ферментные каналы

Иммуноанализ на основе ферментных каналов [c.114]

Процесс можно направить по ферментному каналу , если два или несколько ферментов, катализирующих последовательные реакции, поместить в микросреду, отличающуюся из-за ограниченной диффузии более высокой, чем в основной части фазы, локальной концентрацией продукта 1. Продукт 2 образуется при этом быстрее, чем в случае, когда ферменты находятся в растворе в свободном состоянии или когда в микросреду помещен только один фермент. [c.114]

Протекание реакции по ферментному каналу основано на ограниченной диффузии в агарозных гранулах. Эффективность работы канала можно выразить через вероятность того, что молекула глюкозо-6-фосфата, образовавшаяся внутри гранулы, прореагирует с глюкозо-6-фосфат—дегидрогеназой раньше, чем покинет гранулу. Наибольшая эффективность (0,65), близкая к теоретическому максимуму (1,0), достигается при использовании крупных гранул 20 мкм в диаметре). [c.117]

Определение IgG человека (рис. 8-11) хорошо иллюстрирует возможности гомогенного иммуноанализа на основе ферментных каналов — удобного и чувствительного метода, не требующего разделения компонентов. Однако ограничения, связанные с практическим осуществлением анализа, не позволяют использовать его в клинике. В частности, необходимость применения крупных гранул для обеспечения высокой эффективности ферментного канала противоречит требованию о добавлении постоянного количества агарозного реагента, поскольку в случае крупных гранул удовлетворить этому требованию трудно. [c.117]

В этой главе описаны типичные методы иммуноанализа с применением индикаторных полосок, разработанные в нашей лаборатории. Все методы объединяет использование системы детектирования на основе ферментных каналов и применение в качестве иммунореактивного носителя листов целлюлозы. Более подробную информацию об условиях экспериментов и эксплуа- [c.130]

ДОЛЖНЫ требовать от оператора специальной подготовки и тщательных манипуляций. Ниже мы опишем индикаторные полоски для определения морфия с использованием ферментных каналов и новой системы внутреннего стандарта, компенсирующей внешние факторы. [c.136]

Система детектирования на основе ферментных каналов позволяет обойтись без разделения свободных и связанных молекул конъюгата и без стадии промывания. Биологические жидкости (мочу, слюну) можно анализировать без предварительной обработки и разбавления. [c.137]

В Исследовательском институте Syva разработаны два типа гомогенных методов иммуноферментного анализа для высокомолекулярных веществ. Методы первого типа связаны с применением -галактозидазы и макромолекулярного субстрата (Gibbons et al., 1980). Методы второго типа основаны на использовании ферментных каналов (Litman et al., 1980) с участием двух или большего числа ферментов. В этой главе мы рассмотрим принципы, особенности, ход выполнения и клинические приложения методов обоих типов. [c.103]

В иммуноанализе на основе ферментных каналов используют два фермента, катализирующих последовательные реакции, причем продукт реакции с участием первого фермента служит субстратом для второго (рис. 10-1). Эффективность катализа сопряженных реакций максимальна, когда молекулы обоих ферментов находятся в непосредственной близости на поверхности твердых частиц или в составе молекулярных агрегатов (Mosba h, Mattiason, 1970). В этом случае благодаря высокой локальной концентрации промежуточного продукта второй фермент работает с большим числом оборотов. Мы использовали пару ферментов, составленную из глюкозооксидазы и пероксидазы. [c.131]

Существуют различные варианты иммуноанализа на основе ферментных каналов , но все они основаны на том, что в результате иммунологического связывания один из участников сопряженной пары (как правило, второй фермейт) попадает в микросреду, содержащую комплементарный фермент. Катализ эффективен только в том случае, когда молекулы двух ферментов находятся в близком контакте. Несвязавшийся конъюгат, содержащий второй фермент, вносит пренебрежимо малый вклад в аналитический сигнал, так как концентрация промежуточного продукта в растворе очень низка. Следовательно, нет необходимости в разделении связанных и свободных компонентов реакционной смеси. Особенности детектирования с помощью сопряженных ферментативных реакций обсуждены в обзоре Ал-мана и др. (Ullman et al., 1983), а применение метода для определения белков рассмотрено в данной книге (гл. 8). [c.132]