Эксплантаты получение

Основополагающие эксперименты, проведенные в 1907 году, включали использование небольших фрагментов ткани или эксплантатов. В наше время культуры обычно готовят из клеточной суспензии, полученной путем диссоциации ткани. Большинство клеток, образующих ткани многоклеточных организмов, в отличие от бактериальных клеток не способны расти в суспензии. Для роста и деления им необходима твердая поверхность. Вначале, когда метод культивирования только появился, в качестве механической опоры использовали сгусток плазмы, но в настоящее время его обычно заменяют поверхностью пластиковой культуральной чашки фис. 4-39). Клетки очень различаются по своим потребностям некоторые из них способны расти или дифференцироваться только в том случае, если культуральная чашка покрыта компонентами внеклеточного матрикса, например коллагеном. [c.203]

Регенерация обычно с трудом происходит из трансформированных недифференцированных тканей, полученных из культивируемых более нескольких месяцев клеток суспензии, а еще с большим трудом из каллусов, полученных из протопластов [3, 28]. Таким образом, прежде чем осуществлять трансформацию любой разновидности растений, чрезвычайно важно определить наиболее чувствительный эксплантат. Для. многих культурных видов главной трудностью остается трансформация клеток, способных регенерировать побеги ( органогенез ) или способных к эмбриогенезу, и поэтому большинство методов разработано в результате экспериментов на модельных системах культуры тканей, таких, как табак и петуния. Для ясности большинство из рассматриваемых ниже методик основано на использовании именно таких модельных систем. В целом все основные манипуляции с культурой ткани должны быть действенными для успешной разработки системы трансформации конкретных видов растений. Информация относительно культивирования тканей многих видов содержится в следующих литературных источниках [4, 24, 25, 26, 70, 83]. [c.105]

При использовании агробактерий в качестве трансформирующих векторов существенно, чтобы достаточное число интактных клеток в участках поранения тканей эксплантатов переходила к дедифференцировке и клеточному делению. Следует сохранить на минимальном уровне прямой органогенез адвентивных органов и продолжающийся рост из предсуществующих меристем, поскольку нет уверенности, что клетки, вступившие на этот путь развития, могут быть трансформированы. Если не контролировать последние два пути развития, то придется применять лабораторные методы скрининга для идентификации трансформированных побегов на фоне гораздо большей популяции побегов, полученных из нетрансформированных тканей. [c.118]

Во многих случаях при культивировании растительной ткани легче регенерировать побеги из эксплантатов органов, чем из полученных на основе протопластов тканей или устоявшихся [c.119]

Изложенная ниже методика представляет собой простой путь получения трансформированных растений льна, который исключает непосредственное образование зародышей. В данном эксперименте сначала изучают способность различных эксплантатов проростков льна регенерировать побеги. Затем соответствующие эксплантаты инокулируют агробактериями и отбирают трансформированные каллусы. И наконец, регенерируют побеги из трансформированных тканей. [c.132]

Получение стерильных проростков льна и регенерация из эксплантатов проростков льна [c.132]

Во введении к данной главе мы уже обсуждали различные этапы разработки системы трансформации, использующей большие популяции малых эксплантатов, таких, как полученные из протопластов клетки. [c.152]

Для получения требуемых эксплантатов растения нарезают на стерильной белой керамической плитке. [c.177]

НЫХ колониях, полученных из одного клона, или, что предпочтительнее, на трансформированных растениях. Ткани, образующиеся при трансформации больших гетерогенных эксплантатов, могут содержать разнообразные типы трансформированных клеток, а также нетрансформированные клетки, что затрудняет интерпретацию результатов, полученных методом блоттинг-гибридизации по Саузерну. Следовательно, перед тем как исследовать Т-ДНК, рекомендуется уточнить, к какому клону принадлежит изучаемая ткань. [c.317]

II. Утром в день получения эксплантатов пропитайте 10 ыл стерильной дистиллированной воды или раствора Хэнкса слой ваты или фильтровальной бумаги, используя градуированную пипетку, и установите часовые стекла над отверстиями в подложке. Эти отверстия обеспечат прохождение света при работе с бинокулярной лупой и облегчат макроскопическое обследование эксплантата в ходе культивирования. [c.221]

Самым важным обстоятельством при получении и выращивании клеточных культур является необходимость асептики. В соответствии с этим мы выделяем особо все методы асептического получения исходных эксплантатов и дальнейших манипуляций с ними в условиях, обеспечивающих стерильность. [c.232]

Семена до набухания стерилизуют для снятия эпифитной и субэпидермальной микрофлоры одним из стерилизующих агентов, трижды промывают стерильной водой и оставляют для набухания в стерильной чашке Петри. Затем семена стерилизуют второй раз, отмывают 3 раза стерильной водой и с помощью стерильных инструментов вычленяют зародыш или его структуры, которые помещают на питательные среды для роста зародыша или индукции каллусов, кроме того, стерильные семена можно использовать для получения каллуса из семян, помешенных на агаризованную среду, содержащую фитогормоны, а также для получения проростков из семян на агаризованной среде без фитогормонов, с последующим использованием стерильных корней, побегов, листьев в качестве эксплантатов для получения каллусных культур. При помещении кусочков или дисков стебля на питательную среду требуется соблюдать условия физиологической полярности, т. е. помещать их апикальным концом в среду. У фрагментов пластинок листа надсекают в нескольких местах жилки и помешают их нижней стороной пластинки на среду. [c.238]

Получение эксплантата. В стерильную чашку Петри с каплей трипсина (0.25 %-ный раствор) или питательной среды (предохраняет от высыхания) помещают фрагмент кожи. Придерживая фрагмент пинцетом, нарезают его на мелкие кусочки величиной с булавочную головку и меньше стерильным лезвием безопасной бритвы, зажатой в зажим Кохера или Пеана. При помощи изогнутой препаровальной иглы кусочки извлекают из капли и помещают на покровное стекло, находящееся в пенициллиновом флаконе или в пробирке Лейтона. Уложенные кусочки накрывают другим покров- [c.252]

Поскольку физиологически и морфологически нормальные растения невозможно регенерировать из онкогенных клеток корончатых галлов, большинство современных векторов на основе Ti-плазмид неонкогенны. Как упоминалось выше, главная особенность онкогенных систем трансформации с помощью агробактерий состоит в том, что галлы и косматые корни вырастают из эксплантатов, и, следовательно, трансформированные клетки легко отличить. Это очень важное свойство, поскольку трансформация эксплантатов с помощью неонкогенных векторов часто не позволяет отобрать резистентные к антибиотику ткани на фоне нетрансформированных клеток. Таким образом, онкогенные векторы, которые к тому же несут гены устойчивости к антибиотикам [38, 39], очень полезны для быстрого подбора наилучших эксплантатов и методик инокуляции, чтобы получить оптимальную трансформацию. Индукция микроопухолей в местах поранения с большой площадью поверхности, таких, как срезы клубня или главного корня (рис. 2.7), тоже представляет собой удобный способ получения. нескольких тысяч легко отличимых, независимых трансформантов. [c.109]

В качестве примера ниже описывается получение подходящих эксплантатов из тепличных растений табака (листовых дисков) и из культивируемых in vitro проростков льна (гипокотилей). Подробности, касающиеся других видов растений, см. в приложении 2[Vni]. [c.118]

В последующие 5—20 дней периодически наблюдают за эксплантатами побегов, следя за появлением признаков образования корней, хлороза и формирования новых листьев. Некоторые нетрансформированные побеги часто успевают пускать новые побеги прежде, чем становятся хлоротическими, а впоследствии погибают только через несколько недель культивирования на среде, содержащей селективный агент (например, канамицин). Однако в большинстве случаев только трансформированные побеги успешно укореняются на среде, содержащей канамицин. Следует еще раз отметить, что часть побегов, полученных из листовых дисков, нередко укореняется в присутствии селективного агента такие неудачи в порядке вещей. [c.126]

На первом этапе получения первичной культуры происходит стерильное удаление фрагмента ткани животного и его механическая или ферментативная дезагрегация. Ткань может быть просто измельчена до кусочков объемом около 1 мм , которые прикрепляются к поверхности чашки благодаря собственной адгезивности, или наличию насечек на чашке или с помощью сгустка плазмы [1]. В этих случаях будет происходить рост клеток из фрагментов и клетки, мигрирующие из эксплантатов, могут использоваться для пассирования. Фрагменты ткани (эксплантаты) могут переноситься на новые чашки мигрирующие клетки могут удаляться трипсинизацией, а остающийся эксплантат будет образовывать новые выросты. Трипсинизированные клетки пересеваются в новые сосуды и становятся вторичной культурой. По формальным признакам такая культура носит название линии клеток. [c.22]

Первичные культуры могут быть также получены путем дезагрегации тканей ферментами, например трипсином (0,25%-ный неочищенный или 0,01—0,05%-ный очищенный) нли кол-лагеназой (200—2000 ед./мл, неочищенная). Клетки образующейся при этом суспензии оседают, прикрепляются и распластываются на поверхности стекла или пластика [1]. Такой способ получения культуры обеспечивает более высокий выход клеток, хотя он кажется более селективным, поскольку только определенные клетки переживают диссоциацию. На практике успешное получение первичных культур из многих тканей, особенно из эпителия, связано с использованием коллагеназы при этом размер эксплантата снижается до небольшого класте- [c.22]

В понятие органная культура входит получение эксплантата и выращивание in vitro органа или части органа, в котором различные компоненты ткани, такие ак паренхима и строма, а также их анатомическая взаимосвязь и функционирование сохраняются в культуре таким образом, что эксплантирован-ная ткань близко напоминает родительскую in vivo. Миграция изолированных клеток на периферии эксплантата подавляется специальными условиями культивирования, и образующиеся новые отростки состоят из дифференцированных структур. Так, в изолированных железах образуются новые железистые структуры, а на периферии эксплантатов легочной ткани развиваются новые мелкие бронхи. Они состоят из альвеол, окаймленных секреторным кубическим или цилиндрическим бронхиальным эпителием. [c.214]

Наиболее трудной задачей является получение стерильного растительного материала. Вид стерилизующего агента, его концентрацию и время действия, зависящие от особенностей тканей исходных растений, необходимо подобрать таким образом, чтобы убить микроорганизмы и не повредить ткани эксплантата. Для поверхностной стерилизации растительных объектов применяют химические соединения, содержащие активный хлор (гипохлорит натрия — Г— 1.4%, гипохлорит кальция — 7—10%, хлорамин — 2—10%) или ртуть (сулема 0.1 %, диацид), перекись водорода (2—10 %), этиловый спирт (96 или 70 %) и др. Эффективность стерилизации повышается при добавлении на 1 л стерилизующего агента 5—6 капель Твин-80 или Твин-20. [c.237]

Человеческие фибробласты in vitro сохраняют онтогенетические и генотипические свойства донора, в связи с чем широко используются для диагностики многих наследственных болезней. В обзоре описаны источники для получения культур, взятие биопсии, получение эксплантата, культивирование клеток, способы пересевов, криокоисервация клеток. Библиогр. 10 иазв. [c.318]

Смотреть страницы где упоминается термин Эксплантаты получение: [c.266] [c.54] [c.104] [c.54] [c.34] [c.183] [c.27] [c.36] [c.120] [c.136] [c.178] [c.182] [c.183] [c.228] [c.233] [c.258] [c.9] [c.49] [c.84] [c.239] [c.240] [c.258] [c.266]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология