Ионообменная хроматография пептидов

Полученные гидролизаты анализируют различными методами гель-хроматографией, ионообменной хроматографией, электрофорезом и хроматографией на бумаге и в тонком слое, электрофорезом в полиакриламидном геле, методом пептидных карт на бумаге или в тонком слое (в одном направлении пептиды подвергаются электрофорезу, в другом — хроматографии) и др. При этом пептиды, содержащие остат ки аргинина, триптофана и гистидина, могут быть открыты с помощью специфических цветных реакций (с. 129). Выбор метода диктуется величиной (молекулярной массой) и характером пептидов гидролизата. [c.139]

Разделение аминокислот и пептидов с помощью ионообменной хроматографии может быть осуществлено двумя способами путем хроматографии на колонках и методом тонкослойной хроматографии. [c.133]

Ионообменная хроматография пептидов 197 [c.197]

Ионообменная хроматография пептидов 19Э [c.199]

Ионообменная хроматография пептидов 201 [c.201]

Ионообменная хроматография пептидов 2СЗ [c.203]

Этот метод основан на образовании множества электростатических связей между заряженными группами пептида и несущими противоположный заряд ионогенными группировками поверхности ионита. Благодаря амфотерному характеру пептидов в этом методе можно использовать катиониты или аниониты. Единственным ограничением является слабая растворимость пептидов в той или иной области pH. Если же смесь пептидов вообще не растворяется в обычных буферных растворах, то применяют буферы с высокой концентрацией мочевины или солянокислого гуанидина. Применение летучих буферных растворов в ионообменной хроматографии позволяет миновать стадию обессоливания. Б настоящее время ионообменная хроматография пептидов полностью или частично автоматизирована, а метод стал настолько универсальным, что позволяет разделить практически любую смесь пептидов. [c.389]

Следует отметить, что в области интенсификации ионообменной хроматографии пептидов сделаны лишь первые шаги и здесь можно ожидать коренных усовершенствований процесса. [c.177]

Для фракционирования пептидов используют различные методы колоночной хроматографии и ТСХ. Ранее мы уже знакомились с разделением пептидов гель-фильтрацией и обратнофазовой гидрофобной хроматографией. Нередко, если пептидов много, хроматографические методы следуют один за другим. Например, сначала пептиды разделяют на группы по размерам гель-фильтрацией, а затем следует ХОФ или ионообменная хроматография. [c.299]

При выборе методов разделения пептидов учитывают физ.-хим. свойства, кол-во и длину молекул разделяемых соединений. Для первичного фракционирования смесей коротких пептидов, содержащих до 15-20 аминокислотных остатков, в большинстве случаев используют ионообменную хроматографию на катионитах. Дальнейшее разделение и очистку проводят с помощью хроматографии и электрофореза на бумаге или пластинках с тонким слоем целлюлозы или силикагеля. [c.251]

Только благодаря появившимся в начале 40-х годов новым методам, вопрос об определении аминокислотного состава получил свое полное и окончательное разрешение. В настоящее время основными способами такого определения являются следующие 1) распределительная хроматография 2) ионофорез 3) электрохроматография 4) ионообменная хроматография и 5) противоточное распределение. Последним методом пользуются главным образом при разделении пептидов. Метод распределительной хроматографии на бумаге, разработанный в 1941 г. Гордоном, Мартином и Синджем, положил начало новой эры в развитии химии белка. [c.479]

Для предварительного разделения пептидов на фракции часто применяют так называемый четырех- или пятикамерный электрофорез. Он позволяет отделить основные, кислые н нейтральные пептиды друг от друга. Каждую из фракций можно подвергнуть затем разделению яри помощи ионообменной хроматографии, микропрепаративным электрофорезом на бумаге или противоточным распределением, ограничиваясь при этом несколькими миллиграммами вещества. В качестве примера представлена схема разделения химотрипсиногена, проведенная Шор-мом с сотрудниками (см. схему на стр. 517). Прекрасные результаты дает метод Хирса, Мура и Штейна— автоматическое разделение пептидов на смоле Дауэкс-50. Строение пептидов, полученных в результате разделения, устанавливают. описанными выше методами. [c.519]

Смесь пептидов, образующихся в результате использования различны> методов расщепления, сначала должна быть разделена, и каждый из пептидов очищен. Целевой компонент перед анализом последовательности должен быть гомогенен по данным как минимум четырех различных методов разделения ионообменной хроматографии, электрофореза, бумажной или тонкослойной хроматографии и противоточного распределения. [c.366]

Окисленная рибонуклеаза. Действие химотрипсина на рибонуклеазу менее специфично, чем действие на этот субстрат трипсина. Об этом свидетельствуют более низкие выходы полипептидов при разделении гидролизата методом ионообменной хроматографии [154]. В выделенных полипептидах установлено наличие 151 аминокислотного остатка, в то время как в полипептидах, полученных в результате расщепления трипсином, обнаружено всего 124 остатка. По-видимому, это объясняется тем, что некоторые участки полипептидной цепи появляются более чем в одном из пептидных обломков. О более сложном составе гидролизата можно судить по небольшим количествам примесей (как правило, не выше 15%), присутствующих в большинстве основных фракций. Эти примеси не мешали определению аминокислотного состава фракций, но их присутствие еще раз подчеркивает трудности, которые встречаются при фракционировании смесей пептидов, полученных менее специфическими методами гидролиза. Гидролизаты рибонуклеазы были получены инкубированием в течение 24 час с ферментом при pH 7. При более кратковременном инкубировании гидролизат содержал дополнительно [c.204]

Ионообменную хроматографию широко используют и для разделения неорганических соединений, а в органической химии — для разделения смесей кислот или оснований. Классическим примером является разделение смесей аминокислот, образующихся при гидролизе пептидов и белков [43]. Пептиды, белки и ферменты, содержащие кислотные и (или) основные группировки, также могут быть разделены с помощью ионообменной хроматографии. Интересные возможности открываются при использовании сильноосновных смол в бисульфитной форме [44]. Когда смесь альдегидов и кетонов пропускают через такую смолу, они обратимо связываются со смолой в виде бисульфитных комплексов это позволяет разделить компоненты смеси. [c.321]

Рис. Ч. Разделение пептидов методом ионообменной хроматографии.

Принципы, управляющие адсорбционной и ионообменной хроматографией аминокислот, пептидов, белков и углеводов [268]. [c.220]

Фракционирование аминокислот — важная область применения ионообменной хроматографии, обеспечивающая в первую очередь анализ алпиюкислотного состава белков и пептидов после их исчерпывающего гидролиза, а также физиологических жидкостей и пище- [c.295]

Хроматография пептидов, содержащих аргинин, на карбоксильных ионообменных смолах [372]. [c.226]

Использование этих приемов приводило к потере пептидов и требовало дополнительного времени. Поэтому большим шагом вперед явилось применение для ионообменной хроматографии пептидов летучих органических элюентов, в качестве которых применялись смеси пиридина и уксусной кислоты [40] для разделения на катионитах Дауэкс 50X2 и смеси пиридина, колидина и уксусной кислоты для анионообменной хроматографии на Дауэкс 1X2 [41]. [c.170]

Нин е мы остановимся на одной из последних работ Шредера [42] по ионообменной хроматографии пептидов, представляющей большой интерес как с хроматографической точки зрения, так и по методике детектирования элюатов. В указанной работе производилось разделение триптических гидролизатов а, р и у цепей человеческого гемоглобина путем последовательной хроматографии па катионите Дауэкс 50X2 и анионите Дауэкс 1X2. [c.170]

Методы анализа фракций могут быть физическими, химическими и биологическими. Одним из лучших методов считается детектирование радиоактивных изотопов. Результаты измерений оформляют в виде кривой зависимости определяемой величины от объема злюата. По распределению пиков на хроматограмме судят о возможности объединения некоторых фракций, совершенно чистых, без примесей других компонентов. Методом ионообменной хроматографии можно разделять различные катионы и анионы, четвертичные аммониевые основания, амины, аминокислоты, белки, продукты гидролиза пептидов, физиологические жидкости, гидролизаты клеточных оболочек микробов, антибиотики, витамины, нуклеиновые кислоты. [c.361]

Изящная комбинация химической модификации с ионообменной хроматографией была использована для быстрого отбора из совокупности пептидов, полученных после трипсинового гидролиза, тех из них, которые содержат Met. Смесь трипсиновых пептидов растворяли в 30%-ной СН3СООН и обрабатывали радиоактивно меченным иодацетамидом. На атоме серы метионина возникал дополнительный положительный заряд, поэтому при хроматографии на сильном катионообменнике такие пептиды задерживались но сравнению с нормальным положением их элюции. По наличию метки со- [c.298]

В предыдущем разделе мы упоминали рекламные сведения фирмы LKB о возможностях ионообменной хроматографии смеси пептидов на новых поиооблтепниках типов 2133 UltroPak TSK 545 DEAE и ...TSK 535 M . О фракционировании белков на атих обменниках пока пс сообщалось, но можно думать, что такие данные в недалеком будущем должны появиться. [c.314]

В заключение отметим вариант двумерного фракционирования нентидов комбинацией колоночной (в данном случае — ионообменной) хроматографии и ТСХ фракций с колонки на пластинках силикагеля [Aromatorio et al., 1980]. Это — частный пример из широкой области использования ТСХ как дополнительного инструмента для анализа результатов фракционирования пептидов различными рассмотренными ранее методами колоночной хроматографии, в том числе и ЖХВД. [c.490]

Если электрофорез и хроматографию на бумаге можно отнести к микропрепаративным методам, то метод разделения смеси пептидов с помощью ионообменной хроматографии следует, пожалуй, считать макропрепаративным. Его главное преимущество заключается в том, что он позволяет обрабатывать большие количества материала и получать несомненно большие выходы фракций. Применение при ионообменной хроматографии летучих буферов дает возможность избежать трудоемкой процедуры обессоливания, которая осложняла ранее предложенные методики [49, 92]. Большим достижением в области ионообменной хроматографии является введение сферических смол. Их применение способствует увеличению скорости потока фракционируемых веществ через колонку и значительно сокращает продолжительность препаративного разделения. Сферические смолы в автоматических аминокислотных анализаторах обеспечивают воспроизводимую сравнительную хроматографию пептидов с высокой разрешающей способностью, т. е. позволяют автоматически проводить анализ методом отпечатков пальцев . [c.38]

Ионообменная хроматография незаменима при разделении вы-сокополярных веществ, которые без перевода в производные не мог/г быть проанализированы методом ГЖХ. К таким соединениям относятся аминокислоты, пептиды, сахара. [c.32]

Ионообменную хроматографию широко применяют в медицине, биологии, биохимии [11—15], для контроля окружающей среды, при анализе содержания лекарств и их метаболитов в крови и моче, ядохимикатов в пищевом сырье, а также для разделения неорганических соединений, в том числе радиоизотопов, лантаноидов, актиноидов и др. Анализ биополимеров (белков, нуклеиновых кислот и др.), на который обычно затрачивали часы или дни, с помощью ионообменной хроматографии проводят за 20-40 мин с лучшим разделением. Применение ионообменной хроматографии в биологии позволило наблюдать за образцами непосредственно в биосредах, уменьшая возможность перегруппировки или изомеризации, что может привести к неправильной интерпретации конечного результата. Интересно использование данного метода для контроля изменений, происходящих с биологическими жидкостями [11]. Применение пористых слабых анионообменников на силикагелевой основе позволило разделить пептиды [12]. [c.32]

Ионообменная хроматография цслсх ообразна при разделении высоко1КМ[ярных всществ, которые без перевода в производные не могут быть проанализированы методом ГЖХ. К а аким соединениям относятся аминокислоты, пептиды, гетероциклические основания, углеводы. [c.54]

Возможно идентифицировать и смеси коротких пептидов, получаемых после обработки белков ферментами, частичного разделения с помощью гель-фильтрации и ионообменной хроматографии. Сопоставление масс-спектров, полученных при различных температурах источника, а также использование полного метилирования и дейтерометилирования, обычно позволяют правильно идентифицировать пики исходных пептидов. [c.278]

Следует подчеркнуть, что ионообменная хроматография в тонком слое не годится для количественного определения аминокислотного софава белковых гидролизатов, так как она дает только качественную картину. Зато этот метод вполне применим для исследования гидролизатов пептидов и пептидных остатков при расшифровке последовательности аминокислот. Он позволяет определить моляр- [c.256]

Ионообменные сефадексы марок -25 предназначены для хроматографии пептидов и белков небольшой величи- [c.163]

Определение аминокислотного состава пептида проводится после полного гидролиза вещества, в ходе которого все пептидные связи разрушаются, и пептид превращается в смесь аминокислот, составлявших его. Гидролиз проводят действием 6 н. НС1 при llO в течение 20 ч. для предупреждения окислительного разрушения некоторых аминокислот в процессе гидролиза его осуществляют в атомосфере азота или в ваку-умированной запаянной ампуле. Полученный гидролизат подвергают количественному анализу с помощью ионообменной хроматографии и таким образом устанавливают, какие аминокислоты и в каких соотношениях входят в исследуемьш пептид. [c.55]

Ионообменная хроматография. Мор и Штейн [35] разработали метод хроматографии пептидов и аминокислот на И. с., который стал мощным средством анализа бетковых гидролизатов. Однако этот метод не всегда пригоден для белков и полинуклеотидов в связи с тем, что большие полимерные молекулы построены не по принципу плотнейшей упаковки, а И. с. имеют малую емкость. В таких случаях рекомендуют применять сорбенты на основе целлюлозы (см. следуюш,ий раздел). [c.70]

Ионообменная хроматография аминокислот и пептидов. I. Новый метод определения основных аминокислот на катионитах карбокислотного типа [277]. [c.220]