Полинуклеотиды гибридизация

Различия в высшей структуре нуклеиновых кислот легко обнаруживаются по гиперхромному эффекту после тепловой или химической денатурации или после химического или ферментативного гидролиза. Важную информацию можно также получить при помощи других аналитических методов о гетерогенности по мол. массам, химическом составе и размерах молекул — методами ультрацентрифугирования [19, 35], о соответствии (комплементарности) первичной последовательности в двух полинуклеотидах— методами гибридизации [36, 37], о размерах и [c.68]

Первый метод, известный обычно под названием гибридизация 2 , основан на следующем принципе. Если нагреть двухспиральный комплекс ДНК выше его температуры плавления и медленно охлаждать смесь полученных одноцепочечных полимеров в присутствии другого одноцепочечного полинуклеотида, наряду с восстановлением исходного комплекса происходит образование некоторого количества гибридного двухцепочечного комплекса, т. е. комплекса, в состав которого входят полинуклеотидные цепи, принадлежавшие ранее различным макромолекулам. Такой комплекс образуется тем в большей степени, чем больше в цепи добавленного полимера нуклеотидных последовательностей, [c.61]

Аффинная хроматография [27—31] представляет собой один из наиболее специфических методов выделения реакционноспособных соединений, в частности ферментов, и даже таких надмолекулярных агрегатов, как вирусы. Сорбентом в этом случае служит гель типа агарозы, к которому ковалентно присоединен подходящий лиганд, например субстрат фермента. Когда раствор, содержащий выделяемое вещество (скажем, фермент), пропускают через колонку с соответствующим образом приготовленным сорбентом, взаимодействие этого вещества с закрепленным на сорбенте лигандом (в данном случае фермента с субстратом) приводит к его удерживанию и, следовательно, к концентрированию. Поскольку сорбция носит обратимый характер, это вещество можно затем элюировать с колонки. Один из вариантов этого приема, который, строго говоря, уже не относится к области хроматографии, заключается в том, что иммобилизованный на геле фермент служит для непрерывного превращения растворенного в подвижной фазе субстрата. Разделение по методу аффинной хроматографии может быть основано на различного рода специфических взаимодействиях, таких, как связывание фермента с ингибитором, гормона с рецептором, антигена с антителом, а также гибридизация полинуклеотидов. Этот метод позволяет выделять даже целые клетки. [c.21]

Гибридизация одноцепочечных полинуклеотидов [c.525]

Гибридизация одноцепочечных полинуклеотидов 525 [c.581]

С практической точки зрения важна реакция иодирования нуклеиновых кислот в водных растворах. При действии 1 или 1 -ионов в присутствии треххлористого таллия СТ1С1 ) на одиоцепочечные ДНК преимущественно иодируется цитозин, образуя 5-иодопроиз-водные. При реакции с РНК наряду с 5-иодцитозином образуется 5 иодо-6-гидрокси-5,6-дигидроурацил. При использовании радиоактивного 4 удается получить меченые полинуклеотиды с высокой удельной активностью, которые применяются в опытах по гибридизации. [c.387]

Нагревание полинуклеотида LII при температуре несколько ниже температуры плавления и последующее медленное охлаждение приводит к образованию циклической структуры LIII за счет нековалентного взаимодействия комплементарных липких концов . Такая структура может быть обнаружена с помощью электронной микроскопии. Этот прием был использован для доказательства того, что концевые участки полинуклеотидных цепей ДНК фагов ТЗ и Т7 имеют одинаковую последовательность. Пользуясь сочетанием гибридизации и циклизации , можно различить вирусные ДНК, содержащие уникальную последовательность нуклеотидов и представляющие набор циклически переставленных фрагментов 74 (см. стр. 32). [c.63]

Если одноцепочечный полинуклеотид с последовательностью АОСТААСОООА смешать в условиях гибридизации с другим, с последовательностью ТССАТТАОТСАТОСССТ какой тип молекулы при этом получится Предположим, что второй полинуклеотид имеет последовательность ТССАТТАСТАСТССССТ Нарисуйте структуру образующегося комплекса. [c.27]

Эта методика теперь редко используется, но одно время она была настолько распространена, что заслуживает краткого упоминания. При приготовлении гибридов ДНК—РНК учитывали тот факт, что в случае полинуклеотидов с приблизительно 50%-ным G- -составом плотности ДНК и РНК в s l отличаются приблизительно на 0,1 г/см (очень большое различие). Следовательно, денатурированную и ренатурироваиную смеси можно было центрифугировать до достижения равновесия в растворе s l и обнаружить гибридизацию по появлению полосы при соответствующей плотности. Для гибридов ДНК—ДНК, содержащих ДНК из одного и того же вида организмов, обычно используют различия в плотности между ДНК, меченной N, Н или С, и ДНК, содержащей только N, Н и С. Если бы ДНК были из различных организмов и имели различный G- -состав, характерные для этих ДНК плотности были бы неодинаковы и гибрид можно было бы обнаружить по появлению полосы, указывающей на ДНК с промежуточной плотностью (рис. 18-6). Отметим, что при использовании этой методики, гибридизацию ДНК проводят в растворе. [c.527]

Для мечения очищенных молекул ДНК радиоизотопами широко используются два метода. В пфвом случае в молекулу ДНК с помощью ДНК-полимеразы I Е соИ вводят радиоактивно меченные нуклеотиды (рис. 4-65, А). При этом получают радиоактивные ДНК-зонды , используемые в реакциях гибридизации нуклеиновых кислот (см. ниже). Во втором методе ффмент полинуклеотид киназа из бактериофага используется для пфеноса отдельных фосфатов, меченных Р, с АТР на 5 -конец каждой из цепей ДНК (рис. 4-65, Б). Поскольку каждая из цепей ДНК метится с помощью киназы только одним атомом Р, молекулы ДНК обычно недостаточно радиоактивны, чтобы использоваться в качестве зондов ДНК однако то, что помеченными цепи ДНК оказываются только по одному концу, делает их очень удобными для секвенирования и футпринтирования , что будет обсуждаться ниже. [c.233]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология