Количественная оценка электрофореграммы

B. Из-за образования хвостов белковые фракции, полученные при электрофорезе, нельзя считать чистыми, так как они могут содержать следы других фракций. Образование хвостов снижает точность количественной оценки электрофореграмм и значительно затрудняет анализ малых количеств белка. В последнем случае рекомендуется проводить электрофорез исследуемого белка в смеси с другим белковым раствором. Например, можно смешать раствор альбумина низкой концентрации с сывороткой и провести электрофорез этой смеси и отдельно сыворотки на двух соседних полосках. Разница между содержанием альбумина на двух полосках будет соответствовать его концентрации в исследуемом растворе. [c.54]

Работа 165. Количественная оценка электрофореграммы [c.231]

Автоматические денситометры используются при таксономическом исследовании микроорганизмов (с использованием электрофоретических методов анализа), которые характеризуются большим объемом информации, требующей быстрой и точной интерпретации. Достоверность количественной оценки электрофореграмм, получаемой с помощью автоматических денситометров, определяется интеллектуальными способностями вычислительной системы, сопряженной с анализатором. Роль вычислительных устройств в системах обработки могут играть различные варианты интеграторов, микропроцессоры и ЭВМ. [c.76]

Наиболее гибким, обладающим широкими возможностями при количественной обработке электрофоретических спектров является такой комплекс аппаратуры, который образует с денситометром многоуровневую вычислительную систему. В свою очередь многоуровневая система денситометр—ЭВМ с соответствующим периферийным оборудованием и программным обеспечением дает возможность организовать автоматизированное рабочее место (рис. 22, см. цв. вклейку), позволяющее исследователю использовать различные варианты алгоритмов для получения количественной оценки состава электрофоретических спектров и их комплексов. Создание комплекса технических средств и математического обеспечения автоматизированного рабочего места (АРМа) для обработки электрофореграмм подразумевает реализацию следующих функциональных возможностей вычислительной системы [c.76]

Представляя для печати результаты, полученные при определении чистоты ферментного препарата с помощью гель-электрофореза, важно дать какую-то количественную оценку содержания всех присутствующих в нем примесей. Заявление, что образец дал одну полосу при электрофорезе , неубедительно, если количество нанесенного на гель белка было настолько мало, что получилась только одна слабо окрашенная зона. Желательно также представить какое-то подтверждение того, что окрашенная полоса — это действительно данный фермент, а не присутствующий в препарате другой белок, который в количественном отношении даже превосходит исследуемый фермент. В литературе часто встречаются примеры того, как совершенно ошибочно основная полоса, полученная при электрофорезе, без всяких доказательств приписывается очищенному ферменту, хотя на самом деле она относится к примеси. Если удельная активность выделенного препарата слишком низка, то количество данного фермента в нем может составлять всего лишь 1% общего содержания белка, и при гель-электрофорезе его вряд ли можно заметить. В этом случае могут помочь фотографии электрофореграмм, хотя на них обычно плохо воспроизводится картина распределения окраски по относительной интенсивности. Более надежные в этом смысле результаты дает сканирование окрашенного геля (рис. 9.7). При этом единственная оговорка, которую можно сделать, касается относительной интенсивности специфической окраски различных обнаруженных компонентов. Исходя из предположения, что все белки окрашиваются одинаково, можно произвести точное количественное определение всех компонентов, используя гель-сканирующее устройство. [c.329]

Окрашенный гель из трубки можно сканировать в специальном приборе или с помощью приставки, которой комплектуются сейчас многие продажные спектрофотометры. Не следует, впрочем, слишком полагаться на соотношение размеров пиков такой электрофореграммы при оценке количественного соотношения белков в полосах, так как связывание красителя зависит не только от концентрации, но и от химического состава и конформации белка. [c.92]

Повторное разделение одного и того же материала дает разные результаты. Причина плохой воспроизводимости может заключаться в изменении условий опыта. Чтобы сделать условия опыта стандартными а) необходимо помнить, что фильтровальная бумага должна быть одного и того же типа б) необходимо стандартизовать факторы, влияющие на электрофорез (направление потоков буферного раствора, температура и т. п.) (см. стр. 52) в) краситель должен быть одним и тем же г) не следует менять способа количественной оценки электрофореграмм. При использовании метода элюирования мы советуем окрашивать белки кислым фуксином. Несвязавшаяся с белком часть этого красителя легко удаляется из бумаги, а связавшийся краситель затем легко элюируется. С другой стороны, при фотоэлектрометрии электрофореграмм очень удобно применять окрашивание амидовым черным 10В, так как он прочнее других красителей связывается с белками и примерно в 10 раз сильнее поглощает свет. Несмотря на то что при отмывании электрофореграмм амидовый черный невозможно полностью удалить из бумаги, фотоэлектрические измерения после окрашивания этим красителем достаточно точны. [c.66]

Белки после электрофореза на бумаге или ацетате целлюлозы окрашивают также бромкрезоловым зеленым (0,2%-ный раствор в этаноле, содержащем 2% ледяной уксусной кислоты). Обесцвечивание фона проводят в 2%-ной уксусной кислоте. После обесцвечивания и высушивания электрофореграммы помещают в пары аммиака. Синняя окраска медленно исчезает [336]. Уэбстер и др., [1381] исследовали возможность применения этого красителя для определения сывороточного альбумина после электрофореза на ацетате целлюлозы. Для количественной оценки окрашенную зону альбумина элюируют 3%-ным (объем/объем) раствором детергента Teepol 610. Элюция занимает всего несколько минут. Количество альбумина определяют по оптической плотности при 520 им. Было изучено также взаимодействие выделенных фракций глобулинов сыворотки с бромкрезоловым зеленым, [1381]. [c.272]

Радиоавтографы электрофореграмм можно представить графически, использовав денситометр с записывающим устройством. Следует выбирать такое время экспозиции, при котором высота пиков на денситограмме линейно зависит от радиоактивности белковых полос. Для количественной оценки радиоавтографов необходим денситометр, снабженный интегратором площади пиков на денситограмме можно также определить либо триангуляцией, либо вырезая отдельные пики и взвешивая их. [c.111]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология