Пиримидил-РНК-аза

При тщательном исследовании на модельных соединениях было показано, что обычные препараты пиримидил-РНК-азы могут с очень малой скоростью расщеплять производные и пуриновых нуклеозидов Это связано, по-видимому, с присутствием в этих препаратах примесей РНК-аз другой специфичности (см. При структурных исследованиях, однако, этой побочной реакцией можно пренебречь. [c.70]

Промежуточными продуктами при расщеплении фосфодиэфирных связей под действием гуанил-РНК-азы, так же как и пиримидил-РНК-азы, являются циклические нуклеозид-2, З -фосфаты, которые переходят затем в нуклеозид-З -фосфаты. В некоторых случаях эта вторая стадия реакции протекает очень медленно и циклические фосфаты накапливаются в значительных количествах. [c.71]

Другим возможным сочетанием химических и ферментативных методов является химическая модификация фермента, приводящая к изменению его специфичности. Было показано, например, что расщепление 55 РНК частично алкилированной пиримидил-РНК-азой приводит к более крупным олигонуклеотидным фрагментам, чем действие необработанным ферментом [c.72]

Для специфического ферментативного расщепления полинуклеотидной цепи используется действие эндонуклеаз. Наиболее широко этот прием применяется для РНК, так как известны два достаточно легко доступных фермента, обладающих ярко выраженной и хорошо охарактеризованной специфичностью, — пиримидил-РНК-аза (панкреатическая РНК-аза) и гуанил-РНК-азы (РНК-аза Т1 из такадиастазы РНК-аза из актиномицетов). Пиримидил-РНК-аза катализирует расщепление фосфодиэфиров нуклеозидов, производных 2-кетопиримидинов, не имеющих заместителя при N-3. При этом получаются соответствующие уклеозид-З -фосфаты или их [c.69]

Под действием пиримидил-РНК-азы расщепляются фосфодиэфирные связи, образованные производными уридина и цитидина, а также фосфодиэфиры некоторых редких компонентов РНК, в частности псевдоуридина, 5,6-дигидроуридина и риботимидина . Вопрос о влиянии пр ироды пиримидинового кольца нуклеозида на скорость реакции, катализируемой пиримидил-РНК-азой, рассмотрен в обзоре Витцеля °2 (см. также При расщеплении РНК под действием пиримидил-РНК-азы образуется смесь З -фосфатов пиримидиннуклеозидов и олигонуклеотидов, терминированных остатком пиримидин-З -фосфата. Скорость ферментативной реакции сильно зависит от природы отщепляющегося остатка и конформации полинуклеотида (см. стр. 291) можно осуществить специфическое частичное расщепление полинуклеотидов в условиях, когда скорость процесса уменьшена. [c.70]

К этой группе нуклеозидов из основных компонентов РНК относится гуанозин, из редких — инозин, 2-эк зо-Ы-метилгуанозин и 2-эк зо-Ы, Ы-диметилгуанозин. Продуктами реакции являются соответствующие нуклеозид-З -фосфаты или олигонуклеотиды с концевым гуанозин-З -фосфатом. Как и в случае пиримидил-РНК-азы, [c.70]

Для тринуклеотидов строение однозначно вытекает из определения концевых нуклеотидных остатков (см. стр. 44). Строение полинуклеотидов большей длины может быть в некоторых случаях установлено однозначно перекрестным расщеплением эндонуклеазой другой специфичности, как это показано ниже для одного из тетрануклеотидов, выделенного при расщеплении аланиновой тРНК пиримидил-РНК-азой [c.73]

Схема 1. Установление первичной структуры аланиновой тРНК из дрожжей А1. .. А9 — Продукты частичного гидролиза гуанил-РНК-азой Б1. .. Б12—продукты полного гидролиза гуанил-РНК-азой В1. .. В9 —продукты полного гидролиза пиримидил-РНК-азой Г1 —продукт частичного гидролиза продуктов А гуанил-РНК-азой. Помимо стандартных сокращений Гсм. стр. 20 приняты сле-Ме Мб2 [c.75]

Выбор между ними был сделан на основании того, что при расщеплении Г1 пиримидил-РНК-азой единственным тринуклеотид-ным продуктом гидролиза является АрОрСр, в то время как при [c.77]

В продуктах гидролиза 5 -фрагмента (б) аланиновой тРНК под действием пиримидил-РНК-азы обнаружен уникальный динуклеотид IpGp (В8) это однозначно показывает структуру З -концевого участка изучаемого фрагмента. Близость редкого компонента к концу цепи изучаемого фрагмента позволяет однозначно решить, что два динуклеотида pGp (фрагменты Б7 и Б8) должны находиться на участке последовательности 11—14 поскольку структуры обоих динуклеотидов одинаковы, последовательность всего фрагмента (1—36) устанавливается однозначно. [c.77]

Схема 2. Установление первичной структуры 5S РНК из Es he ri hia oli. Al —продукт частичного гидролиза гуанил-РНК" азой Б1, Б2—продукты частичного гидролиза пиримидил-РНК-азой В1 — продукт частичного гидролиза кислой РНК-азой селезенки П, Г2 —продукты гидролиза гуанил-РНК-азой после предварительного метилирования Д1 —продукт гидролиза пири-мидил-РНК азой после обработки карбодиимидом Е1, Е2 —продукты полного гидролиза гуанил-РНК-азой Ж1. Ж2 —продукты полного гидролиза пиримидил-РНК-азой. [c.80]

Модификация полинуклеотидов диметилсульфатом может быть применена для исследования первичной структуры. Специфическое метилирование по остатку дезоксигуанозина в ДНК и последующее выдерживание в нейтральной среде приводит к отщеплению 7-метилгуанина образующаяся дегуаниловая ДНК может быть расщеплена на блоки с помощью р-элиминации (см. гл. 1 и 10). В случае РНК метилирование можно использовать для повышения специфичности ферментативного расщепления, так как З -фосфо-диэфирная связь, образуемая остатком 3-Ы-мети,пцитидина, не расщепляется под действием панкреатической пиримидил-РНК-азы, а З -фосфодиэфирная связь, образуемая остатком 7-Ы-метил-гуанозина, — под действием гуанил-РНК-азы Т . Последний принцип был использован при установлении структуры 55 РНК (см. гл. 1). [c.369]

Модификапия полинуклеотидов карбодиимидом приводит к существенному изменению их способности расщепляться нуклеазами. Динуклеотиды, содержащие остаток модифицированного уридина, устойчивы к действию панкреатической пиримидил-РНК-азы Это позволяет осуществить специфическое химико-ферментативное расщепление РНК по остаткам цитидиловой кислоты si [c.385]

Как уже отмечалось, производные 4-э, сзо-Ы-ацетилцитидина способны расщепляться панкреатической пиримидил-РНК-азой. Напротив, олигонуклеотиды, содержащие М-ацилированные остатки гуанозина, не являются субстратами для гуанил-РНК-азы В принципе ацетилирование РНК по остаткам гуанозина могло бы быть полезным при исследовании первичной структуры РНК. Однако методов для решения этой задачи в настоящее время не разработано. [c.408]

В последние годы достигнут ряд успехов в расшифровке нуклеотидной последовательности низкомолекулярных тРНК. Общий подход к решению этой задачи основан на расщеплении тРНК при действии специфичных РНК-аз РНК-азы Тх (гуанил-РНК-азы), панкреатической РНК-азы (пиримидил-РНК-азы). Получаемые в результате расщепления олигонуклеотиды разделяют на колонках с ДЭАЭ-целлюлозой и ДЭАЭ-сефадек-сом и далее определяют нуклеотидную последовательность индиврщуаль-ных олигонуклеотидов обычными методами (см. стр. 387). [c.427]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология