Фиске Суббароу метод определения фосфатов

Реактивы для определения неорганического фосфата методом Фиске—Суббароу (с. 34). [c.38]

Осадок белка удаляют фильтрованием. На определение неорганического фосфата из каждой пробы после фильтрования берут по 0,8 мл ТХУ-фильтрата, добавляют по 0,1 мл неразведенного раствора эйконогена, 0,3 мл молибденового реактива и по 1,3 мл воды. Через 10— 15 мин выдерживания на водяной бане (или в термостате) при 37— 40 °С пробы колориметрируют. Учитывая нестабильность стандартной кривой при определении неорганического фосфата методом Фиске— Суббароу, желательно одновременно с опытными пробами ставить 3— [c.399]

При 100°С в 1 н. НС1 гидролизуется на 100%, за 2 мин. Более стабилен, чем креатинфосфат, к реактивам при определении по неорганическому фосфату по методу Фиске — Суббароу. [c.496]

Минерализация. Количество взятого на минерализацию раствора зависит от содержания в анализируемом фосфорсодержащем органическом соединении фосфата и от чувствительности используемого для определения фосфата метода. При определении неорганического фосфата методом Фиске—Суббароу на минерализацию берут такое количество исследуемого раствора, чтобы в 1 мл полученного после минерализации и нейтрализации раствора содержалось от 0,2 до 1,0 мкмоль фосфата. 1—2 мл взятого на анализ раствора помещают в небольшую колбу для сжигания (колбу Кьельдаля) или жаростойкую пробирку, добавляют 0,3 мл концентрированной серной кислоты и, укрепив колбу (пробирку) слегка наклонно, осторожно нагревают раствор на горелке, песчаной бане или на специальной электрической плитке до тех пор, пока почти полностью выпарится вода и раствор в колбе приобретет бурую окраску (если органического вещества в пробе мало, то по-бурения можно и не заметить). После этого колбу (пробирку) охлаж- [c.44]

Определение по фосфору. Исследуемый раствор нуклеотидов или элюаты из участков бумаги или сорбента, содержащие АТФ, АДФ и АМФ, помещают в колбочки для сжигания. В качестве контроля используют растворы или элюаты из участков бумаги, не содержащие адениловых нуклеотидов. Проводят минерализацию проб и определяют неорганический фосфат по методу Фиске—Суббароу (с. 34). [c.187]

Для определения АТФазной активности к 1 мл среды инкубации добавляется 0,1 мл раствора миозина в 0,5 М КС1, содержащего около 10 мг белка в 1 мл. По завершении инкубации (обычно 10—15 мин) реакцию останавливают добавлением 1 мл 5%-ной трихлоруксусной кислоты и в ТХУ-фильтрате определяют неорганический фосфат методом Фиске—Суббароу (с. 34). [c.400]

Реактивы для определения неорганического фосфата методом Фиске и Суббароу. [c.399]

КИСЛОТНОЙ ВЫТЯЖКИ. Испытанные нами обычные методы осаждения фосфатов (магнезиальной смесью, реактивом Фиске и Суббароу) не дали удовлетворительных результатов без добавления носителя, так как осаждение бывает очень неполным, а в некоторых случаях даже совершенно не происходит. Выделение минеральной фракции фосфора (ортофосфато в) оказалось наиболее полным при экстракции фосфррно-молибденовых гетерополикислот изоамиловым спиртом аналогично тому, как это применяется Р. И. Алексеевым (1945) при определении орто-фосфорной кислоты в присутствии мышьяка и кремния и других фосфорных кислот. Измерение радиоактивности Р производилось при помощи изготовленного автором торцового счетчика типа Т-25-Е)ФЛ и стандартной регистрирующей аппаратуры. Определение общего содержания меченого фосфора в растениях производилось в навесках измельченного сухого материала по 100—200 мг, которые помещались в специально изготовленные чашечки из целлулоида. При исследовании обмена фосфорных соединений в растении все выделенные фракции подвергались озолению (мокрому или сухому), после которого производилось осаждение в виде фосфорномолибденовото комплекса (по Лоренцу). С помощью специально сделанного несложного прибора изготовлялись стандартные осадки на фильтровальной бумаге, что обеспечивало высокую воспроизводимость результатов определения радиоактивности. [c.114]

В методе Кори определяют освобождающийся в результате реакции фосфоролиза гликогена неорганический фосфат. Метод используют как для титрования активной формы фермента (фосфорилазы а), так и для измерейия активности его неактивной формы (фосфорилазы б), которая осуществляет катализ только при добавлении в реакционную смесь аденозин-5 -фосфата, АМФ. В смесь, содержащую фермент в буферном растворе, вносят гликоген, глюкозо-1-фосфат, в случае фосфорилазы б также и АМФ. Через определенные промежутки времени отбирают пробы и методом Фиске — Суббароу определяют в нлх содержание неорганического фосфата (Умбрейт и соавт., 1951). Освободившийся неорганический фосфат в присутствии сильной кислоты образует с молибдатом аммония интенсивно желтую соль (ЫН4)зН4[Р(М02О7)б]. Фосфомолибдат аммония восстанавливается далее в присутствии эйконогена (натриевой соли 1-амино-2-нафтолсульфоновой кислоты) до ярко-синего продукта, концентрацию которого измеряют фотометрически. [c.100]

Для определения активности фосфорилазы в гомогенатах тканей используют способность фермента освобождать неорганический фосфат из глюкозо-1-фосфата в присутствии или отсутствии АМФ. Субстратная смесь, содержит 0,1 М глюкозо-1-фосфат, 2% гликоген, 0,03 М АМФ я 0,2 М NaF (pH 6,1). К 0,05 мл субстратной смеси добавляют 0,05 мл 1% гомогената ткани и инкубируют при 37 °С в течение О, 10, 20, 40 мин. После окончания инкубации к пробам добавляют 0,5 мл 10% раствора ТХУ и 3,7 мл ледяной дистиллированной воды. Выпавшие в осадок белки удаляют центрифугированием, а в надосадочной жидкости определяют количество образовавшегося неорганического фосфата по методу Фиске—Суббароу. Для этого к пробе добавляют 0,5 мл смеси, состоящей из равных количеств 2,5% раствора молибдата ам1мония и 5 и. раствора H2SO4 и 0,2 мл основного раствора эйконогена. Через 10 мин определяют оптическую -плотность раствора при 620 км я рассчитывают нол-ичество неорганического фосфата. В этих условиях количество освобождающегося неорганического фосфата пропорционально времени инкубации и количеству фермента. [c.143]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология