Количественный аминокислотный анализ

Е. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ АМИНОКИСЛОТ В ПЕПТИДАХ ДЕГРАДАЦИЕЙ ПО ЭДМАНУ И КОЛИЧЕСТВЕННЫМ АМИНОКИСЛОТНЫМ АНАЛИЗОМ [c.285]

Методическое руководство по биохимии и иммунохимии белка. Рассмотрены теоретические основы методов и современная аппаратура для гель-фильтрации, бумажной, ионнообменной н тонкослойной хроматографии, в том числе методы количественного аминокислотного анализа с помощью автоматических анализаторов. Подробно описан анализ производных аминокислот методом газовой хроматографии. Книга хорошо иллюстрирована и снабжена подробной библиографией. [c.4]

Число остатков триптофана в сывороточном альбумине быка. По данным количественного аминокислотного анализа в сывороточном альбумине быка содержится 0,58% (по весу) триптофана, мол. масса которого равна 204. [c.161]

Поскольку свободные аминокислоты имеют структуру цвиттер-иона, они представляют собой сильно полярные соединения с очень низким давлением паров и, следовательно, не пригодны для газохроматографического анализа. Устраняя электрический заряд, их превращают в более летучие соединения, причем это достигается различными способами. Однако для ГХ необходимо, чтобы образующиеся производные были не только достаточно летучими, но и обладали бы высокой термостабильностью Чем более полярны производные, тем они более устойчивы к нагреванию, причем с увеличением полярности органических соединений увеличивается их время удерживания на колонке. Однако, как следует из соотношения между временем удерживания и температурой разделения, для того, чтобы получить величины удерживаемых объемов одного порядка, рабочую температуру нельзя выбирать произвольно. Это достаточно важный момент, поскольку при низкой термостабильности веществ в системе могут происходить неконтролируемые процессы разложения. При этом сигнал исчезает не всегда, часто он уменьшается, и появляется множество пиков. С точки зрения качественного и количественного аминокислотного анализа эти эффекты очень неблагоприятны, так как любое увеличение числа пиков [c.309]

Целью количественного аминокислотного анализа является определение молярного состава пептида, т. е. типа и количеств входящих в него аминокислот. Выражение молярных отношений аминокислот путем сопоставления содержания данной аминокислоты с соответствующим значением аминокислоты, присутствующей в смеси в наименьшем количестве, хотя и дает верную картину общего состава исходного соединения, не позволяет получить информации о размере, т. е. длине полипептидной цепи. Для этого нужно определить количество хотя бы одной из аминокислот и отнести его к количеству взятого пептида. Естественно, такое определение имеет смысл только при условии, что все аминокислоты, составляющие пептид, обнаруживаются с одинаковой точностью. В таком случае можно работать с одним или несколькими внутренними стандартами, имеющими подходящие удерживаемые объемы, и находить индивидуальные поправочные коэффициенты, специфичные для определяемых производных аминокислот и, как уже упоминалось, в сильной степени зависящие от типа детектора [45, 48]. [c.336]

Ионообменная хроматография на колонках применяется в трех очень важных областях 1) для качественного и количественного аминокислотного анализа пептидов и белков, дающего ценную характеристику молекул его можно использовать Как средство обнаружения некоторых специфических различий среди белков 2) для определения аминокислотного состава биологических жидкостей, который дает не только существенную информацию о наличии свободных аминокислот, но и позволяет проследить за изменениями, происходящими в организме под воздействием многих факторов, таких, как окружающая среда, физиологическое состояние и генетическая конституция 3) для определения первичной структуры белков — чрезвычайно важной задачи биохимии сегодняшнего дня. Многие исследователи занимаются определением аминокислотной последовательности большого числа разнообразных белков. Это дает возможность установить их химическую структуру и изучить ее взаимосвязь с функцией. [c.8]

Как упоминалось выше, при спектрофотометрическом исследовании реакционной смеси могут возникать осложнения из-за сопутствующих веществ, поглощающих в ультрафиолете. Поэтому в ряде исследований отщепленную аминокислоту идентифицировали по разности результатов количественного аминокислотного анализа исходного и укороченного пептидов. [c.173]

Но все же метод Фишера не мог быть применен для точных количественных определений аминокислотного состава белков. При самых благоприятных условиях перегонки могло быть определено не более 70% анализируемых сухих веществ. В большинстве же случаев определению в расчете на чистые аминокислоты подвергалось не более 50% исходных веществ. Для суждения о количественном содержании аминокислот необходимо было прибегнуть к весьма искусным, но в то же время спорным интерполяциям. Количественный аминокислотный анализ белков был удовлетворительным лишь в исключительных случаях. Примером этого может служить фиброин шелка, который при гидролизе давал около 36 /о глицина, легко количественно отделяемого в воде от трудно растворимых хлоргидратов эфиров других аминокислот. [c.77]

Б дальнейшем мы перейдем к методу количественного аминокислотного анализа белковых гидролизатов. Однако при интерпретации результатов такой работы в связи с составом исходного белка необходимо всегда иметь в виду изложенные выше соображения, [c.59]

Количественный аминокислотный анализ. [c.66]

КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ АМИНОКИСЛОТНЫЙ АНАЛИЗ [c.66]

Эти соединения чрезвычайно легко гидролизуются, и тем не менее их образование может быть количественным [711. Однако в экспериментах на газовом хроматографе было показано, что данные производные не подходят для количественного аминокислотного анализа [731. Высокая чувствительность этих соединений к воде, наличие ОН-, SH-, NHa-и СООН-групп способствуют, как и в случае О-ТФА-производных [1311, их частичному разложению в ходе разделения на колонке. Эти эф кты можно предотвратить только предварительным добавлением больших количеств триметилсилил-диэтиламина. Однако возникаюш,ие в связи с этим осложнения и остаюш,аяся неопределенность указывают на то, что эти соединения не стоит, пожалуй, использовать для ГХ. [c.323]

Если один из сравниваемых белков обладает какими-то отличиями в аминокислотной последовательности определенного участка первичной цепи, то пептидные фрагменты этого участка будут передвигаться по электрохроматографическому полю с иными скоростями (а часто и в ином направлении) по сравнению с фрагментами такого же участка другого белка. В результате первые пептиды займут особое положение на пептидных картах, тогда как фрагменты цз идентичных участков полипептидных цепей займут аналогичные места. Отличия в последовательности, таким образом, будут обнаружены в пятнах, имеющихся на одной электрохроматограмме и не появляющихся на другой. Элюция и количественный аминокислотный анализ лишних пептидных пятен позволяет далее установить наличие специфических для данного белка аминокислот, характеризующих эти фрагменты. В частности, методом пептидных карт для триптического гидролизата удалось выявить особенности структуры различных гемоглобинов. Гемоглобин 5 отличается от нормального гемоглобина А по электрофоретической подвижности и частично замещает последний у больных серповидно-клеточной анемией. Исследования методом пептидных карт позволили локализовать различие в первичной структуре между гемоглобинами А и 5 в одной точке полипептидной цепи [c.82]

Дополнительные данные о строении бацитрацина Р получены в результате определения азота по Ван Слайку и количественного аминокислотного анализа, а также образования соответствующего ди-DNP-пpoизвoднoгo (в противоположность образованию три-ОМР-производного в случае бацитрацина А). На основании этих данных был сделан вывод, что превращение бацитрацина А в бацитрацин Р должно протекать путем окислительного дезаминирования концевой аминогруппы изолейцина и дегидрирования тиазолина до тиазола. Согласно Конигсбергу и [c.558]

Строение. Полимиксин Bi выделен из смеси антибиотиков, получившей название полимиксина В, после отделения компонента Вг с помощью противоточного распределения. В результате количественного аминокислотного анализа полимиксина Bi установлено, что в состав антибиотика входят 5 молей ь-а, у-ди-аминомасляной кислоты, 1 моль о-а, у-Диаминомасляной кислоты, 2 моля L-треонина, 1 моль о-фенилаланина, 1 моль L-лей- [c.560]

Конденсация фрагмента [Н (1 —2 )-6—8] с ранее описанным пентапептидом (Н 1—5) с помощью карбодиимидного метода привела с выходом 40% к разветвленному декапептиду [I (1 — 2 )-1—8], охарактеризованному количественным аминокислотным анализом и УФ-спектром. Формильную группу отщепляли действием 4 н. метанольного раствора НС1 в трифторуксусной кислоте или диметилсульфоксиде в течение 20 час при 20 [К ( —2 )-1—8] [2392]. Освободившуюся аминогруппу вновь количественно идентифицировали колориметрическим нингидриновым методом. Последующее омыление сложного эфира проводили обработкой 1,5-кратным избытком 1 н. едкого натра в диметилсульфоксиде в течение 20 час [L(l —2 )-1—8] образовавшуюся свободную карбоксильную группу определяли микротитрованием. Циклизацию синтезированного разветвленного декапептида осуществляли путем перемешивания при 20° раствора декапептида с 300-кратным избытком N, N -дициклогексилкарбодиимида в условиях высокого разбавления, причем выход неочищенного продукта реакции составил 20%. Защитные группы отщепляли действием натрия в жидком аммиаке. Полученный циклический пептид был очищен путем противоточного распределения (400 переносов вго/7-бутанол/0,1 н. соляная кислота) и хроматографирования на целлюлозном порошке (н-бутанол/ пиридин/ледяная уксусная кислота/вода, 30 20 6 24 м-бута-нол, содержащий 15% уксусной кислоты) с последующим обессоливанием на амберлите ШС-50 (ХЕ-64) в Н+-форме. [c.566]

С целью сведения к минимуму реакции образования четвертичных аммонийных групп Мэррифилд предложил применять при реакции этерификации немного менее 1 эквивалента триэтиламина. Присутствие четвертичных аммонийных групп означает также, что для определения количества первой аминокислоты на носителе нельзя использовать элементарный анализ на азот. Для этой цели, как и для всего аналитического контроля синтеза, абсолютно необходимы другие подходящие методики или прибор количественного аминокислотного анализа. Было показано, что элементарный анализ не обеспечивает определения чистоты пептидов, и многие опытные химики, занимающиеся пептидами, больше не тратят бесполезно свое время и силы на выполнение таких анализов. Единственным удовлетворительным методом определения количества аминокислоты на носителе является кислотный гидролиз с последующим количественным аминокислотным анализом. Гидролиз нужно проводить в растворителе, который смачивает полимер и обеспечивает его набухание. Для этой цели обычно используют смесь эквивалентных количеств диоксана и концентрированной соляной кислоты. [c.28]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология