Метод радиоиммунного анализа

Высокая специфичность антител по отношению к антигену делает их гибким и действенным инструментом, который можно использовать для выявления, количественного определения и локализации множества разнообразных веществ, представляющих интерес для биолога. Но как можно обнаружить или измерить взаимодействие антитела с антигеном Начальная реакция связывания антигена с антителом-так называемая первичная реакция-может быть измерена многими различными способами. При радиоиммунном анализе, позволяющем определять даже ничтожные количества материала, известное количество радиоактивного антигена вместе со стандартным количеством антител добавляют к образцу, содержащему неизвестное количество того же антигена в нерадиоактивной форме. Немеченый антиген конкурирует с меченым за связывающие участки антител, и чем больше данного антигена в образце, тем меньше радиоактивного антигена будет связано с антителом. Свободный радиоактивный антиген можно отделить от связанного, а затем измерить количество того и другого с помощью ряда методов, использующих различия в свойствах свободных и связанных молекул один нз общих подходов состоит в осаждении (преципитации) комплексов антиген-антитело антителами к иммуноглобулинам (рнс. 17-28). [c.27]

В разделе изложены методы иммунизации животных и гибридизации клеток для получения поликлональных и моноклональных антител, методы получения препаративных количеств антител и их очистки, способы введения ферментных меток в антитела и антигены для использования в иммуноферментном анализе, способы введения радио-изотопных меток в антитела для радиоиммунного анализа, методы изучения антигенных свойств ферментов [c.307]

Биохимические метйды, используемые в стандартизации и контроле качества лекарств. Для стандартизации и контроля качества лекарств используют три группы методов. 1. Физические методы — спектрофотометрия, флюоресцентный анализ, масс-спектрометрия и др. 2. Химические методы неорганического, коллоидного и органического анализа состава лекарств и их метаболитов. Эти группы физико-химических методов позволяют установить структуру вещества и лишь сделать предположение о его биологической активности. 3. Биохимические исследования с использованием субклеточных фракций, клеток, тканей, органов и организмов позволяют оценить биологическую активность лекарств. Применение биохимических методов обеспечивает стандартизацию лекарств и контроль качества на этапах производства и хранения. Широкое распространение получило использование свойства специфического взаимодействия белков в системах фермент—субстрат , лекарство—рецептор , антиген-антитело . На основе этого фундаментального свойства белков созданы специфичные и высокоточные методы радиоиммунно-го, иммуноферментного, хемилюминесцентного анализа, аффинной хроматографии и др. [c.478]

Перед использованием аффинного сорбента рекомендуется отмыть его от 0,02%-ного азида натрия, который обычно добавляется в коммерческие препараты для предотвращения биодеградации носителя. Примеси белков или свободного лиганда удаляют кратковременной промывкой 1 М раствором уксусной кислоты с последующей тщательной промывкой обычным нейтральным буферным раствором. Перед нанесением образца на колонку необходимо определить специфическую активность исследуемого белка. Концентрацию белка целесообразно определять с помощью иммунохимического метода, например иммуно-ферментным или радиоиммунным анализом. [c.185]

При вдыхании через нос (ИН) кокаина-гидрохлорида 1,5 мг/кг, концентрация кокаина в моче С(К) 24 мкг/мл максимальна через 2 ч после введения и затем быстро уменьшается. С(БЭ)=75 мкг/мл в интервале 1-12 ч. затем медленно снижается и детектируется в течение 6 сут(радиоиммунным методом анализа). [c.91]

Содержание белка в зоне, введенной в колонку, должно быть минимальным (разд. 3.1). Для проведения анализов с зональным элюированием, когда работают с очень небольшими количествами подвижного компонента, преимущественно используют чувствительные методы детектирования, такие, как определение радиоактивности, радиоиммунный и ферментативный анализ. [c.221]

Определение константы связывания. Используют метод радиоиммунного анализа (РИА). Постановка метода сходна с постановкой ИФА (с. 320), с тем исключением, что вместо конъюгатов антител с ферментной меткой для выявления связывания антител с антигеном используют антимышиные антитела с радиоактивной меткой. В каждую лунку вносят по 50—100 мкл антимышиных антител (10—30 нг около 20 000 срт). Инкубируют при комнатной температуре около 2 ч. Затем микропланшеты тщательно отмывают (с. 321), разрезают и индивидуальные лунки просчитывают в Y-счетчике. [c.324]

Величина этого параметра определяет возможность применения тех или других антител. Иммуноанализ и гистохимические методы требуют антител с высоким сродством (/Ссв=Ю-э—чтобы комплексы антигена с антителами были очень прочными С другой стороны, имму-ноаффинная очистка лучше осуществляется с низкоаффинными антителами Ксв=10- —10- ), поскольку в этих условиях адсорбция и освобождение антитела проходят при относительно мягких условиях без повреждения антигена и антител и колонка может использоваться повторно. Анализ взаимодействия антител с антигеном проводят по методу Скэтчарда (см. с. 343) с использованием радиоиммунного анализа. [c.324]

За последние годы число пептидов, найденных в живых системах, сильно возросло. В период 1944—1954 гг. были разработаны основные аналитические методы выделения, очистки и установления структуры пептидов. Однако исследования некоторых пептидов, особенно пептидов головного мозга, совершенно не развивались, так как были неизвестны соответствующие аналитические методы определения нанограммовых (10" г) или меньших количеств вещества. Лишь с развитием радиоиммунного анализа (RIA) (Р. С. Ялоу, лауреат Нобелевской премии 1977 г. по физиологии и медицине, и С. Берсон) стали возможны определения исключительно малых концентраций пептидов в соответствующих препаратах. Например, некоторые гормоны можно обнаружить при содержании 10" г в 1 мл крови. Развитие радиоиммунного метода позволило начать исследование нейрогормонов гипоталамуса. Гийемен и Шалли (получившие вместе с Ялоу Нобеленскую премию по физиологии и медицине) смогли привести экспериментальные доказательства того, что центральная нервная система модулирует активность гипоталамуса путем выделения ничтожных количеств либеринов (факторы высвобождения гормонов, рилизинг-факторы) тем самым контролируется эндокринная регуляция. Оба исследователя (совершенно независимо друг от друга) установили последовательность первых гормонов гипоталамуса и синтезировали их в лаборатории. [c.230]

Иод входит в состав многих биологически важных соединений. Более того, его можно довольно легко ввести (при помощи реакции иодирования) во многие соединения, поэтому используется во многих важных клинических анализах. Так, например, щитовидная железа вырабатывает гормон тироксин, Б молекулу которого входят четыре атома иода. И чрезмерно малая, и чрезмерно высокая концентрация тироксина приводит к негативным последствиям. Его уровень можно измерить методом радиоиммунных испытаний с помощью гамма-счетчика, сравнивая число радиоактивных импульсов, даваемых образцом сыворотки после соответствующей обработки, с числом импульсов, полученных от образца с известной концентрацией 1. В результате последующего преобразования полученных таким образом данных (двойное логарифмирование с линейной регрессией, полулогарифмирование с линейной регрессией и т. д.) можно установить концентрацию тироксина в сыворотке. При этом настольный компьютер существенно oбv eгчит обработку данных. [c.30]

Прежде всего, само название книги (в оригинале книга называется omplementary Immunoassays ) указывает на новое мышление разработчиков методов иммунохимического анализа. Вместо того чтобы противопоставлять один метод другому, авторы обзоров фактически показывают, что для решения множества задач, стоящих перед иммунохимичёским анализом, необходимо много разных по чувствительности, экспрессности и способам регистрации методов. Если в 70-е Годы доминирующее положение в практическом плане занимал радиоиммунный анализ (РИА), то во второй половине 80-х стало очевидным, чта другие методы приобретают главенствующее значение. Может быть, именно это обстоятельство повлияло на то, что редактор данной книги профессор Коллинз отказался от мысли сохранить название предыдущего издания Альтернативный иммуноанализ . Как бы там ни было, но [c.5]

Часто радиоиммунный анализ основан 11а принципе конкуренции меченого антигена с немеченым. Например, требуется установить, содержится ли в изучаемом препарате данный антиген Существует тест-система, состоящая из такого же антигена, меченного радиоактивным г одом, и антител к нему. Исследуемый препарат инкубируют первоначально с антителом, а затем добавляют меченый тест-антиген. Затем иммунный комплекс осаждают либо сульфатом аммония, либо антииммуноглобу-линовой сывороткой. Если радиоактивность в опытной пробе ниже, чем в контрольной (где содержатся только компоненты тест-системы), значит п изучаемом образце содержится антиген, сходный или идентичный радиоме-ченому антигену тест-системы. Тот же метод может быть построен на принципах иммуносорбции с использованием иммобилизованных антител. При этом отпадает необходимость осаждения иммунного комплекса. Методы, основанные на принципе конкуренции, нетрудно выполнить на количественной основе. Именно таким способом могут определяться различные гормоны, причем в количе- [c.261]

Клиническая фармакокинетика составляет научную основу и базис клинической фармации и самым тесным образом связана с клинической фармакологией и методами анализа. В условиях современной клиники деятельность в области клинической фармакокинетики реализуется в лаборатории, оснащенной новейшей медико-биологической аппаратурой, позволяющей осуществлять радиоиммунное определение препаратов, хрома-томасс снектрометрию, флюорометрию, спектрофотометрию, газожидкостную хроматографию и т. д. По клинической фармакокинетике специализируются фармацевты. Первая лаборатория клинической фармакокинетики была открыта в 1972 г. В настоящее время в некоторых странах во всех крупных больни- [c.113]

При наличии гибридов производят смену среды Дальбекко (без аминоптерина) в течение последующих 14 дней и, наконец, добавляют минимальную модифицированную среду Дальбекко. После этого следует скрининг (от англ. s reen — решето, хфосеивать) гибридных клеток по образованию антител, используя серологические реакции, радиоиммунный, иммунофлуоресцентный или иммуноферментный анализ. Более чувствительный из них радиоиммунный метод. [c.576]

Во многих странах достаточно упрочился скрининг врожденного гипотиреоза среди новорожденных. Он основан на анализе крови на тироксин (Т4). В случае повышения уровня Т4 с помощью радиоиммуно-логического метода проводят измерение уровня тиреотропного гормона. Лечение является высоко эффективным и предотвращает развитие умственной отсталости и других признаков и симптомов гипотиреоза. Частота врожденного гипотиреоза составляет около 1/4000, он встречается в два-три раза чаще фенилкетонурии. Этиология врожденного гипотиреоза обьино не связана с наследованием по менделевским законам и часто не связана с генетическими факторами. В настоящее время для рутинного скрининга среди всех новорожденных можно определенно рекомендовать фенилкетонурию и врожденный гипотиреоз. [c.162]

Рис, 4. Сравнение результатов иммуиоферментного и радиоиммунного методов выявления антител к антигенам вируса гепатита В в культуральной жидкости клеток гибридом. Надосадочные жидкости исследовали, кал описана в тексте (пример Б). Один квадрат таблицы содержит результаты анализа одной иадосадочиой жидкости. Цифра — радиоактивность (имп/мин) отражает количество связанных 1-антител кролика к иммуноглобулинам мыши. Плюсы и минусы — оценка реакции в ИФМ (—отрицательная реакция +, + +, -i -i -l- разные степени цветной положительной реакции). Первая колонка— контрольный опыт (без белкового антигена), вторая — негативный контроль (с одной лишь средой) в остальных квадратах — результаты испытания отдельных клонов иа синтез антител к антигенам вируса гепатита В. [c.336]

По-видимому, лучшим примером развития рынка, имеющего отношение к биосенсорам, является рынок радиоиммуноаналитических методов. Этот рынок начал развиваться в начале 60-х гг. после того, как выяснилось, что радионуклидную метку можно использовать для количественного контроля взаимодействия специфического антитела с соответствующим антигеном. Со времени создания этот метод был единственным средством выполнения многих стандартных анализов в данной области. В результате в течение 60-70-х гг. рынок быстро рос и привлек много фирм. Техническое совершенствование радиоиммунных методов, вначале быстрое, затем замедлилось, и в середине 70-х гг. большинство конкурентов продавало сходную продукцию. Поскольку для подсчета числа радиоактивных меток можно использовать любой имеющийся гамма-счетчик, многие клинические лаборатории покупали только один счетчик и стало обычным делом менять поставщиков. Выбор покупателя теперь обуславливался главным образом ценой. Соответственно и прибыли многих поставщиков упали. Рынок стал обнаруживать все признаки фазы полного развития. [c.582]

Один из основных показателей, определяющих фармакологический эффект, — концентрация ЛС в области рецептора, однако в условиях организма установить её невозможно. В большинстве случаев наблюдают корреляцию между концентрацией препарата в крови и его содержанием в области рецептора (см. рисунок). Поэтому для определения фармакокинетических параметров ЛС изучают его содержание в крови. Чтобы получить соответствующие представления о поступлении препарата в кровь и выведении его из организма, используют методы жидкостной или газожидкостной хроматографии, радиоиммунный, ферментохимический анализы, спектрофотометрический метод. На основании полученных данных строят график (известный как фармакокинетическая кривая), отмечая на оси абсцисс время исследования, а на оси ординат — концентрацию препарата в плазме крови. Эту кривую можно преобразовать в линейную форму, отобразив на графике изменение во времени логарифма концентрации. [c.3]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология