Определение константы связывания

ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОНСТАНТ СВЯЗЫВАНИЯ КОНКУРЕНТНЫМИ [c.248]

Определение констант связывания конкурентными методами [c.344]

Следует, однако, отметить, что определение констант связывания субстрата с мицеллами по данным о растворимости полностью основывается на поведении насыщенных систем, поэтому результаты существенно осложняются (особенно в случае ионных детергентов) вследствие влияния противоионов и изменения коэффициентов активности. В связи с этим более надежны опыты, проведенные с различными концентрациями субстратов и детергентов. Интересно, что, несмотря на многочисленные упрощающие предположения, значения К, полученные из уравнений (10) и по данным о растворимости [уравнение (И)], согласуются между собой. [c.243]

Определение констант связывания К и констант ингибирования Ki для мицеллярно-каталитических реакций позволяет, по крайней мере качественно, интерпретировать влияние структуры субстрата на природу процесса комплексообразования с мицеллами и дает возможность сравнить константы связывания в мицеллярных системах с константами связывания в ферментативных реакциях. Ограниченное число данных такого рода не позволяет пока сделать каких бы то ни было широких обобщений. Однако применимость данных по связыванию с мицеллами в кинетических исследованиях продемонстрирована достаточно ясно в работах [101 — 103, 111, 133, 134, 136, 139]. [c.244]

Облегченная диффузия и активный транспорт во многом сходны. Оба процесса, по-видимому, осуществляются при участии специальных белков-переносчиков и для обоих характерна специфичность к ионам, сахарам и аминокислотам. Об этом свидетельствуют результаты анализа тех последствий, к которым приводят мутации в бактериальных и животных клетках (включая некоторые мутации, вызывающие заболевания у человека). Облегченная диффузия и активный транспорт напоминают реакцию между ферментом и субстратом, однако они осуществляются без образования ковалентных связей. На это сходство указывают следующие моменты 1) имеется специфический участок связывания для растворенного вещества 2) процесс переноса характеризуется насыщением, т. е. существует некая максимальная скорость транспорта (рис. 42.15) 3) процесс характеризуется определенной константой связывания, так что система в целом имеет свою Кул (рис. 42.15) 4) вещества, сходные по своей структуре с переносимым соединением, являются конкурентными ингибиторами и блокируют транспорт. [c.140]

Таблица 3. Определение констант связывания для взаимодействий

Рис. 10. Графическое определение константы связывания в двойных обратных координатах

Показано, что если лиганд взаимодействует с несколькими типами рецепторов, то отношение констант ингибирования равно отношению констант диссоциации. При некооперативном характере взаимодействия лиганда с рецептором константа ингибирования равна константе диссоциации холодного лиганда (см. ниже Определение констант связывания конкурентными методами ). Таким образом, константа ингибирования характеризует степень специфичности данного лиганда по отношению к данному типу рецепторов. [c.421]

Как было показано в 3.3, в ряде случаев определение равновесных констант комплексообразования прямыми методами затруднено или невозможно. Тогда используют конкурентные методы определения констант связывания. Рассмотрим некоторые из них. Во избежание возможной путаницы в дальнейшем будем обозначать индексом 1 все, что относится к лиганду с известной константой связывания, а индексом 2 — все, что относится к лиганду с определяемой константой. [c.424]

Определение константы связывания. Используют метод радиоиммунного анализа (РИА). Постановка метода сходна с постановкой ИФА (с. 320), с тем исключением, что вместо конъюгатов антител с ферментной меткой для выявления связывания антител с антигеном используют антимышиные антитела с радиоактивной меткой. В каждую лунку вносят по 50—100 мкл антимышиных антител (10—30 нг около 20 000 срт). Инкубируют при комнатной температуре около 2 ч. Затем микропланшеты тщательно отмывают (с. 321), разрезают и индивидуальные лунки просчитывают в Y-счетчике. [c.324]

В ряде случаев прямое измерение константы ассоциации комплекса белок — органический лиганд невозможно либо вследствие недоступности меченого соединения, либо вследствие небольшого значения величины константы ассоциации. В этих случаях обычно используют методы определения констант связывания, основанные на вытеснении лиганда с Известной константой связывания исследуемым лигандом. Рассмотрим некоторые из этих методов. Во избежание возможной путаницы будем обозначать индексом 1 все, что относится к лиганду с известной константой, индексом 2 — все, что относится к лиганду с определяемой константой. Суше-ствующие конкурентные методы определения равновесных констант можно подразделить на два типа а) методы, основанные на ингибировании связывания ( вытеснении ) первого лиганда с постоянной концентрацией Lia возрастающими концентрациями второго лиганда Lia (см. рис. 108) б) методы, основанные на анализе равновесных кривых связывания первого лиганда в присутствии постоянной концентрации второго лиганда Ьга (см. рис. 109, ПО). Выбор метода зависит от условий эксперимента, доступности лигандов, поэтому трудно отдать предпочтение какому-либо одному из них. [c.248]

Достаточно широко используемым методом определения константы связывания Ка2 является метод, предложенный Диксоном (Dixon, 1953). Метод основан на анализе кривых вытеснения лиганда Li при двух его концентрациях (Lia)l, (Lio)2>Qa лигандом Ls. Если эти зависимости представлены в координатах [c.250]

Рис. 13.2. Графическое определение констант связывания и константы скорости, основанное на уравнениях (16) и (18) (из эксперимент М1ьных данных