Клонирование генов в клетках

Скрещивают животных, которые несут клонированный ген в клетках зародышевой линии, и получают новую генетическую линию. [c.418]

Стратегия экспрессии клонированных генов в клетках млекопитающих [c.238]

И. Кратковременная экспрессия клонированных генов в клетках С08-1.............. [c.8]

Для экспрессии клонированного гена в клетках Е. соН или любого другого организма необходимо, чтобы этот ген был транскрибирован РНК-полимеразой, а образовавшаяся РНК транслирована рибосомами с образованием нативного белкового продукта. Таким образом, для эффективной экспрессии в клетках Е. соН любой ген должен находиться под контролем регуляторных элементов данного микроорганизма, основным из которых является промотор [118 [c.107]

Изучение экспрессии клонированных генов в клетках млекопитающих представляет большой интерес. Однако первоначальное клонирование фрагментов ДНК и отбор гибридных молекул наиболее просто осуществлять в бактериальных клетках. Поэтому необходимо было исследовать возможность введения бактериальных плазмид и клонированных фрагментов ДНК в культивируемые клетки животных и изучить их поддержание в таком гетерологичном окружении. [c.335]

Д. Лови с соавторами в 1980 г. обнаружили, что перенос клонированных генов в клетки животных можно осуществить соосаждением нативных частиц гибридных фагов А с фосфатом кальция на монослой культуры клеток. [c.337]

При введении клонированных генов в клетки млекопитающих в процессе генетической трансформации множественные копии этих генов интегрируются в геном клетки. У независимо отобранных трансформированных клеток места интеграции чужеродной ДНК в хромосомы различаются. Это может приводить к тому, что уровень экспрессии введенных генов в разных клонах будет варьировать за счет влияния прилегающих участков хромосом (эффект положения гена). Одна из возможностей преодолеть данные затруднения возникла в 1981 г. после создания векторов на основе ДНК вируса папилломы быка типа 1 (BPV-1). [c.366]

Муха с клонированными генами в клетках зародышевого пути [c.148]

Использование ретровирусов в качестве векторных молекул за последние годы обрело статус наиболее перспективного и универсального метода введения и экспрессии клонированных генов в эукариотических клетках. Многие свойства ретровирусов делают их более удобными для таких исследований, чем методы прямого генетического переноса или использование потенциальных вирусных векторных систем. Во-первых, относительно небольшой геном ретровирусов позволяет довольно просто с ним манипулировать и вводить в его состав чужеродные гены таким образом, чтобы любой возникаюш,ий при этом дефект вирусной репликации мог бы комплементироваться по транс-схеме. Во-вторых, вирусы можно легко нарастить в культуре до высокого титра. Эффективность инфицирования пермиссивных клеток чрезвычайно высока, что в сочетании с высоким титром вирусных препаратов позволяет получать в культуре почти 100%-ное заражение клеток-мишеней. После инфицирования единственная копия ретровирусной ДНК оказывается стабильно интегрированной в геном клетки-хозяина строго определенным образом, так что практически все инфицированные клетки способны экспрессировать гены, привнесенные вирусом. Кроме того, ретровирусы содержат мощные транскрипционные знхансеры, которые существенно повышают уровень экспрессии клонированных генов в клетках различных типов. [c.272]

Для клонирования генов и трансформации клеток животных перспективными векторами служат вирус SV40 и вирус папилломы. Эти вирусы вызывают злокачественные опухоли у грызунов. Кроме того, SV40 может заражать клетки обезьян и человека. Некоторые участки ДНК этих вирусов, составляющей 3,3—3,5 МД, могут быть делетированы без потери инфекционности и замещены на фрагменты чужеродной ДНК. Такие векторы применяют для клонирования генов в клетках животных. [c.280]

В клетках Е. соН (и других бактерий) транскрипция большинства генов носит регулируемый характер, что обеспечивается системой белков-репрессоров и активаторов, а также низкомолекулярных эффекторов, которые главным образом влияют на взаимодействие РНК-полимеразы с транскрибируемыми генами 119-121]. Необходимость регулирования экспрессии генов в генной инженерии диктуется прежде всего тем, что сверхэкспрессия клонированных генов в клетках-продуцентах рекомбинантных белков при использовании сильных конститутивных промоторов может отрицательно сказываться на их жизнеспособности, поскольку промежуточные и конечные продукты экспрессии часто обладают цитотоксическим действием [122]. В этом случае сверхэкспрессия клонированных генов сопровождается снижением скорости или даже полной остановкой роста бактериальных или иных клеток. Для предотвращения этих эффектов используются генно-инженерные конструкции, в которых экспрессия клонированных генов в значительной степени подавлена (репрессирована) на ранних фазах роста культуры рекомбинантных клеток и может быть дерепрессирована в любой нужный момент времени. [c.108]

Структура двух современных векторов, предназначенных для обеспечения экспрессии клонированных генов в клетках животных, представлена на рис. 14 (Novagen, США). [c.133]

ВекторыpGEM. Описанные плазмидные векторы пригодны лишь для клонирования генов в клетках Е. соН и родственных им грамотрицательных бактерий, например. Salmonella и Serratia. Они универсальны — их используют для самых разнообразных целей. В то же время сконструировано много специальных векторов, приспособленных, например, только для идентификации регуляторных сигналов, для суперпродукции чужеродных белков и их секреции, для секвенирования ДНК, экспрессии генов животных в [c.201]

Для клонирования генов в клетках Е. oh применяют векторы, сконструированные на базе ДНК плазмид и фагов, а также векторы, сочетающие в себе их свойства (фазмиды, фагмиды и космиды). В силу различных биологических и физических характеристик различные векторы используют для разных целей (табл. 7.2) [c.238]

Разработка методологии клонирования генов в клетках В. subtilis вывела на качественно новый уровень молекулярно-генетические исследования данной грамположительной бактерии. В клетках В. subtilis в составе фаговых или плазмидных ДНК клонирован широкий спектр хромосомных генов бацилл, в том числе spo-гены, участвующие в регуляции спорообразования, гены а-амилаз, пенициллиназ, протеаз. При этом, как уже отмечалось, за счет повышенной дозы гена в клетках, содержащих гибридные плазмиды, обычно наблюдается сверхсинтез соответствующих продуктов. [c.267]

Хотя система клонирования генов в клетках В. subtilis изучена в меньшей степени, чем генно-инженерная система Е. соИ, накопленные данные позволяют сделать некоторые выводы [c.268]

Ретровирусы обладают рядом уникальных свойств, что обусловило активное использование их в последние годы в качестве молекулярных векторов. Относительно небольшой геном ретровирусов позволяет довольно просто с ним манипулировать и вводить в его состав чужеродные гены. При этом нет жестких ограничений на размер генома, упаковываемого в вирион, и поэтому удается встраивать экзогенные фрагменты ДНК длиной до 10 тпн. Ретровирусная инфекция обычно приводит к стабильной интеграции единственной копии вирусного генома в ДНК клетки-хозяина. Данные вирусы можно легко нарастить в кулыуре клеток до высокого титра. Ретровирусы способны инфицировать как эмбрионы, так и кроветворные клетки, причем эффективность инфицирования очень велика и достигает в эксперименте практически 100 %. Ретровирусы содержат мощные усилители транскрипции, которые обеспечивают высокий 5фОвень экспрессии клонированных генов в клетках различных типов. [c.400]

Для экспрессии клонированных генов в клетках животных были сконструированы два типа векторов в основе одного из них лежит геном SV40, а другого—геном патгилломавируса крупного рогатого скота (BPV). Основные свойства этих двух систем вирусных векторов описаны в разд. 5.7. Векторы на основе папилломавирусов особенно полезны для синтеза больщих количеств белка, а векторы на основе SV40 используются во многих экспериментах. [c.360]

Создание рекомбинантной молекулы. Интересующий исследователя фрагмент ДНК ковалентно присоединяется к ДНК вектора. Основное свойство вектора состоит в том, что он может автономно реплицироваться в подходящем хозяине. Например, плазмиды и фаг Л наиболее удобные векторы для клонирования генов в клетках Е. oli. Как будет описано ниже, молеьсулы [c.207]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология