Р a б о т a 54. Получение препарата сахарозы из дрожжей

Идея фермент-субстратного комплекса приобрела чисто кинетический смысл благодаря работе Брауна [22]. Как и ряд других исследователей, Браун установил, что скорости ферментативных реакций не соответствуют скоростям реакций второго порядка. Прежде всего он показал, что скорость гидролиза сахарозы при брожении, осуществляемом живыми дрожжами, не зависит от концентрации сахарозы. Противоречию между результатами Брауна, полученными с живыми дрожжами, и результатами О Сул-. дивана и Томпсона для выделенного препарата инвертазы не придавали особого значения, поскольку считалось, что катализ изолированными ферментами принципиально отличается от брожения, осуществляемого живыми организмами. Однако открытие Бухнера [24], показавшего, что бесклеточный (т.е. неживой) экстракт дрожжей может катализировать спиртовое брожение, заставило Брауна [23 ] проверить свои более ранние результаты. Убедившись прежде всего в том, что они корректны, Браун показал, что аналогичные данные можно получить и дЯя очищенной инвертазы. На основании этого он сделал предположение, что если имеет место механизм с образованием, фермент-субстратного комплекса, то скорость реакции не может превышать некоторого предельного значения. При условии, что до своего каталитического распада комплекс существует в течение какого-то промежутка времени, скорость должна достигать максимального значения при такой концентрации субстрата, которой в соответствии с законом действующих масс достаточно, чтобы перевести весь фермент в комплекс. При меньших концентрациях субстрата существенное значение приобретает скорость образования комплекса, и поэтому скорость гидролиза будет зависеть от концентрации субстрата. [c.32]

Интересны обстоятельства, при которых братья Бухнер открыли бесклеточное спиртовое брожение. С давних пор дрожжи получили применение в медицине как продукт, усиливающий процессы обмена веществ в организме человека. Однако живые дрожжи не могут употребляться человеком в больших количествах, так как они вызывают усиленное брожение в кишечнике. В связи с этим предпринимались попыткн получения препаратов из дрожжей, в которых отсутствовали бы живые клетки (зими-нов). Братья Бухнер предприняли попытку получить для медицинских целей препарат из дрожжевого сока, свободного от живых клеток. Работая в этом направлении, они обратили внимание на тот факт, что дрожжевой сок, свободный от клеток, сбраживает прибавленную к нему сахарозу. Дальнейшие исследования привели их к заключению [c.278]

Лайнен [38] установил, что лучшим источником активной уксусной кислоты является водный экстракт дрожжей. Перед экстракцией дрожжи суспендируют в водном растворе глюкозы или сахарозы, поддерживая слегка щелочную реакцию добавлением бикарбоната натрия. В полученную суспензию в течение 15 мин пропускают ток кислорода при 30°. Такая методика обеспечивает максимальное продуцирование активной уксусной кислоты . Затем суспензию порциями добавляют к сильно перемешиваемой кипящей воде, содержащей уксусную кислоту в количестве, достаточном для нейтрализации бикарбоната натрия при этом температура не должна опускаться ниже 70—80°. После окончания прибавления смесь быстро нагревают до кипения и также быстро охлаждают до 10°. Затем удаляют центрифугированием твердое вещество. Из 750 г дрожжей получают около 1690 мл прозрачного желтого экстракта. Чтобы избежать потерь активной уксусной кислоты , экстракт нельзя выдерживать при 100° дольше, чем это необходимо. Теперь уже можно употреблять название ацетильное производное кофермента А , а не активная уксусная кислота . Приблизительное представление об относительных концентрациях этого вещества в различных препаратах можно получить, используя фиолетовое окрашивание, появляющееся при добавлении к нил аммиачного раствора нитропруссида натрия. Появление окраски объясняется предварительным гидролизом КЗСОСНз до тиола ДЗН (окраска появляется приблизительно через 1 мин). Добавление твердого сульфата аммония увеличивает чувствительность реакции и устойчивость окраски. Общий объем пробы должен составлять 0,09 мл, а емкость пробирки, в которой эта проба проводится, — 0,9 мл. В указанных условиях легко обнаруживаются количества ацетильного производного кофермента А, превышающие 2 . Тиолы, конечно, мешают проведению этой пробы их можно удалять окислением спиртовым раствором иода до дисульфидов, которые инертны в условиях опыта. Присутствие дисульфидов в экстракте из дрожжей можно обнаружить, добавляя к аммиачному раствору (до прибавления нитропруссида) цианистый калий. При этом образуется тиол. Реакция протекает следующим образом [c.269]

При дальнейшей работе были использованы диализованные препараты из картофеля в смеси с фруктозой и УДФГ, полученной из дрожжей 18]. Скорость синтеза сахарозы измеряли колориметрически по окрашиванию резорцином в кислой среде после предварительного разрушения фруктозы щелочью [9]. Интенсивность синтеза сахарозы в клубнях составляет около 1 мкМ на 1 г в 1 час или около 0,06 мкМ на 1 мг белка. Сопоставление с литературными данными показывает, что синтез сахарозы в клубнях протекает слабее, чем во многих растениях. Так, по сравнению с ростками гороха этот процесс в клубнях слабее в 5 раз, по сравнению с корнями сахарного тростника — в 50—60 раз. Незначительная интенсивность синтеза сахарозы в клубнях вполне понятна, так как синтетические процессы в хранящихся клубнях сильно замедлены. [c.232]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология