Трансформированные клетки

Рис. 14.3. Вьщеление /гг/-генов методом генетической комплементации. Для комплементации Nif -щтамма К. pneumoniae используется банк клонов ДНК К1Г+-клеток. Трансформированные клетки отбирают по их способности расти на минимальной среде, не содержащей связанного азота.

При исследовании одного из трансформантов, содержащего вставку длиной 10,5 т.п.н. и способного превращать нафталин в салициловую кислоту, обнаружилось, что минимальная ростовая среда, содержащая триптофан, приобретает синюю окраску. Тщательный анализ этого явления показал, что трансформированные клетки Е. соИ синтезировали краситель индиго. Синтез происходил в четыре стадии (рис. 12.6). [c.252]

Трансформация — это процесс гибридизации бактерий, при котором осуществляется перенос информации химически чистой ДНК от клетки-донора в клетку-реципиент, где в результате рекомбинации замещается специфическая последовательность генома. При этом ДНК выступает как трансформирующий агент без каких-либо живых посредников (как это имеет место при конъюгации и трансдукции) и чувствительный к ферменту ДНК-азе (рис. 2.16). Трансформированная клетка и ее потомство будут обладать новыми признаками, которые контролируются привнесенным участком ДНК, частично или заметно отличающимся по своей нуклеотидной последовательности от замещенного участка ДНК в хромосоме реципиента. [c.103]

Идентифицируют и отбирают клетки, несущие рекомбинантную ДНК (трансформированные клетки). [c.50]

Трансформированные клетки, устойчивые к фагу X, подвергают осмотическому шоку, чтобы высвободить периплазматические бел- [c.248]

Чтобы очистить продукт ферментации, нужно прежде всего отделить клетки от культуральной среды. Сбор генетически модифицированных и исходных, нетрансформированных клеток можно проводить одними и теми же методами. Однако трансформированные клетки часто обладают другими физиологическими свойствами (они имеют другой размер или синтезируют внеклеточные полисахариды), и в результате условия, оптимальные для сбора нетрансформированных клеток, могут не подходить для клеток, синтезирующих чужеродный белок. [c.363]

Фитогормоны, синтезируемые трансформированными клетками в культуре, подавляют регенерацию из этих клеток зрелого растения, поэтому при конструировании векторов на основе Ti-плазмиды гены ауксина и цитокинина должны быть удалены. [c.377]

Инсулин играет основную роль в лечении диабета — болезни, по распространенности занимающей третье место после сердечно-сосудистых заболеваний и рака. Получение этого гормона генно-инженерным способом представлялось весьма перспективным и было выполнено в начале 80-х гг. XX столетия. В качестве компетентной клетки использовали Е. соИ, гены обеих цепей молекулы человеческого инсулина были получены методом химического синтеза. Эти гены присоединяли к З -концу гена, кодирующего белок р-галакто-зидазу, и вводили в векторную плазмиду Трансформированные клетки Е. соИ [c.501]

В условиях, ограничивающих рост нормальных клеток, трансформированные клетки как менее требовательные к факторам роста, пролиферируют до более высокой плотности и они становятся способными культивироваться в глубинных условиях (суспензионные культуры) при изменении своей формы до сферической Следовательно, и у грибных, и у животных, а также у ряда растительных клеток их морфологическое сходство (сферичность, округлость) в глубинных условиях выращивания находится под контролем генотипа и сопровождается изменением преимущественно клеточной мембраны [c.154]

После добавления мутантной ДНК к культуре пневмококка дикого типа в этой культуре появляются в большом количестве трансформированные клетки, т. е. клетки, которые приобрели устойчивость к действию стрептомицина. Относительное число их составляет от 1 10 до 1 10 , что значительно превышает частоту спонтанных мутаций. [c.311]

ДНК, сорбированных необратимо одной трансформируемой клеткой, было измерено с помощью ДНК, меченной (после тщательного отмывания клеток от обратимо сорбированной ДНК). Было установлено, что количество сорбированной радиоактивной ДНК пропорционально числу трансформированных клеток. Это обстоятельство позволяет рассчитать среднее число радиоактивных молекул, приходящихся на 1 трансформированную клетку. [c.346]

Рис. 12.6. Биосинтез индиго из триптофана, осуществляемый генетически модифицированной Е. соИ. Трипто-фаназа - один из ферментов, продуцируемых Е. соИ. Ген нафталиндиоксигеназы, катализирующей реакцию А, происходит из плазмиды NAH, а ген ксилолоксидазы, катализирующей реакцию Б, - из плазмиды TOL. В трансформированных клетках Е. соП индиго синтезируется либо по пути А, либо по пути Б, но не по ним обоим одновременно.

Серосодержащие (пептидные) Л. (LT 4 и др.) образуются в разл. нормальных и трансформированных клетках млекопитающих (лейкоцитах, моноцитах, макрофагах, в базофи-лах крыс, больных лейкемией и др.). Более широко распространены Л, типов А и В. Они найдены не только у животных, но и в нек-рых растениях, напр, картофеле. [c.583]

Трансформация — это процесс введения свободной ДНК в бактериальную клетку. Е. соИ используется в качестве организма-хозяина при работе со многими рекомбинантными ДНК, и чтобы обеспечить проникновение в клетки плазмидной ДНК, их обрабатывают ледяным раствором СаСЦ, а затем вьщерживают при 42 °С в течение 1,5 мин. По-видимому, в результате такой обработки происходит локальное разрушение клеточной стенки. Этот метод дает максимальную частоту трансформации, примерно 10 , т. е. на каждую 1000 клеток приходится одна трансформированная. Эффективность трансформации, которая определяется как число трансформантов на 1 мкг добавленной ДНК, составляет примерно 10 —10. Частота трансформации никогда не бывает 100-процентной, но этот недостаток компенсируется применением схем отбора, позволяющих быстро идентифицировать трансформированные клетки. [c.76]

Таблица 12.4. Синтез ксантановой слизи в трансформированных клетках X. ampestris и клетках дикого типа, растущих в среде с разными источниками

Типичный эксперимент по клонированию генов включает следующие этапы. 1. Рестрик-тазное расщепление ДНК, выделенной из организма, который содержит искомый ген. 2. Обработка вектора для клонирования (обычно плазмидного), который может реплицироваться в клетке-хозяине, теми же рестриктазами, которые использовались для расщепления донорной ДНК. 3. Смещивание этих двух образцов ДНК и сшивание фрагментов ДНК-лигазой фага Т4. 4. Трансформация сшитыми молекулами клеток-хозяев. Амплификация рекомбинантной ДНК в трансформированных клетках. [c.78]

Трансформированные клетки Erwinia активно превращали D-глюкозу непосредственно в 2-KLG, при этом собственные ферменты Erwinia, локализованные во внутренней мембране бактериальной клетки, преобразовывали глюкозу в [c.251]

Рис. 12.9. Схема трансформации и отбора рекомбинантных штаммов Streptomy es. Трансформированные клетки обозначены розовыми кружками, нетрансформированные — зелеными. ПЭГ — полиэтиленгликоль.

Несмотря на все это ученым удалось встроить и экспрессировать в Zymomonas некоторые чужеродные гены. Большинство проведенных экспериментов бьиш направлены на расширение спектра утилизируемых ею субстратов. Так, в Zymomonas были введены гены ферментов, гидролизующих лактозу, крахмал, целлюлозу, ксилозу и целлобиозу. Трансформированные клетки экспрессировали все эти гены, но в большинстве случаев не могли использовать перечисленные выше субстраты в качестве единственного источника углерода. Придать Zymomonas новые ката-болические свойства оказалось весьма непросто, хотя по крайней мере в одном случае удалось использовать этот микроорганизм для получения этанола из отходов, содержащих ксилозу. [c.293]

Образовавшиеся колонии покрыли слоем агара, содержащего карбоксиметилцеллюло-зу (КМК), растворимое производное целлюлозы, и инкубировали при 37 °С еще несколько часов. За это время произошло частичное расщепление молекул КМК, находящихся вблизи колоний, которые синтезируют и секретируют эндоглюканазу. Трансформированные клетки, синтезирующие, но не секретирующие эндоглюканазу, не способны расщеплять данный субстрат, молекулы которого из-за большого размера не проникают в клетку. [c.298]

В некоторых случаях для достижения высокой плотности культуры и получения больших количеств продукта достаточно проводить ферментацию в обычном периодическом режиме. В одном из экспериментов плазмиду, несушую ген гибридного белка, одним из компонентов которого был пептид инсулина В, помешали под контроль ф-цромотора Е. соИ и вводили в trp -штамм Е. oli] трансформированные клетки [c.363]

Для идентификации трансформированных клеток необходимо уметь обнаруживать чужеродную ДНК, интегрировавшую в геномную ДНК растения. Более того, при исследовании сигналов регуляции транскрипции и их функций в специфических растительных тканях (листьях, корнях или цветках) зачастую важно уметь количественно оценивать уровень экспрессии гена, кодирующего легко идентифицируемый продукт. Все это требует применения репортерных генов, которые позволяют либо проводить отбор трансформированных клеток, либо оценивать активность кодируемого ими фермента. Было протестировано несколько разных генов, которые можно использовать как доминантные селективные маркеры, и генов, чей белковый продукт можно обнаружить с помощью специфических методов (табл. 17.4). Поскольку многие из ренортерных генов имеют бактериальное происхождение, они были снабжены регуляторными последовательностями, обеспечивающими их экспрессию в растительных клетках. Проводя отбор по доминантному маркеру, можно получить культуру, содержащую только трансформированные клетки. Так, в присутствии канамицина выживают только клетки растений, синтезирующих активную неомицинфосфо-трансферазу. [c.381]

Эффект свидетеля (Bystander effe t) Уничтожение немодифицированных опухолевых клеток цитоток-сичным продуктом, синтезируемым соседними генетически трансформированными клетками. [c.565]

Выделен из Triti um vulgare. Участок связывания комплементарен последовательности из трех р(1-4)-связан-ных Ы-ацетил-О-глюкозаминовых остатков не агглютинирует нормальные клетки, если не созданы особые уел, (напр., после протеазной обработки), в то время как трансформированные клетки агглютинируются. [c.240]

Несмотря на то, что нуклеиновые кислоты были открыты более ста лет назад, их фундаментальная роль как носителей наследственной информации была осознана лишь в середине XX в. Решающее значение для этого имели результаты, полученные Эвери с сотр. и опубликованные в 1944 г. Было показано, что ДНК из убитых клеток бактерий В1р1ососсиз рпегипоп1ае, вызывающих пневмонию, при помещении ее в среду с непатогенными, т. е. не способными вызывать инфекцию, бактериями того же вида превращает (трансформирует) часть клеток в патогенные. При этом трансформированные клетки передают свойство патогенности следующим поколениям, т. е. с помощью ДНК в них вводится новая насле- [c.163]

Успехи, достигнутые в изучении структуры иммуноглобулинов, оказались возможными благодвря установлению того факта, что каждый вид антител продуцируется отдельной популяцией клеток (клоном). Присутствующие в крови нормальных индивидов антитела являются продуктами секреции множества клонов и представляют собой сложнейшую смесь близких по структуре, но не идентичных белков. В связи с этим в квчестве материала для исследования в настоящее время используются иммуноглобулины пациентов, страдвющих множественной миеломой — заболеванием, при котором трансформированные клетки выделяют в кровь огромные количества иммуноглобулинов (так называемые миеломные белки). Эти патологические иммуноглобулины по структуре и биологическим свойствам являются нормальными иммуноглобулинами, однако секретируются одним клеточным клоном и поэтому гомогенны. [c.212]

Вирусы ПОЛИОМЫ и 8У40 ( Обезьяний вирус 40 ) относятся к группе паповавирусов. Они содержат двухцепочечные кольцевые молекулы ДНК. В эксперименте вирус можно перенести для размножения в клетки тканевой культуры. Размножаясь в некоторых (так называемых пер-миссивных) клетках, вирус вызывает их лизис, и по мере его размножения клетки гибнут. В других (непермиссивных) клетках вирус ведет себя иначе. В этом случае размножение вируса подавляется, и примерно в одной из 10 клеток вирусная ДНК интегрируется в клеточную ДНК. Такое включение вирусной ДНК в геном клетки-хозяина может приводить к опухолевой трансформации. В трансформированной клетке образуется белок (Т-антиген), который запускает репликацию клеточной ДНК, и в результате начинается размножение клеток. Инъекция такого рода трансформированных клеток животным приводит к быстрому образованию опухолей. [c.153]

Смотреть страницы где упоминается термин Трансформированные клетки: [c.112] [c.126] [c.112] [c.58] [c.74] [c.127] [c.130] [c.226] [c.258] [c.282] [c.284] [c.290] [c.293] [c.310] [c.315] [c.395] [c.505] [c.441] [c.442] [c.759]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология