Агарозные гранулы

В качестве альтернативы агарозным блок-вставкам могут выступить агарозные гранулы. Для их получения клеточную суспензию в агарозе по каплям добавляют в масло с одновременным перемешиванием (встряхиванием) [13]. Размеры гранул контролируются скоростью перемешивания. С образцами ДНК в гранулах можно обращаться так же, как с растворенными. Однако мы предпочитаем использовать агарозные вставки, так как с ними проще работать (см. ниже). [c.60]

Протекание реакции по ферментному каналу основано на ограниченной диффузии в агарозных гранулах. Эффективность работы канала можно выразить через вероятность того, что молекула глюкозо-6-фосфата, образовавшаяся внутри гранулы, прореагирует с глюкозо-6-фосфат—дегидрогеназой раньше, чем покинет гранулу. Наибольшая эффективность (0,65), близкая к теоретическому максимуму (1,0), достигается при использовании крупных гранул 20 мкм в диаметре). [c.117]

Большинство гелей, в частности агарозных, плохо выдерживает воздействие 6 М раствора гуанидинхлорида. Скорость течения падает, гранулы начинают лопаться, и колонка скоро выходит из строя. К этому надо добавить, что 6 М раствор гуанидинхлорида обладает заметной вязкостью, что заставляет повышать давление, подаваемое па колонку. [c.153]

Определение IgG человека (рис. 8-11) хорошо иллюстрирует возможности гомогенного иммуноанализа на основе ферментных каналов — удобного и чувствительного метода, не требующего разделения компонентов. Однако ограничения, связанные с практическим осуществлением анализа, не позволяют использовать его в клинике. В частности, необходимость применения крупных гранул для обеспечения высокой эффективности ферментного канала противоречит требованию о добавлении постоянного количества агарозного реагента, поскольку в случае крупных гранул удовлетворить этому требованию трудно. [c.117]

Сефадекс (поперечно-сшитый декстран), который используется уже более 20 лет, будет и дальше использоваться, особенно при работе в промышленных масштабах, когда необходимо учитывать быстроту, стоимость и удобство выполнения опе- раций. Поперечно-сшитые полиакриламидные гранулы (биогели) также находят широкое применение и имеют сходные с сефадексом интервалы фракционирования. Для очень больших молекул белков, вплоть до агрегатов, приближающихся по размерам к вирусам, наиболее предпочтительны агарозные гели. Попытки ввести в белковую химию материалы на основе стекла с контролируемым размером пор не увенчались успехом из-за сорбции белка на его поверхности. Хотя эти трудности можно было бы преодолеть, преимущества стеклянных гранул, обусловленные их жесткостью, в значительной степени утратили свою ценность вследствие появления новых, более совершенных материалов. Основная проблема, связанная с использованием сефадекса и полиакриламида, заключается в мягкости их гранул даже очень слабое давление, в том числе осмотическое давление, возникающее в колонке во время хроматографиче- [c.200]

Молекулярно-ситовая хроматография. При данном виде хроматографии используется способность материалов с контролируемой пористостью сортировать и разделять компоненты смеси в соответствии с размерами и формой их молекул. Для осуществления процесса гель-хроматографии используются гели поперечно-емкостного декстрана (сефадексы и сефакрилы), поперечно-сшитые полиакриламидные гранулы (биогели), агарозные гели с выраженными в них цепями акриламидного полимера (ультрагели) и более жесткие поперечно-сшитые агарозы (СЬ-агарозы и сефакрилы-8), с помощью которых можно быстро разделить макромолекулы в соответствии с их размером. Степень удерживания растворенного вещества на колонке зависит от его способности проникать в поры геля. Поэтому при гель-фильтрации сначала выходят высокомолекулярные вещества, а затем вешества в порядке убывания их моле- [c.55]

Полиакрилам ид агарозные гели. Полужесткие гели для ГПХ в водных растворах, обладают высокой механической прочностью. Выдерживают высокие давления без разрушения гранул, что позволяет работать с высокой скоростью фильтрации. Разрешающая способность гелей выше, чем у сефадексов. [c.70]

Для определения распределения белка внутри гранул носителя готовят тонкие срезы носителя с прикрепленным ферментом, принимая меры предосторожности против нарушения структуры матрицы. Для этого гранулы носителя включают в 20 /о-ную желатину. Частицы геля выдерживают 5 ч при 37 °С в растворе желатины, затем смесь переносят в подходящий для этих целей небольшой контейнер и оставляют на несколько часов в холодильнике. Желатиновые блоки замерзают, их режут микротомом на образцы толщиной 10 мкм. Полученные срезы наносят на предметные стекла и покрывают тонкими покровными стеклами для предохранения от высыхания. С помощью флуоресцентного спектрофотометра записывают спектры поглощения и излучения флуоресцеинизотиоцианата меченной флуоресцеином аминопептидазы, как свободной, так и связанной с агарозным или декстрановым носителем. [c.255]

Самый простой способ обеспечения стабильности электрофоретических зон заключается в том, что в среду для электрофореза вводят вещества, образующие капиллярную структуру. Ан-тиконвекционные свойства такой системы весьма высоки, если площадь поперечного сечения капилляров достаточно мала, так как в канале круглого сечения скорость потока снижается пропорционально четвертой степени радиуса. В качестве поддерживающей среды чаще всего используются фильтровальная бумага, пленки из ацетата целлюлозы, колонки или блоки целлюлозного порошка, гранулированный крахмал или гранулы поливиниловых полимеров, а также агаровый, агарозный, крахмальный или полиакриламидный гели. Зональный электрофорез в поддерживающей среде имеет ряд важных преимуществ. При его проведении можно использовать какой-либо простой и сравнительно недорогой прибор и анализировать одновременно несколько различных препаратов. Процедуры визуализации зон и выделения фракций осуществляются довольно легко. Вещества, обладающие биологической активностью, можно выявить непосредственно на электрофореграммах. Метод легко приспособить как для крупномасштабного разделения веществ, так и для микроразделения. Удается достигнуть очень высокой разрешающей силы, особенно в среде, характеризующейся одновременно антикон векционными свойствами и эффектом молекулярного сита. [c.34]

Трудно представить себе биохимика, который не пользовался бы распределительной гель-хроматографией для фракционирования смеси молекул по их размерам. На рис. 12.14 схематически изображена одна гранула геля из тех, что используются в молекулярных ситах. Удобные в употреблении молекулярные сита с большими размерами пор, такие как сефадекс (сшитые поперечными сшивками полидекстраны) и биогель (сшитый поперечными сшивками полиакриламид), всегда имеются в свободной продаже. Для препаративных целей используются также гранулы из пористого стекла и агарозные гели. Применение подобных материалов дало в руки исследователей действенное средство для разделения смеси молекул на фракции, в которых молекулы имеют приблизительно одинаковые размеры. [c.294]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология