Фермент формы множественные

Одним из наиболее изученных 4 ферментов, множественность форм которого детально изучена методом гель-электрофореза, является ЛДГ, катализирующая обратимое превращение пировиноградной кислоты в молочную. Пять изоферментов ЛДГ образуются из 4 субъединиц примерно одинакового размера, но двух разных типов. Поскольку Н-протомеры несут более выраженный отрицательный заряд при pH 7,0—9,0, чем М-про-томеры, изофермент, состоящий из 4 субъединиц Н-типа (Н,), при электрофорезе будет мигрировать с наибольщей скоростью в электрическом поле к положительному электроду (аноду). С наименьщей скоростью будет продвигаться к аноду изофермент М в то время как остальные изоферменты будут занимать промежуточные позиции. Следует подчеркнуть, что изоферменты ЛДГ, обладая почти одинаковой ферментативной активностью, различаются некоторыми физико-химическими свойствами молекулярной массой, электрофоретической подвижностью, отнощением к ак- [c.128]

Чтобы закончить с этой методической частью, следует добавить, что существуют и другие обычные, традиционные методы анализа множественных форм ферментов или белков и особенно всевозможные технические приемы хроматографии, иммунохимии или методы, основанные на биохимических свойствах ферментов (кинетика, сродство к субстрату, наличие кофакторов, стабильность при заданных pH или температуре). Однако очевидно, что благодаря весьма неплохой разрешающей способности, возможности одновременно анализировать много образцов (иногда в ничтожно малых количествах) и характеризовать молекулы с одинаковой активностью, электрофорез (и его основные разновидности — в градиенте акриламида и электрофокусирование) остается предпочтительным методом для изучения биохимического полиморфизма в том смысле, как он определяется. [c.41]

Для демонстрации множественных форм ферментов можно использовать многие биохимические методы и технические приемы, однако наиболее применимым был и остается метод электрофореза со всеми постепенными усовершенствованиями [3, 130]. [c.38]

Причины появления множественных форм ферментов [c.41]

ДНК-полимераза существует в различных формах в зависимости от выполняемых ею функций. Хотя это кажется невероятным, разнообразие форм ДНК-полимеразы обусловлено не субъ-единичной структурой, по крайней мере в бактериальных ферментах. Были охарактеризованы три различные формы фермента из бактерии Е. oli, которые обозначили как полимераза I, И и III. ДНК-полимераза I выполняет в основном репарирующие функции, тогда как ДНК-полимераза П1 является ферментом репликации. Функции ДНК-полимеразы II еще не ясны. Ферменты млекопитающих также существуют во множественных формах. [c.150]

Такие замечания необходимо учитывать при исследованиях с использованием множественных форм как маркеров — генетически обусловленной изменчивости, поскольку выбор ферментов в конечном счете остается очень ограниченным. [c.49]

Следует отметить некоторые ограничения применения уравнения Михаэлиса—Ментен, обусловленные множественными формами ферментов и аллостерической природой фермента. В этом случае график зависимости начальной скорости реакции от концентрации субстрата (кинетическая [c.138]

Во-вторых, ингибиторы нашли широкое применение в энзимологии при исследовании природы множественных форм ферментов и изоферментов, различающихся не столько электрофоретической подвижностью, сколько различной чувствительностью к одному и тому же ингибитору. [c.148]

Другие типы регуляции активности ферментов. Абсолютное количество присутствующего в клетке фермента регулируется временем его синтеза и распада. К регуляторным механизмам могут быть отнесены также конкуренция ферментов за общий субстрат, выключение активности одного из изоферментов (у множественных форм ферментов), влияние концентра- [c.156]

Большинство / -глюкозидаз из различных продуцентов имеют четвертичную структуру, а также содержат углеводную часть. Многие из выделенных ферментов имеют значительное число множественных форм, различающихся по молекулярной массе и другим физико-химическим параметрам [2, 4, 6]. В работе [86] были выделены две формы / -глюкозидазы (молекулярные массы 67 и 75-90 кДа), которые могли ассоциировать с образованием димера. Сообщается о выделении из одного источника / -глюкозидаз с молекулярной массой 135 кДа и двумя активными центрами и с молекулярной массой 90 кДа и одним активным центром. Оче- [c.69]

Экспериментальное решение такого рода задач предполагает контролируемое с точки зрения отдельных компонентов и их множественных форм культивирование продуцента выделение, тонкое фракционирование и получение в высокоочищенном состоянии множественных форм целлюлолитических ферментов детальную характеристику компонентов по биохимическим свойствам, субстратной специфичности изучение кинетики и механизма действия ферментов как индивидуально, так и в смеси с другими компонентами во всем диапазоне по глубине конверсии нерастворимого субстрата. [c.117]

Создание детальной кинетической модели ферментативного гидролиза целлюлозы и его оптимизация представляет собой крайне сложную задачу. Во-первых, целлюлазные комплексы, осуществляющие гидролитическое расщепление целлюлозы, состоят из нескольких различающихся по специфичности ферментов (которые в свою очередь могут иметь множественные формы) и в зависимости от источника могут значительно варьировать по компонентному составу, способности расщеплять природные формы целлюлозы, кинетическим и другим важным свойствам (термостабильности, адсорбционной способности и т.д.). Во-вторых, целлюлозосодержащие материалы, используемые в качестве сырья, представляют собой нерастворимые субстраты с различной реакционной способностью в зависимости от структуры целлюлозы, наличия в их составе нецеллюлозных компонентов (гемицеллюлозы, лигнина и др.), а также от способа их предобработки. [c.157]

В настоящее время интерес к изозимам резко повысился. Оказалось, что кроме генетически детерминированных изозимов существует большая группа ферментов, обладающая множественными формами, возникающими в результате их посттрансля1ционной модификации (см. гл. VII). Множественные формы ферментов и изозимы в частности используются сейчас для диагностики болезней в медицине, прогнозирования продуктивности животных, подбора родительских пар при скрещивании для обеспечения максимального гетерозиса в потомстве и т. п. [c.101]

К началу 70-.х годов стала очевидной необходимость создания определенного количественного подхода к изучению деполимераз, который позволил бы а) проводить сравнительное изучение ферментов пз различных источников (или множественных форм ферментов), имеющих один и тог же классификационный номер, но определенно отличающихся специфичностью действия б) достаточно однозначно характеризовать активный центр фермента [c.38]

Наиболее изученным олигомерным ферментом является лактатдегидрогеназа (она катализирует обратимое превращение пировиноградной кислоты в молочную), содержащая два типа полипептидных цепей Н—сердечный тип (от англ. heart—сердце) и М—мышечный тип (от англ. mus le—мышца) — и состоящая из 4 субъединиц. Этот фермент благодаря различным сочетаниям субъединиц может существовать в 5 формах. Такие ферменты получили название изоферментов, или, в соответствии с новой классификацией, множественных форм ферментов (см. главу 4). [c.71]

Теоретическая направленность занятий в данном разделе практикума по биохимии связана с анализом основных высокоэффективных механизмов регуляции активности ферментов, обсуждаемых в настоящее время в учебной литературе и на страницах известных биохимических журналов. К таким механизмам относятся аллостерический механизм контроля активности, реализующийся на уровне существования множественных форм ферментов механизм усиления, связанный с функционированием субстратных циклов адсорбционный механизм контроля, реализующийся при обратимом взаимодействии ферментов с биологическими мембранами регуляторный механизм с участием вторичных мессенжеров (цАМФ, С +) и универсальных модуляторов белковой природы (кальмодулин). [c.329]

Гель-фильтрация является наиболее мягким способом фракционирования целлюлаз. Метод наиболее эффективен для отделения целлобиаз, имеющих значительно более высокую молекулярную массу, чем эндоглюканазы и целлобиогидролазы, или низкомолекулярных эндоглюканаз с молекулярной массой менее 20000 Ла. Среди носителей наиболее эффективны сефакрил S-200, ультрагели (Pharma ia), биогели (Bio-Rad). Применение гель-фильтрации эффективно и для групповой очистки эндоглюканаз и целлобиогидролаз, однако низкая разрешающая способность полидисперсных носителей, как правило,не позволяет разделить множественные формы этих ферментов с близкими Mr (см. табл. 5.1). Недостатком метода является многократное увеличение объема наносимых образцов в ходе элюции, что требует последующего концентрирования, длительность процесса. [c.126]

Помимо тех причин существования изоферментных форм, о которых мы уже говорили, можно отметить расщепление проферментов, приводящее к образованию множественных форм, частичный гидролиз ферментов, а также обратимую модификацию белковых молекул (последнее обсуждается в разд. Е,4). [c.68]

Изменения называются конфигурационными, когда их вторичные и третичные структуры белков способны принимать различные геометрические очертания в зависимости от изменения клеточной среды (pH, температура, окислительно-восстановительный потенциал, ионная сила и т. п.) [151]. Это можно проиллюстрировать на примере катехолоксидазы винограда Vitis vi-nifera), которая представлена разными множественными формами в зависимости от условий экстракции фермента [85]. [c.45]

Множественные формы ферментов были выявлены у многих растений. В библиографическом обзоре Витт [181] приводит уже 51 фермент из числа обнаруженных у самых разных растений (от водорослей до покрытосеменных). Шеннон [152] перечисляет 33 фермента, преимущественно у высших растений. [c.49]

Изоферменты, или изоэнзимы,— это множественные формы фермента, катализирующие одну и ту же реакцию, но отличающиеся друг от друга по физическим и химическим свойствам, в частности по сродству к субстрату, [c.126]

Термин множественные формы фермента применим к белкам, катализирующим одну и ту же реакцию и встречающимся в природе в организмах одного вида. Термин изофермент применим только к тем множественным формам ферментов, которые появляются вследствие генетически обусловленных различий в первичной структуре белка (но не к формам, образовавщимся в результате модификации одной первичной последовательности). [c.128]

В табл. 5.1 представлены данные по биохимическим характеристикам множественных форм целлюлолитических ферментов микроорганизмов, эндоглюканаз, целлобиогидролаз и целлоби-аз. Как правило, каждый из ферментов целлюлазного комплекса представлен рядом множественных форм, причем, как продуктов экспрессии различных генов [4, 5], так и продуктов посттрансляционной модификации — ограниченного протеолиза и (или) дегликозилирования [6-9] Данные множественные формы часто имеют близкие биохимические характеристики (молекулярная масса, р1 и др.), что значительно затрудняет их получение в высоочищенном состоянии. [c.118]

Целлобиогидролазы целлюлазных комплексов выделены к настоящему времени из существенно меньшего количества источников, что связано во многом с отсутствием до последнего времени селективных методов их определения в смеси с эндоглюканазами. Как и эндоглюканазы, целлобиогидролазы являются в большинстве случаев гликопротеинами с молекулярной массой 55-65 кЛа, однако, известны ферменты и с меньшими значениями молекулярной массы (см. табл. 5.1). Изоэлектрические точки наиболее изученных множественных форм фермента из T.reesei имеют значения несколько ниже (3,8-4,2) и выше (5,5-6,5) р1 для эндоглюканаз. Как и эндоглюканазы, ферменты различаются по сродству к целлюлозе. В целом, биохимические характеристики целлобиогидролаз и эндоглюканаз весьма близки, что создает серьезные трудности при их разделении. [c.121]

В табл. 5.2-5.4 приведены примеры получения гомогенных по данным аналитического изоэлектрофокусирования и (или) электрофореза в полиакриламидном геле эндоглюканаз (см. табл. 5.2), целлобиогидролаз (см. табл. 5.3) и целлобиаз (см. табл. 5.4) из различных микробных источников. Как видно из представленных данных, во всех случаях для получения высокоочищенного фермента требуется 4-6 стадий. Помимо упомянутой выше близости множественных форм эндоглюканаз и других компонентов комплекса по биохимическим характеристикам, сложность и трудоемкость процесса получения очищенных целлюлаз связана с большим количеством примесей белкового (ксиланазы, ламинари-назы, пектиназы, протеиназы, другие белки и ферменты) и небелкового характера. Все это приводит к тому, что для ферментов из каждого, а нередко и из одного продуцента разрабатываются оригинальные схемы очистки. [c.121]

Значительно упрощает последующее фракционирование целлюлаз и предварительная оптимизация условий культивирования продуцента по таким параметрам как общий уровень и удельная (на 1 мг белка) активность ферментов, отсутствие протеиназ, способных в условиях культивирования расщеплять белок, упрощается также контроль за изменением изучаемых свойств фермента и т.д. Согласно данным [3, 53], дгьже минимальной оптимизации достаточно, чтобы свести к минимуму вероятность протеолити-ческой модификации целлюлаз, преодолеть расщепление их на десятки множественных форм, свести к минимуму содержание пигментирующих веществ, сделать более однозначной трактовку полученных результатов. [c.128]

Смотреть страницы где упоминается термин Фермент формы множественные: [c.114] [c.336] [c.202] [c.735] [c.75] [c.67] [c.38] [c.38] [c.60] [c.81] [c.83] [c.117] [c.125] [c.125] [c.126] [c.127] [c.127] [c.128] [c.130] [c.137] [c.138] [c.139] [c.140] [c.144]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология