Авторадиография и электронная микроскопия

Использование электронной микроскопии в авторадиографии, [c.152]

ИЛИ биохимической реакции выпадает в осадок в виде тяжелого металла, такого, как соли свинца, урана или висмута. Большинство окрашивающих и гистохимических методов, которые используются в РЭМ, является модификацией методов, используемых в оптической и просвечивающей электронной микроскопии, и читателю рекомендуется просмотреть эти источники для выявления методик, которые можно приспособить для растровой электронной микроскопии. Метод авторадиографии может быть использован для локализации областей со специфической физиологической активностью, в то время как проявленные зерна серебра можно отобразить в режиме отраженных электронов. В работе [357] ири изучении клеточного цикла культуры тканей с успехом использовались в совокупности оптический микроскоп, метод авторадиографии и РЭМ. Обзор этих методов представлен в работе [358]. [c.244]

Обычно разрешающая способность авторадиографии составляет 10-100 мкм. Применение жидкой ядерной фотоэмульсии позволяет понизить разрешающую способность до 1 мкм. Такой эмульсией покрывают исследуемый объект (при этом обеспечивается наилучший контакт эмульсии с пов-стью), фотоматериал экспонируют, а затем пленку фотоэмульсии отделяют и исследуют. При использовании электронного микроскопа разрешающая способность метода достигает 0,1 мкм. [c.167]

При любом детальном исследовании биологического материала следует сравнивать информацию, получаемую с помощью широкого набора приборов. Во многих случаях полезно начинать исследования с РЭМ, поскольку его диап азон увеличений включает в себя область увеличений от получаемых с хорошей лупой до получаемых в просвечивающем электронном микроскопе высокого разрешения. В РЭМ также мы получаем привычное нам изображение. Сравнительные исследования относительно просто выполнять, подготавливая образец либо для просвечивающего электронного микроскопа, либо для оптического микроскопа после изучения образца в РЭМ. Пример сравнительного исследования приведен на рис. 11.3, а дальнейшие подробности можно найти в статьях [316—319] и в книге [320]. В работе [321] подробно описываются методы, которые могут быть использованы для сравнения всех трех типов изображений с гистохимическими данными, а в статье [322] дается подробное описание сравнительных исследований в световом микроскопе методом авторадиографии и в РЭМ. [c.220]

Единственно надежным абсолютным методом определения молекулярного веса, используемым для высокополимерной ДНК, является метод 2 , основанный на авторадиографии молекул ДНК, меченных подсчет звезд на эмульсии фотопластинки позволяет определить количество атомов фосфора в исследуемой молекуле. Этот метод является весьма трудоемким и использован лишь в немногих случаях. Гораздо шире применяется другой метод, основанный на непосредственном наблюдении молекул ДНК —измерение длины молекул под электронным микроскопом (обзор — см. ). Исходя из данных рентгеноструктурных исследований двухспиральных комплексов ДНК, показывающих, что длине двухцепочечного комплекса 1 А соответствует мол. вес. 192, можно определить значение молекулярного веса полученного препарата. Наконец, в последнее время начали применять методы определения молекулярного веса, основанные на химическом определении концевых групп (см. стр. 44). [c.30]

Молекулярная биология — наука, возникшая на стыке биологии и химии. Она изучает основные проявления жизни (обмен веществ, наследственность, раздражимость) на уровне строения и взаимодействия молекул, слагающих все частицы клетки. На основе последних достижений физики, химии, математики и других точных наук молекулярная биология использует новейшие методы исследований. К ним прежде всего относятся электронная микроскопия центрифугирование, рентгеноструктурный анализ, метод авторадиографии и др. [c.16]

Авторадиография и электронная микроскопия [c.149]

Я начал этот раздел со слов о памятнике. Но авторадиография живет и развивается. Появляются новые варианты авторадиографии. Удалось совместить ее с электронной микроскопией и получить фактически новый метод, обладающий уникальными возможностями. Наверняка авторадиографий еще предстоит совершить много увлекательных и полезных дел. [c.161]

Для определения сухой массы клеток и клеточных структур используют несколько методов авторадиографию (с рентгеновской установкой), электронно-микроскопическую цитохимию и интерференционную микроскопию. Последний метод дает возможность работать как с фиксированными, так и с живыми клетками. [c.117]

Существует множество методик авторадиографического определения положения меченых соединений в тканях растений и животных, а также на хроматограммах. Можно назвать такие методики, как простая контактная авторадиография , когда образец и пленка приводятся в плотное соприкосновение на время экспозиции методики, связанные с использованием жидких эмульсий, когда фотографическая эмульсия или гель наносятся на образец методики съемной эмульсии и микроавторадиографии с использованием электронного микроскопа. Подробное описание этих методик читатель может найти в работах Роджерса [17] , а также Бесирги и Мэ-ламада [18]. [c.30]

Ранее уже упоминалось, что авторадиография является чувствительным и недорогим методом, обладающим хорошей разрешающей способностью. Методические аспекты авторадиографии изложены в целом ряде работ, причем основное внимание уделено описанию подготовки биологических образцов, а в последних работах методикам микроавторадиографии с применением электронной микроскопии. Читателю можно рекомендовать работы Фишера и Вернера [23], Роджерса [21], а также Басерги и Мэламада [44]. Кроме того, имеется несколько полезных брошюр, описывающих практические аспекты авторадиографии (см., например, [22]). [c.109]

Расширению наших представлений о форме молекул может также способствовать применение электронной микроскопии, вкратце упомянутое в предыдущем разделе. Однако важно помнить о том, что поверхностное натяжение может привести к серьезным нарушениям формы молекулы при высушивании раствора, которое необходимо для элек-тронно-микроскопического исследования. Тем не менее этот метод настолько тщательно отработан, что при известной осторожности позволяет получить надежные результаты. На электронно-микроскопических фотографиях можно было наблюдать переходы типа спираль — клубок в нуклеиновой кислоте [37]. Другим методом, который позволяет создать некоторое представление о форме чрезвычайно больших макромолекул, является авторадиография. Для этой цели образец помечается радиоактивным изотопом и очень разбавленный раствор его высушивается на подложке, которая приводится в тесный контакт с фотографической эмульсией. При выдерживании в течение времени, достаточного для того, чтобы распалось большое число радиоактивных атомов в каждой молекуле образца, изображения распадающихся атомов будут обрисовывать форму молекулы при условии, что молекула растянута и что ее размеры велики по сравнению с разрешающей способностью эмульсии. Высококачественное изображение препарата дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК), полученное с помощью этого метода Кейрнсом [38], приведено на рис. 5. В данном случае но изображению может быть измерена только длина молекулы (52 х), так как толщина ее, очевидно, намного меньше разрешающей способности этого метода. Сравнительно недавними работами этого же автора [39] было показано, что молекулы ДНК, находящиеся в бактериальном вирусе, намного больше даже тех молекул, которые изображены на рис. 5, поскольку длинные молекулярные цени в растворах неизбежно разрушаются [40, 41]. Однако стенки частицы вируса можно разрушить химически, что позволяет молекулам ДНК осаждаться на мембране, которая затем может быть высушена и изучена с помощью авторадиографии. Этот метод является, по-видимому, наиболее надежным методом определения молекулярного веса таких хрупких молекул. [c.34]

Для изучения свойств твердой фазы используют радиометрию и спектрометрию 110], электронную и оптическую микроскопию [И, 12], рентгеноструктурный и рештенофазовый анализ [13, 14], электронографию и автоионную микроскопию [15, 16], эманационный и дилатометрический методы [17, 18], метод изотопного обмена и осциллометрию [19—21], диэлькометрию и седиментометрию [22, с. 101—150 23], светорассеяние и лазерную голографию [24, 25], локальный рентгеноспектральный и ионнозондовый анализ [26, 27], авторадиографию [28] и метод БЭТ [29]. Каждому из этих методов посвящена специальная литература и они здесь не рассматриваются. [c.238]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология