Идентификация выделенных вирусов

Вирусы намного меньше бактерий и в отсутствие адсорбции должны проходить через поры мембран, используемых обычно при фильтрации более крупных частиц. Мембраны, которые способны механически (стерически) задерживать вирусы, имеют размеры пор того же порядка, что и ультрафильтры. Однако при необходимости фильтрации больших объемов воды ультрафильтры забиваются слишком быстро, так что ими нельзя долго пользоваться. Для удаления вирусов из больших объемов, как, например, в случае проведения контроля по загрязнению воды, широко используются мембраны с порами бактериальных размеров. Несмотря на то что у этих мембран поры больше, чем размеры вирусных частиц, с их помощью можно выделять вирусы, которые адсорбируются на матрице мембраны. Действительно, поскольку толщина мембр,анных фильтров составляет примерно 5000 вирусных диаметров, они действуют по отношению к вирусам отчасти и как глубинные фильтры, хотя их эффективность по сравнению с истинными глубинными фильтрами довольно низка. Соответствующим подбором условий фильтрации, главным образом pH воды, можно увеличить задерживающую способность мембраны и удалить по существу все вирусные частицы из водной пробы, используя мембраны с размером пор порядка 0,45 мкм. Вирусные частицы, адсорбированные на мембране, могут быть затем десорбированы для их идентификации или подсчета. Применительно к вирусам мембранную фильтрацию наиболее часто используют при проведении анализа питьевой воды поэтому цель настоящей главы состоит в том, чтобы показать, как мембранная технология используется в этой области. Материал этой главы хорошо освещен в обзоре Биттона [29]. [c.333]

Экспресс-метод диагностики — РИФ. Вирус выделяют в культурах клеток или на куриных эмбрионах. Идентификацию выделенного вируса осуществляют с помощью РИФ, PH, торможения гемадсорбции, РТГА, РСК. Для серодиагностики используют РТГА, РСК, ИФА. [c.261]

Выделение и идентификация вируса. Вирус выделяют путем заражения чувствительных животных (шимпанзе и обезьян-мармо-зеток), а также культуры человеческих лимфоцитов, стимулированных фитогемагглютинином, фильтратом фекалий. Вирусный антиген в цитоплазме гепатоцитов определяют с помощью РИФ, скопления вируса позволяет выявить также электронная микроскопия. [c.303]

Опыты с ДНК, выделенной из клеток опухолей, также свидетельствуют о существовании онкогенов. Метод обнаружения клеточных онкогенов получил название переноса геиов или трансфекции . Он основан на том, что некоторые гены, присутствующие в опухолевых клетках, могут вызывать трансформацию нормальных клеток в культуре. Из опухолевых клеток выделяют ДНК, осаждают фосфатом кальция и добавляют к клеткам-реципиентам (обычно в этой роли выступает линия мыщиных фибробластов NIH/3T3). Через 1—2 недели под микроскопом наблюдают образование фокусов трансформации. Клетки, составляющие фокус, меняют свою морфологию из распластанных они становятся округленными. Из трансформированных клеток выделяют ДНК, и опыт повторяют. Так делают несколько раз, при этом уменьшается количество ДНК, не участвующей в переносе признака трансформации, и, следовательно, облегчается идентификация специфических генов (при помощи гибридизации по Саузерну (см. гл. 36)). С помощью этого метода было идентифицировано около 20 клеточных онкогенов некоторые из них сходны с геном ras вируса саркомы мыщей. Эти клеточные онкогены либо вообще не отличаются от нормальных генов, либо имеют небольшие структурные особенности (см. ниже). В первом случае при опухолевом перерождении может меняться регуляция их экспрессии. [c.359]

Клиническую диагностику вирусов, как правило, проводят в два этапа на первом— убеждаются в вирусной природе заболевания, на втором — идентифицируют вирус. Чаще всего вирус обнаруживают по ЦПД. При некоторых заболеваниях для постановки предварительного диагноза достаточно располагать сведениями о ЦПД и клинической картине заболевания. Так, например, во многих лабораториях, где проводят заражение фибробластов материалом, полученным с генитального мазка, указывают, что обнаружены признаки ЦПД, характерные для вируса простого герпеса . При этом последующую формальную идентификацию вируса не проводят. В других случаях признаки ЦПД характеризуют большую группу вирусов, например энтеровирусов 67 типов. Здесь постановка более точного диагноза будет зависеть от результатов реакции нейтрализации вируса специфическими антисыворотками (нейтрализационный тест). Последняя процедура требует много времени, поэтому возможны промежуточные сообщения, например выделены энтерови русы, необходима дальнейшая идентификация . [c.311]

Зембала с сотр. [863] проводили частичную очистку и определение молекулярного веса опухолевого КФ-антиге-на, индуцируемого вирусом полиомы. Гельфильтрацией на сефадексе Г-200 было обнаружено два типа КФ активности, Максимальной активностью обладала фракция, соответствующая макроглобулинам (мол. вес 3—4 10 дальтон). Минимальная КФ активность была связана с фракцией, имеющей молекулярный вес 1,35 10 дальтон. Аналогичные результаты получил Форсис с сотр. [321] при идентификации двух растворимых КФ антигенов респираторно-синцитиального вируса. При использовании сефадекса Г-200 эти авторы выделили два антигена А и В, которые различались по молекулярному весу. [c.137]

Адансоп [6] считал, что систематические единицы следует выделять, учитывая все известные признаки и считая их равнозначными. Он предложил несколько не связанных между собой классификаций, основанных каждая иа каком-то одном признаке, а затем сравнил результаты, полученные при идентификации видов, произведенной на основании разных признаков. В конечном счете были получены группы, основанные на наибольшем числе совпадающих признаков. Этот метод слишком трудоемок и до недавнего времени не получил широкого распространения, так как для получения удовлетворительных результатов требовалось учесть не менее 60 равнозначных независимых качественных (т. о. 4- или —) признаков [1635]. Однако с появлением вычислительной техники возродился интерес к классификациям такого рода. Вычислительную машину можно по-разному использовать для экспериментальной разработки классификации вирусов [145, 146, 616]. Анализ, проводимый при помощи такой машипы, объехстивен, причем могут учитываться числовые данные, такие, как отношение оснований в нуклеиновых кислотах и аминокислотный состав белка. Классификацию, основанную на расчетах, получеппых с помощью вычислительной машины, иа данном этапе следует рассматривать как экспериментальную. Этот подход, как и любой другой метод классификации, также лимитирован недостатком данных о вирусах. На практике неизбежно некоторое взвешивание признаков, даже когда оно сводится к решению вопроса о том, какие признаки отбросить, а какие включить. Из всех возмоншостей этого подхода нас в настоящее время в основном будет интересовать проверка систем классификаций, полученных другими методами, и выявление новых, ие известных ранее отношений между вирусами, существование хадторых меняет быть затем проверено экспериментальным путем. [c.486]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология