Клострипаин

Большое распространение в ферментативной кинетике нашел метод, который рассмотрим на примере рН-зависимой кинетики реакций, катализируемых клострипаином [45]. Экспериментальные данные по кат описывает в этом случае функция [c.262]

Рис. 106. Определение констант ионизации ионогенных групп активного центра клострипаина, контролирующих реакцию гидролиза этилового эфира Ы-бензоил-1-арги-нина [45]

Рис. 109. Определение констант ионизации ионогенных групп активного центра клострипаина, контролирующих реакцию гидролиза

Лизин-спеиифичная протеиназа в основном катализирует расщепление пептидных связей, образованных а-аминогруппой лизина, а клострипаин предпочтительно гидролизует связи, образованные карбоксильной группой остатков аргинина. [c.47]

Как правило, гибридные белки конструируются таким образом, чтобы они содержали уникальные точки расщепления. Так, например, в кальцитонине нет остатков аргинина, и, следовательно, можно осуществить расщепление, катализируемое клострипаином, не рискуя расщепить заодно и эукариотический полипептид. [c.108]

Рис. 4.9. Очистка расщепленного клострипаином САТ-кальцитонина с помощью обратнофазовой хроматографии ЖХВД. В и О указывают положение восстановленной (В) и окисленной (О) форм кальцитонина.

Среди цистеиновых протеаз наряду с ферментами, активируемыми Са -иона-ми, такими, как клострипаин [7433, имеется группа протеаз (калпаины), про являющие абсолютную Са -зависимость, т.е. практически неактивных в отсутствие этих ионов [2376-23793 (СМ. табл.12).Эти протеазы содержатся в мио-фиОриллах гладких мышц, они не являются лизосомальными ферментами и, по видимому, участвуют в катаболизме Оелков мышечной ткани. [c.221]

Некоторые протеолитические ферменты частично или полностью сохраняют свою активность в денатурирующих условиях, и, следовательно, их можно использовать при низких концентрациях мочевины, гуанидин-НС1 или додецилсульфата натрия (ДСН). В ряде случаев для повышения растворимости увеличивают концентрацию буферного раствора или гидролиз ведут при повышенной температуре. Далее приводятся подробные сведения о ферментах, сохраняющих ферментативную активность в денатурирующих условиях или при повышенной температуре. Особое внимание уделяется трипсину, клострипаину, протеазе V8 из S. aureus, химотрипсину, термолизину и папаину. [c.139]

В этом диапазоне обычно используют 1%-ный (масс./об.) бикарбонат аммония (pH 7,9) и 100 мМ М-этилмор-фолинацетат. Гидролиз пепсином проводят в 10 мМ НС1 или 57о-ной уксусной кислоте при pH 2,0. Для сохранения активности некоторых ферментов необходимо добавлять в реакционную смесь специфические реагенты, например сульфгидрильные реагенты (см. клострипаин и папани) или ионы Са + (см. термолизин). [c.140]

Условия гидролиза. Клострипаин проявляет максимум активности при pH 7,7 в присутствии сульфгидрильных реагентов [68]. Целесообразно проводить гидролиз в присутствии ионов Са +, хотя их присутствие не обязательно. Гидролиз проводят при соотношении фермент субстрат = 1 50 в 100 мМ NH4H O3 и 1 мМ дитиотреите при 25 °С в течение 4 ч. Рекомендуется [c.152]

Специфичность. Изучение действия фермента на различные синтетические и нативные субстраты показало, что фермент специфичен к С-концевой пептидной связи остатков аргинина [88]. На примере гидролиза яичного лизоцима и инсулина быка показано, что гидролиз проходит по некоторым остаткам аргинина и не затрагивает остатки лизина. Аналогичные результаты получены при гидролизе х-цепи иммуноглобулина [ИЗ]. При этом идет гидролиз по большинству остатков аргинина, за исключением устойчивых пептидных связей -Arg-Val-и-Arg-Arg. Таким образом, по специфичности фермент аналогичен клострипаину. Однако при обработке фосфатидилхолинсвязывающего белка из печени быка наблюдается расш епление только по одному из 10 остатков аргинина [69]. [c.153]

Для разделения рекомбинантного пептида и белка-носителя можно использовать и протеолитические ферменты. Для этого требуемый пептид соединяют с белком-носителем с помощью последовательности аминокислот, специфически расщепляемой протеолитическим ферментом, например пептидазой клостридий (клострипаином) в случае получения кальцитонина или трипсином для получения р-эндорфина. [c.118]

Тиоловые протеазы широко распространены в природе. Ферменты, выделенные из растений,— папаин (папайя — дынное дерево), фицин (фиговое дерево) и бромелаин (ананас) —входят в группу структурно гомологичных ферментов. Они не гомологичны бактериальной тиоловой протеазе клострипаину (из lostridium histolyti um) и стрептококковой протеиназе (из гемолитических стрептококков). Возможно, эти две группы ферментов соотносятся между собой так же, как сериновые протеазы животных и бактерий. Установлено, что у млекопитающих тиоловые протеазы катепсин В1 и В2 встроены в лизосомы. [c.373]

Аффинная хроматография (1980) -- [ c.319 ]

Химия протеолиза Изд.2 (1991) -- [ c.50 ]

Практическая химия белка (1989) -- [ c.151 , c.344 ]

Аффинная хроматография Методы (1988) -- [ c.183 ]

Структура и механизм действия ферментов (1980) -- [ c.373 ]

Биохимия Т.3 Изд.2 (1985) -- [ c.32 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология