидную ДНК, содержащую провирусную форму рекомбинанта, необходимо ввести в клетки, способные упаковать ретровирусную РНК в вирусные частицы. Для этой цели подходят, например, линии фибробластов, продуктивно инфицированные соответствующим хелперным вирусом — получается вирусный препарат, представляющий смесь рекомбинантного и хелперного геномов (разд. 9.4,2). Альтернативный вариант — использование ретровирусных упаковывающих клеточных линий для получения вирусных препаратов, свободных от хелперных компонентов. [c.287]

В вирусной РНК записана информация для синтеза по крайней мере трех групп вирус-специфических белков структурных белков сердцевины вириона (Qag-белков), ферментативных белков, принимающих участие в обратной транскрипции вирусного генома и в интеграции вирус-специфической ДНК и клеточной хромосомы (продуктов гена pol), и белков, входящих в состав наружной липо-протеидной оболочки вириона (Env-белков). У некоторых ретровирусов есть дополнительные гены нередко наблюдаются также всякого рода перестройки генома, что обычно ведет к дефектности вируса, т. е. к его неспособности размножаться без вируса-помощника. [c.309]

Результаты многочисленных исследований свидетельствуют о том что генетический код, установленный для Е. соИ, является универсальным. Так, например, в лабораториях Уитмана и Френкель-Конрата препарат РНК, экстрагированный из вируса табачной мозаики, обработали азотистой кислотой известно, что при этом происходит дезаминирование многих остатков цитозина с образованием урациловых остатков, в результате чего кодоны U U (серин) превращаются в UUU (фенилаланин). Аналогичным путем из кодона ССС (пролин) может образоваться СиС (лейцин). Оказалось, что при заражении растений табака препаратом РНК, обработанной азотистой кислотой, аминокислотная последовательность вирусного белка оболочки, выделенного из мутантных штаммов, действительно меняется [22]. Причем многие из происшедших изменений можно было точно предсказать исходя из данных, приведенных в табл. 15-3. Сходным образом, замены аминокислот в дефектных молекулах гемоглобина (рис. 4-17) в большинстве случаев могут быть обусловлены изменением только одного основания. Так, гемоглобин S может образовываться в результате одного из следующих изменений в седьмом кодоне GAA(Glu) GUA(Val) или GAG(Glu)- ->GUG(Val). Еще один аргумент в пользу универсальности генетического кода состоит в способности рибосом и молекул тРНК из Е.соН осуществлять трансляцию цепи мРНК, кодирующей синтез гемоглобина, и синтезировать при этом полноценный гемоглобин [23]. [c.195]

Рассмотрим теперь вкратце не совсем понятные химические явления, лежащие в основе таких явлений, как генетическая рекомбинация, интеграция вирусной ДНК с геномом клетки-хозяина и исключение профага из хромосомы клетки-хозяина. О сложности процесса рекомбинации свидетельствует тот факт, что у мутантов, дефектных по способности к рекомбинации, мутации локализуются не в одном, а в нескольких участках (генах) хромосомы Е. oli-, соответствующие гены обозначаются через гесА, В, С, F, G и Н. Бактерии с мутациями в некоторых из этих генов необычайно чувствительны к ультрафиолетовому облучению, что свидетельствует об их неспособности репарировать (восстанавливать) повреждения ДНК, вызванные действием ультрафиолета (гл. 13, разд. Г, 2). Из этого следует, что некоторые из ферментов, обеспечивающих процесс рекомбинации, нужны клетке также и для восстановления повреждений, вызванных действием ультрафиолетового излучения. Однако специфические функции большинства продуктов этих генов все еще до конца не выяснены. Считают, что у Е. oli имеются две полноценные системы общей рекомбинации. В геноме фага Я, имеются гены, кодирующие другую рекомбинационную систему, функционирующую независимо от продуктов генов фага Я, inf и xis (рис. 15-15), необходимых для интеграции и исключения генетического материала вируса и обеспечивающих процессы сайт-специфической (для определенных участков геномов) рекомбинации между генами клетки-хозяина и вируса. [c.281]

Предварительно клонированные гены вводят в клетку животных различными путями. Суть одного из них состоит в трансформации клеток требуемым геном, соедршенным с одним из генов, для которых осуществляется селекция. Для идентификации и последующего размножения клеток, содержащих интегрированную ДНК, был разработан метод, получивший название метода маркера. Примером может служить метод получения клеток, дефектных по синтезу фермента тимидинкиназы (ТК -клетки). Такие клетки трансформировались фрагментами ДНК вируса герпеса (HSV), содержащего ген фермента ТК, и после трансформации они приобретали способность к синтезу фермента на селективной среде, т.е. становились ТК -клетками. Клетки ТК легко отличаются от клеток TK , поскольку способны расти на средах с ами-ноптерином (ингибитор, блокирующий определенные стадии биосинтеза нуклеотидов), гипоксантином и тимидином. Следовательно, в данном случае для трансформации клеток животных бьши использовапы гибриды бактериальных плазмвд с геном ТК из вируса герпеса. Для этого предварительно проводили клонирование и идентификацию генов в клетках Е. соИ и затем полученная рекомбинантная плазмида вводилась в ТК -клетки. Анализ мето- [c.125]

MOM без El-области и последовательности, ответственной за упаковку, провели котрансфекцию клетки-хозяина, экспрессирующей Е1-гены. Молекула ДНК аденовируса, дефектная по репликации и упаковке, поставляет гены для синтеза компонентов вируса, а продукт лигирования реплицируется и упаковывается в вирусные частицы. При этом около 99% высвобождаемых вирусных частиц содержат молекулу ДНК с терапевтическим геном (генами). С помощью центрифугирования их можно отделить от дефектных по репликации вирусов, которые все же образуются в незначительном количестве. ДНК-клонирующая емкость такой системы достигает 28 т. п. и. [c.496]

Вирус-помощник (Helper virus) Вирулентный штамм вируса, в присутствии которого дефектный вирус может размножаться в клетке-хозяине. [c.545]

Клонирование в клетках животных. Проблема клонирования в клетках животных имеет большое значение для исследования функционирования геиов высших эукариот. Предварительно клонированные гены вводят в клетку животных различными путями. Один нз путей включает в себя кон-трансформацию клеток требуемым геном, соединенным с одним нз генов, для которых осуществляется селекция. Примером являются клетки мыши, дефектные по синтезу тимидинкиназы (ТК -клетки). Клетки трансформируются фрагментами ДНК вируса герпеса (HSV), содержащего ген тими-динкниазы, и после трансформации приобретают способность к синтезу фермента, т. е. становятся ТК -клетками. Клетки ТК легко отличаются от ТК. поскольку они способны расти на средах с ами- [c.440]

Вирус гепатита D (HDV). HDV — дефектный РНК-содержа-щий вирус рода Deltavirus семейства Togaviridae. Поскольку в состав вируса входит значительное количество HBsAg HBV, самостоятельная инфекция, вызванная вирусом гепатита D, не наблюдается. Таким образом, гепатит D протекает только на фоне гепатита В, осложняя его течение. [c.305]

Исследование дефектного фага Xdg показало, что он способен произвести инъекцию ДНК в чувствительные клетки и вызывает их лизис, но без образования потомства, т. е. без образования новых корпускул фага. Если же одновременно одни и те же чувствительные клетки инфицируются обоими фагами X и Adg, то происходит вегетативное развитие одновременно обоих фагов и в лизате будут присутствовать поровну оба типа фагов. Очевидно, дефектный фаг утратил некоторые цистроны (он потерял около четверти своей хромосомы), управляющие синтезом части белков. При одновременной инфекции клетки обоими вирусами фаг X несет в себе информацию, необходимую для синтеза всех белков, в частности и тех, которые необходимы, чтобы образовать корпускулы Xdg. При одновременном заражении чувствительных клеток фагами X и Xdg до 20% клеток становятся дважды лизогенными одновременно для обоих фагов, т. е. образуют (рис. 137) гетерогеноты такого же типа, как рассмотренные ранее. И здесь фаг X помогает дефектному фагу Xdg, так как сам но себе Xdg лизогенизует не свыше 1 % [c.392]

Совсем по-иному складываются отношения между дефектным вирусом, например вирусом саркомы Рауса, и вирусом-помощником. В этом случае неспособность вируса кодировать синтез какого-либо (функционального) белка компенсируется образованием этого белка вирусом-помощником (см. гл. ХИ, разд. В) [396]. Также отличается по своему характеру роль вируса-помощника в процессе инфицирования клеток Е. oli с помощью ДНК фага "К. В обоих этих случаях нуклеиновая кислота сохраняет способность синтезировать свою репликазу в отличие от нуклеиновой кислоты вируса-сателлита вируса некроза табака. [c.169]

Мутации часто приводят к появлению белков, неполноценных как по своим химическим свойствам, так и но функциональной активности. Как уже было отмечено, все до сих пор полученные штаммы ВТМ, мутантные по белку оболочки, менее стабильны, чем дикий тип. Многие из таких мутантов оказались настолько нестабильными, что вообще не удалось выделить мутантный вирус. Для нескольких дефектных штаммов вирусные белки, выделенные из тканей, листьев, инфицированных этими вирусами, хотя и сохраняли способность к образованию спиральных агрегатов, не могли образовывать палочковидные частицы с РНК ВТМ (как дикого тина, так и мутантного). Два из этих белков были проанализированы [182, 449, 450], и выяснилось, что у одного из них произошла одна замена, а у другого — две. При этом две из этих трех аминокислот оказались расположенными у края немутирующего участка (остатки 95 и 112 см. фиг. 13). [c.207]

Из других вирусов для подобных исследований годятся лишь РНК-содержащие фаги класса 2, так как у них, как и у вирусов группы ВТМ, известна аминокислотная последовательность белка оболочки. Под действием азотистой кислоты было получено несколько дефектных мутантов фага В17, растущих на пермиссивном (разрешающем) штамме 326В1Е (зи I), у которых один из трех остатков глутамина (остатки 6, 50, 54) был заменен на се- [c.207]

Недавно удалось выяснить условия, при которых происходит агрегация вирусных белков и РНК с образованием вирусоподобных частиц еще для одного, несколько меньшего, класса вирусов — РНК-содержащих фагов группы f2. Частицы, полученные из оболочечного белка фага MS2 и его РНК, в соответствующих условиях имели на электронных микрофотографиях такой же вид, как и частицы исходного фага, однако константа седиментации таких частиц составляла 69S вместо 81S и, кроме того, они не обладали инфекционностью [491]. Очень похожие результаты были получены в опытах с фагом fr [211]. Свойства этих неинфекционных частиц напоминали свойства фагов некоторых генетически дефектных штаммов (атЬег-мутанты), у которых отсутствовал фактор созревания — гистидинсодержащий белок, получивший название белка А. Фаги дикого типа этой группы содержат по одной молекуле белка А (см. гл. VHI, разд. В). [c.223]

Имеются данные об успешной реконструкции частиц инфекционного фага R17, наблюдаемой при добавлении небольшого количества А-белка в реакционную смесь белка оболочки и РНК [3851. Таким образом, есть все основания думать, что in vitro действительно можно получить полноценный вирус, хотя и с пониженной инфек-ционностью. Ее низкий уровень, возможно, объясняется плохой растворимостью А-белка и сложностью работы с этим белком, который, по-впдимому, не полностью ренатурировал и поэтому был в какой-то степени дефектным. Функция этого белка все еще неизвестна. Ясно лишь, что без него вирусы неинфекционны и что он защищает внутривирусную РНК от нуклеазного действия, видимо не давая ей выйти из частицы. Заманчиво предположить, что А-белок является своего рода мономолекуляр-ным фаговым отростком [c.223]

Следует иметь в виду, что изучение состава оснований и анализ блин<айших соседей так же, как и изучение гибридизации ДНК нановавирусов, указывают па значительное сходство между различными онкогеннымп вирусами этой группы и на сходство их ДНК с ДНК их хозяев (см. гл. VI, разд. Г) [240]. При седиментационном анализе ДНК вирусов полиомы и 8У-40 ведет себя как гетерогенная (в пределах суперспирализованной фракции), и не исключено, что онкогенные молекулы могут быть дефектными. Вопрос этот находится в стадии изучения. [c.272]

По-видимому, все клетки, инфрщированные вирусом саркомы Рауса, трансформируются и становятся злокачественными [400]. Высказывалось предположение, что эта высокая степень онкогенности, не свойственная другим вирусам, связана с онисанными выше проявлениями дефектности у этого вируса. Однако теперь это кажется маловероятным, поскольку штаммы вируса саркомы Рауса, не обладающие псевдодефектными свойствами, также оказываются хорошими трансформантами то же самое относится к высокопродуктивному штамму Брайана, если он атакует чувствительные к нему клетки. [c.275]

Какова природа систем ковирусов вирусов-сателлитов дефектных и неполноценных вирусов [c.286]

Рис. 38.5. Дефектные в отнощении репликации вирусы могут возникать благодаря интеграции и делеции вирусного генома, в результате чего образуются сливщиеся вирусно-хлеточные транскрипты, которые упаковываются вместе с нормальным

Как РНК-, так и ДНК-содержащие опухолевые вирусы вызывают неопластическую трансформацию клеток, потому что присутствие в клетке вирусной ДНК индуцирует синтез новых белков, нарушающих регуляцию клеточного деления. Гены, кодирующие синтез таких белков, называются онкогенами. У опухолевых ДНК-вирусов онкогены обычно кодируют нормальные вирусные белки, необходимые для размножения вируса. Иначе обстоит дело у опухолевых РНК-вирусов онкогены, которые они несут, представляют собой модифипированные формы нормальных генов клетки-хозяина - они для размножения вируса не требуются. Поскольку в капсид ретровируса может уместиться лишь некоторое ограниченное количество РНК, необходимые онкогенные последовательности нуклеотидов часто замещают собой существенххую часть генома ретровируса и вирус оказывается дефектным. Мы расскажем позже (см. разд. 13.4.2 и разд. 21.2.1), почему изучение вирусных онкогенов послужило ключом к пониманию причин и природы рака, а также к познанию тех механизмов, которые в норме регулируют рост и деление клеток у многоклеточных организмов. [c.321]

Размножение нормальных клеток регулируется ингибирующими и стимулирующими молекулами, которые являются соответственно продуктами генов-супрессоров опухолевого роста и протоонкогенов. Проявление раковых свойств у клетки может быть результатом как потери или инактивации обеих клеточных копий гена-супрессора, так и амплификации или гиперактивации одной из двух копий протоонкогена Наследуемые нарушения пролиферативного контроля могут быть вызваны также внедрением в клетку чужеродного вирусного генетического материала. Ретровирусы могут сами становиться онкогенными, захватывая копию клеточного протоонкогена клетки-хозяина и превращая его в онкоген они могут также создавать онкоген в клетке, действуя как инсерционный мутаген и внедряясь в ее геном рядом с протоонкогеном. Хотя полагают, что большинство онкологических заболеваний у человека вызывается не вирусами, обнаруживаемые в опухолевой ДНК мутации часто затрагивают те же протоонкогены, что и найденные при изучении ретро-вирусов. Способы превращения протоонкогенов в онкогены в опухолях у человека включают точковые мутации, амплификацию генов, а также хромосомные транслокации, которые могут привести к нарушению контроля экспрессии этого протоонкогена или к его соединению с другим геном с последующим синтезом нового белка. Подобно этому, гены-супрессоры опухолевого роста могут быть функционально утеряны в результате мутаций самого разного характера люди, унаследовавшие от родителей делецию или дефектную копию одного из таких генов, могут проявить выраженную предрасположенность к определенному типу рака, что демонстрирует пример с ретинобластомой. Молекулярнобиологический анализ опухолевых клеток от больных, страдающих одной из наиболее распространенных форм рака, выявил сложный и неоднородный спектр генетических повреждений, включая и активацию онкогенов и потерю генов-супрессоров опухолевого роста. Эти данные являются отражением случайного характера эволюционного процесса, в ходе которого возникает рак, и говорят о том, что каждая злокачественная опухоль, с молекулярной точки зрения уникальна. [c.481]

Рис. 8.2. р5УМ.й/г/г (6,45 т. п, н.) — альтернативный селектируемый вектор для клеток, дефектных по гену йЛ/г [22]. Для регуляции экспрессии кДНК гена йЛ/г в векторе р5У2,й/г/г введен промотор в составе длинного 5 -концевого повтора вируса опухоли молочных желез мышей (ММТУ-ЫК). [c.246]

Несмотря на то что свободные от хелперов вирусные препараты дефектны по репликации, они обладают высокой инфекци-онностью. Благодаря вирусным белкам, заключенным внутри вириона, эти вирусы эффективно заражают пермессивные [c.287]

Дефектные интерферирующие частицы (ДИ) вируса гриппа генерируются пассажами с высокой л1ножественностью заражения в пермиссивных клетках. Эти частицы интересны тем, что они облегчают установление персистентной инфекции в культурах клеток и могут, таким образом, вызывать латентность. Они содержат молекулы маленьких РНК, которые отсутствуют в инфекционном вирусе и генерируются предпочтительнее массовой внутренней делецией из трех генов Р [74, 75], хотя клонированная ДНК одной малой РНК оказывается составленной из нескольких сегментов по крайней мере двух генов полимеразы [27, 70]. [c.155]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология