Гемоглобин триптический гидролизат

Пример использования хроматографии на бумаге в сочетании с электрофорезом пептидов взят из работы Ингрэма [18], посвященной изучению строения гемоглобинов. Триптические гидролизаты гемоглобина А и гемоглобина 5 сравнивали путем электрофореза на бумаге ватман № 3 ММ в системе пиридин — уксусная кислота — вода, pH 6,5, 19 в/см, в течение 150 мин, с последующей хроматографией в системе н-бутанол — уксусная кислота — вода (3 1 1) в течение 24 час. Полученные картины (фиг. 25) почти идентичны, [c.54]

При сопоставлении пептидных карт триптического гидролизата видно у гемоглобина 5 обособление пептида 4 от пептидов 1, 2, [c.82]

Рис. 10. Карты распределения пептидов триптического гидролизата гемоглобинов А и 8 (из Бэйли, 1965).

Нин е мы остановимся на одной из последних работ Шредера [42] по ионообменной хроматографии пептидов, представляющей большой интерес как с хроматографической точки зрения, так и по методике детектирования элюатов. В указанной работе производилось разделение триптических гидролизатов а, р и у цепей человеческого гемоглобина путем последовательной хроматографии па катионите Дауэкс 50X2 и анионите Дауэкс 1X2. [c.170]

Таблица 6 Идентификация пептидов триптического гидролизата человеческого гемоглобина Гл, разделенных на колонке со смолой Дауэкс 50X2

Рис. 16. Разделение компонентов триптического гидролизата утробного человеческого гемоглобина FJJ (а), у-цепи гемоглобина Р 11(6) на колонке со смолой Дауэкс 50X2 и разделение одной из пептидных фракций (пик 12 V) на колонке со смолой Дауэкс 1X2 с буфером pH 8,3 (в) [42].

Рис. 5.29. Препаративная хроматограмма триптического гидролизата 100 мг аминоэтилированной Р-цепи гемоглобина человека, полученная на автоматической установке с непосредственным к0л0риметриче ским обнаружением по нингидрину [88]. Колонка 0,9X18 см ионит — сульфированный катионит спинко 1бА элюент — 250 мл 0,2М пирндин-ацетатного буферного раствора с pH 3,1 (в смесителе) и 250 мл 2,0 М пиридин-ацетатного буферного раствора с pH 5 (в резервуаре) линейное градиентное элюирование со скоростью потока в колонке 300 мл/ч температура 50 °С скорость вытекания элюата 2.0 мл/ч [при этом условии возможно непрерывное обнаружение по нингидрину (без гидролиза)] длина оптического пути фотометра 4 мм.

Если один из сравниваемых белков обладает какими-то отличиями в аминокислотной последовательности определенного участка первичной цепи, то пептидные фрагменты этого участка будут передвигаться по электрохроматографическому полю с иными скоростями (а часто и в ином направлении) по сравнению с фрагментами такого же участка другого белка. В результате первые пептиды займут особое положение на пептидных картах, тогда как фрагменты цз идентичных участков полипептидных цепей займут аналогичные места. Отличия в последовательности, таким образом, будут обнаружены в пятнах, имеющихся на одной электрохроматограмме и не появляющихся на другой. Элюция и количественный аминокислотный анализ лишних пептидных пятен позволяет далее установить наличие специфических для данного белка аминокислот, характеризующих эти фрагменты. В частности, методом пептидных карт для триптического гидролизата удалось выявить особенности структуры различных гемоглобинов. Гемоглобин 5 отличается от нормального гемоглобина А по электрофоретической подвижности и частично замещает последний у больных серповидно-клеточной анемией. Исследования методом пептидных карт позволили локализовать различие в первичной структуре между гемоглобинами А и 5 в одной точке полипептидной цепи [c.82]

Для уравновешивания колонки и элюции пептидов используются самые разнообразные растворы вода, растворы хлористого натрия, аммиака, уксусной кислоты и различные буферные растворы. Этим способом были фракционированы пептиды триптического гидролизата гемоглобина человека, а-казеина, тропомио-зина скелетной мышцы и автолизата трипсина. [c.83]

Молекула гемоглобина Аг состоит из четырех полипептидных цепей две -цепи, те же, что и в гемоглобине А, и две цепи, отличные от р-цепей и названные б-цепями. Формулу НЬ Аг, таким образом, можно изобразить как аз 2 Сопоставление триптических гидролизатов НЬ А и НЬ Аа показало, что 6-цепь отличается от р-цепи по меньшей мере четырьмя аминокислотными остатками [54], которые впоследствии были идентифицированы Ala в 6-цепи вместо lu в р-цепи, Thr (6-)—вместо Ser (р-), Asp (6-) вместо Thr (р-) и Ser (6-) — вместо Thr (р-). НЬ Аг обладает значительно большим сродством к кислороду, чем НЬ А, поэтому в случае некоторых заболеваний (например, талассе-мии, когда организм страдает от недостатка кислорода) его количество может увеличиваться вдвое по сравнению с нормальным содержа- [c.129]

В качестве практически осуществленного примера применения ОФ-ВЭЖХ для картирования пептидов можно привести сравнительный анализ молекул нормального и мутантных гемоглобинов [1, 62]. При исследовании р-цепей нескольких гемо-глобинов человека их триптические гидролизаты были разделены на колонке С18, уравновешенной аммонийацетатным буфе- [c.238]

До настоящего времени предложено несколько методов пептидного картирования. С-концевой пептид у-цепи фетального гемоглобина идентифицировали, сравнивая электрофореграммы триптических гидролизатов после повторного разделения (pH 6,5) в направлении, перпендикулярном первому, до и после удаления С-копцевых остатков Arg или Lys при помощи карбоксипептидазы В прямо на листе бумаги [63]. Теоретически после обработки карбоксипептидазой на диагонали должен быть только С-концевой пептид. Однако в случае у-цепи гемоглобина человека па диагонали оказались 3 пятна, а именно свободный Lys, дипептид Val-Lys (так как дипептиды очень медленно расщепляются карбоксипептидазой [46]) и ожидае- [c.484]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология