Обесцвечивание фона

Нафтохинон-4-сульфонат (реагент Фолина). Хроматограмму опрыскивают 0,5%-ным раствором ( -нафтохинон-4-сульфоната, доведенным до pH 9,2-9,4 тетраборатом натрия. Прогревают в течение 10 мин при 100°С. Пантотеновая кислота дает интенсивное желтое пятно Р-аланин- красновато-оранжевое. Выдерживают на свету в течение нескольких часов до обесцвечивания фона. [c.425]

Раствор 0,025—0,5%-ный в 96%-ном этаноле. Розовато-лиловые пятна на розовом фоне видны также в УФ-свете (366 нм). Усиление окраски пятен с одновременным обесцвечиванием фона достигается при экспозиции хроматограммы в парах брома. [c.375]

Родамин В. 50 мг красителя растворяют в 100 мл этанола. Реагент дает розовато-лиловые пятна на розовом фон с большим числом органических веществ. Окраску пятен усиливают, обдувая пластинку парами брома до обесцвечивания фона. При рассмотрении пластинки в длинноволновом ультрафиолетовом свете видны оранжевые флуоресцентные пятна на темном фоне. [c.159]

Пластинку помещают в хроматографическую камеру, предварительно заполненную смесью н-гексана и ацетона (20 3). Растворитель наливают в таком количестве, чтобы поставленная вертикально пластинка была погружена в него на 0,5 см. После того как растворитель поднимется по слою сорбента на 10 см (фронт растворителя), пластинку вынимают из камеры, дают улетучиться его следам и обрабатывают бромфеноловым реактивом. Влажные пластинки помещают в сушильный шкаф на 10—15 мин при 60 °С. После охлаждения обрабатывают пластинки 5% раствором уксусной кислоты для обесцвечивания фона. Базудин проявляется в виде пятна синего цвета с Rf = -0,55. [c.173]

Перед хроматографированием новой партии пластинок заливают свежий подвижный растворитель. После того как фронт растворителя достигнет уровня 10 см, пластинку вынимают, сушат и опрыскивают ацетатом ртути, а затем раствором дифенилкарбазона. Для обесцвечивания фона пластинки нагревают в сушильном шкафу в течение 15—20 мин при температуре ПО—120°С. При долгом нагревании пятна препаратов могут исчезнуть. Препараты проявляются в [c.146]

Подвижным растворителем служит смесь н-Гексана и ацетона в отношении 4 1. Пятна фосфорорганических препаратов обнаруживаются после опрыскивания пластинок смесью растворов азотнокислого серебра и бром-тимолового синего в ацетоне с последующим обесцвечиванием фона уксусной кислотой. [c.179]

Третий метод основан на том, что хроматограммы опускают в раствор нитрата серебра в ацетоне (1 мл насыщенного водного раствора нитрата серебра разбавляют 100 мл ацетона). Высушенные хроматограммы обрабатывают в растворе едкого натра в метаноле и, после появления пятен, промывают в воде. Для обесцвечивания фона проводят обработку 6 н. раствором аммиака [1360, 1361]. Предложен также 0,1 М раствор нитрата серебра в 0,2 М аммиаке [1362, 1363]. Этот метод позволяет выявить 1 у пенициллинов и 0,6 у 6-АПК. [c.220]

Одну каплю мочи наносят на бумагу и высушивают при комнатной темперагуре. Лист бумаги помешают в раствор толуидинового синего на 1 мин. Обесцвечивание фона достигается последующим погружением бумаги в 10% раствор уксусной кислоты. [c.472]

Обесцвечивание. При окрашивании гелей по описанной выше методике фон остается прозрачным и не требует обесцвечивания. Однако во многих случаях после окрашивания необходимо проводить обесцвечивание фона. Это можно делать либо с помощью электрофореза, либо путем выщелачивания избытка красителя. Электрофоретическое обесцвечивание возможно в том случае, если краситель прочно связывается с белком, иначе некоторые полосы могут исчезнуть. Кроме того, для этих целей необходимо специальное приспособление. Тем не менее этот способ отличается быстротой и дает более светлый фон. [c.269]

Продолжительность самого фокусирования в геле обычно меньше, чем в растворе с градиентом плотности, однако много времени занимают последующие процедуры, а именно фиксация и окрашивание белков, обесцвечивание фона, денситометрия или фотографирование полученных полос и, наконец, измерение градиента pH. Последняя процедура сложнее и менее точна, чем П ри ИЭФ в растворе. [c.147]

Самым быстрым методом обесцвечивания фона является электрофоретическое удаление несвязанного красителя. В одном из его вариантов молекулы красителя перемещаются в том же направлении, в котором ранее двигались макромолекулы в процессе их разделения. Такое продольное обесцвечивание [281, 1034] проводят следующим образом. Окрашенные цилиндрические гели помещают в стеклянные трубки, внутренний диаметр которых несколько больше, чем диаметр самих гелей. Свободное пространство между гелем и стенкой трубки заполняют свежим гелеобразующим раствором. После его застывания трубки вставляют в обычный аппарат для диск-электрофореза и проводят электрофорез до тех пор, пока фон не станет светлым. Аналогичные результаты удается получить и без заключения окрашенного столбика в новый гель. Достаточно просто вставить его в стеклянную трубку, у которой дно затянуто диализной мембраной или закрыто пробкой из геля, а пространство между [c.188]

Гели можно окрашивать амидовым черным, растворенным в 7%-ном водном растворе уксусной кислоты этот же растворитель используют и для обесцвечивания фона. Часто для окрашивания применяют растворитель, состоящий из воды, метанола и уксусной кислоты в соотношении 5 5 1 (объем/объем). В такой смеси происходит некоторая дегидратация полиакриламидных гелей, что приводит к их сжиманию. Оптимальное время окрашивания зависит от размеров и формы геля, а также от его концентрации. Окрашивание можно ускорить, повышая тем- [c.266]

Кумасси яркий синий растворяют также в смеси метанол — уксусная кислота — вода (5 1 5 ли 1 1 8 по объему). Для обесцвечивания фона используют тот же растворитель [107]. [c.269]

Обесцвечивание фона можно проводить путем четырехкратного промывания гелей 0,05%-ной уксусной кислотой. Другие авторы 478] применяли для окрашивания белков после изотахофореза раствор, содержащий 50 мг хлористой ртути и 0,5 г бромфенолового синего в 500 мл 50%-ного водного этанола. Для обесцвечивания гели вымачивали в 30%-ном этаноле и 5%-ной уксусной кислоте [478]. [c.271]

Марганец связывают в цианидный комплекс таким же образом, как Zn, Ni и Со, однако обесцвечивание фона раствором НзВОз требует примерно 10 мин. Открываетй минимум 0,6 -f In. Предельное отношение In Мп = 1 550. В присутствии трехвалентного хрома лак индия распределяется по всему пятну и чувствительность открытия индия понижается. Этот недостаток можно устранить следующим образом на реактивную бумагу сначала помещают 1 каплю 0,5 н. NaOH или КОН и только потом в центр пятна помещают испытуемый раствор. При этом 1п(0Н)з образует красочный лак с ализарином, а образовавшийся хромит перемещается к краям пятна. Пятно еще раз обрабатывают раствором щелочи, затем раствором НзВОз. Открываемый минимум 0,6 у In предельное отношение In Gr = 1 800. [c.143]

Исходный раствор иодоводородная кислота (d 1,5), насыщенная I,. Этот раствор разбавляют в десять раз водопроводной водой непосредственно перед использованием. Пропитывают бумагу. Промывают водопроводной водой до обесцвечивания фона. К числу функциональных групп, дающих реакцию с этим реагентом, относятся а,Р-ненасыщенные кетоны, 17-кетоны и гидроксильные группы у атома j в молекуле, содержащей метилкетон или а-кетольную боковую цепь на хроматограмме проявляются коричневые, оранжевые или синие пятна (8-20 мкг). [c.420]

Перманганат калия. Хроматограмму опрыскивают 0,2%-ным КМпО в 5%-ном растворе Na2 Oз. Промывают в воде до обесцвечивания фона. Кортикостероиды дают коричневую окраску. В реакцию вступают следующие группы ен-4-он-З, а-кетольная, триолы-17,20,21 (30-70 мкг). [c.420]

Методика. Электрофореграммы 10 мин обрабатывают реактивом (1), затем 10 мин промывают проточной водопроводной водой и на 2 мин погружают в дистиллированную воду. После этого их окрашивают реактивом (2) до тех пор, пока на бесцветном фоне не появятся красные зоны гликопротеидов. Как только фон электрофореграммы начнет розоветь, полоску следует быстро перенести в реактив (3), в котором она вся приобретет красный ивет. Примерно через 1—3 мин, когда окраска достигнет максимальной интенсивности, электрофореграммы на 5 мин погружают в реактив (4а), а затем в реактив (46), в котором происходит изменение цвета гликопротеиды становятся красновато-лиловыми, а фон обесцвечивается. Несколькими сменами реактива (46) добиваются полного обесцвечивания фона. После этого, чтобы удалить НС1, электрофореграммы вновь промывают реактивом (4а). В заключение их погружают в эфир и высушивают на воздухе. [c.60]

Модифицированный метод Хенкса. После приготовления мазка и фиксации его в пламени горелки на него в избытке наливают раствор карболового фуксина и выдерживают 5 мин. Затем краску сливают, заливают мазок 50%-м этанолом и сразу промывают мазок водой. Для обесцвечивания фона на мазок наносят 1 %-ю серную кислоту, после чего тщательно промывают мазок водой. Для контрастирования фона мазок докрашивают 2,5%-м метиленовым синим (в 95%-м этаноле) в течение ] мин. No ardia spp. и другие кислотоустойчивые грибы окрашиваются в бордово-красный цвет, фон — голубой. [c.315]

Исследуемый экстракт при помощи микропипетки наносят на линию старта хроматографической пластинки в одну точ1ку. Пробирку промывают 2—3 раза растворителем (порциями по-0,1 мл) и растворы наносят в ту же точку. Слева и оправа от пробы наносят свежеприготовленный стандартный раствор (100 мкг/мл) в количествах, соответствующих 1, 2, 3, 4 и б мкг бенлата. Пластинку помещают в хроматографическую камеру, куда предварительно наливают подвижную фазу. После тога как фронт растворителя поднимется на 10 см от линии старта, пластинку вынимают из камеры, сушат на воздухе до полного испарения растворителя и орошают бромфеноловым реактивом. Затем пластинку помещают в сушильный шкаф и высушивают 20 мин при 60—120°С. После охлаждения пластинку орошают 5% раствором уксусной кислоты (для обесцвечивания фона пластинки). [c.189]

Белки на бумажных электрофореграммах обычно фиксируют, высушивая последние при 100—120 °С, а затем бумагу погружают на 10 мин в ванночку с раствором, содержащем не более 1% красителя. Грассманн и Ханниг [468] предложили использовать насыщенный раствор амидового черного в смеси, состоящей из 9 частей метанола и 1 части уксусной кислоты. Обесцвечивание фона на электрофореграммах осуществляют, промывая их несколько раз той же смесью метанола и уксусной кислоты. Таким же способом обнаруживают белки и после электрофореза на ацетате целлюлозы, причем пленки можно сразу же погружать в раствор красителя для окрашивания вполне достаточно 5 мин. [c.266]

Денситометрическое определение всех классов соединений на основе использования обычных методов проявления хроматограмм недостаточно точно ввиду отсутствия единой для всех соединений пропорциональности оптической плотности и концентрации. Однако менее трудоемко. Исходя из этих положений, Д. И. Кузнецов и Л. И. Семенова [4] разработали методику денситометрического определения индивидуальных классов липидов, в том числе стеринов, на основе хроматографии в тонком слое силикагеля. Принцип метода заключается в том, что перед анализом к силикагелю добавляют краситель метиловый красный. Липиды проявляются в виде пурпурных пятен на розовом, а затем желтом фоне. После обесцвечивания фона парами аммиака хроматограмму фотографируют и затем фотокопии денсйтом трйрукЛ, сравнивая оптическую плотность изучаемых фракций с оптической плотностью стандарта. [c.213]

Методика определения фталофоса и фозалона в воде, рыбе и фозалона в кормах и мясе. Основные положения. Принцип метода. Метод основан на извлечении препаратов из пробы органическим растворителем, очистке экстрактов из исследуемых объектов с помощью колоночной хроматографии и перераспределения в несмещивающихся растворителях, концентрировании экстрактов и хроматографическом определении фталофоса и фозалона в тонком слое сорбента. Обнаружение препаратов на хроматограмме проводят после обработки пластинок бромфеноловым проявляющим реактивом с последующим обесцвечиванием фона раствором лимонной или уксусной кислоты. Обнаружение фозалона проводят также по хлориминфенолу, образующемуся после щелочного гидролиза препарата, путем опрыскивания хроматограммы растворами 4-аминоантипирина и феррицианида калия. [c.114]

Для зонного электрофореза ацетатцеллюлозную мембрану (САМ) первым использовал Кон [51]. По мнению Кона, преимущества этого носителя — его однородность и строго определенная пористость. САМ содержит пренебрежимо малое число ОН-групп, загрязненность органическими и неорганическими примесями также весьма мала. В тех случаях, когда сильная сорбция может приводить к образованию на бумаге полосок сзади зон (как, например, при электрофорезе биополимеров) важным преимуществом становится пониженная сорбционная активность САМ. В отличие от бумаги САМ позволяет получить хорошее разделение агфракции сывороточного альбумина, а также инсулина, фибриногена, гистонов, лизоцимов, глико- и липопротеинов и нуклеиновых кислот. После электрофореза меченых соединений остаточная радиоактивность между зонами и стартом исключительно мала. Обесцвечивание фона, если обнаружение проводится путем окрашивания и последующего обесцвечивания, происходит достаточно быстро. [c.293]

После того как фронт растворителя поднимется на 10 см, пластинку вынимают из камеры, дают растворителю испариться на воздухе и опрыскивают пластинку смесью растворов бромфеноло-вого синего и азотнокислого серебра в ацетоне. Затем пластинку выдерживают в сушильном шкафу при 35—40° С в течение 10 мин и опрыскивают раствором 5%-ной уксусной кислоты для обесцвечивания фона. Обработанную пластинку накрывают чистой стеклянной пластинкой для более длительного сохранения светлого фона. В присутствии указанных препаратов появляются синие пятна на светлом фоне. В таблице приведены значения величин R исследуемых препаратов. [c.29]

Методика. При детектировании фосфатов и фосфитов опрыскивают пластинку раствором а), высушивают и опрыскивают раствором б). При обнаружении фосфорорганя-ческпх пестицидов и других соединений, которые необходимо гидролизовать, опрыскивают сухую пластинку раствором в), покрывают стеклом, нагревают 30 мин при 180°С, опрыскивают раствором а) и снова нагревают 5 мин. Охлаждают, опрыскивают раствором б), помеш,ают в камеру, заполненную парами аммиака, и выдерживают до обесцвечивания фона. Вещества обнаруживаются в виде голубых пятен. [c.226]

Аркел и др. [146] анализировали мукополисахариды микро-электрофоретическим методом Виеме [147, 148]. Поскольку поступающий в продажу агар загрязнен красителями, по модифицированной [149] методике Араки [150] получают агар, не содержащий сульфата (агарозу). Электрофорез проводят в 0,9 %-ной агарозе с использованием барбитуратного буферного раствора с pH 8,6 при напряженности 20 В/см. Электрофоретическое разделение завершается примерно через 7 мин. После этого тонкослойные пластинки погружают на час в 0,1 %-ный раствор цетавлона, чтобы осадить мукополисахариды. Чтобы условия осаждения были оптимальными, Аркел и сотрудники рекомендуют использовать цетавлон в физиологических солевых растворах. Зоны разделенных соединений обнаруживают, окрашивая пластинки толуидиновым синим. С этой целью 40 мг красителя растворяют в смеси 20 мл дистиллированной воды и 80 мл сухого ацетона. Пластинки выдерживают в этой смеси 15 мин, после чего ополаскивают 1 %-ным раствором уксусной кислоты до обесцвечивания фона. Эти же авторы описали другой метод окрашивания, а также метод окрашивания белков и мукополисахаридов. [c.574]

Помимо создания условий для диффузии красителя в глубь волокна, зрельники необходимы в тех случаях, когда следует создать условия для протекания тех или иных реакций. Так, например, при печатании пигментом кубового красителя с соответствующим восстановителем и щелочным реагентом в зрель-нике происходит восстановление кубового красителя и образование растворимой натриевой соли лейкокислоты, способной диффундировать в глубь волокна. Или, например, после печатания вытравным составом по окрашенной ткани в условиях зрельника происходит химическая реакция между красителем, который нанесен на ткань, и соответствующим веществом, введенным в вытравную печатную краску, приводящая к обесцвечиванию фона. [c.230]

Райзнер и др. [1073] разработали очень простую и быструю методику окрашивания, не требующую обесцвечивания фона. Она основана на том, что кумаоси яркий синий 0-250 изменяет свой цвет в разбавленной хлорной кислоте и вновь приобретает исходную окраску при связывании с белками. Для приготовления окрашивающего раствора указанный краситель (конечная концентрация 0,04%) добавляют к 3,5%-ной хлорной кислоте, и эту омесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч. Полученный раствор фильтруют сначала через фильтровальную бумагу ватман № 1, а затем через миллипоровый фильтр с размером отверстий 0,45 мкм. Реактив сохраняется при ком натной температуре неограниченно долго. Гели инкубируют в нем 2 ч при 37 °С или 4 ч при комнатной температуре, после чего их хранят в пробирках, заполненных 0,04%-ны М pa твiapoм кумасси яркого синего 0-250 в 2,5%-ной хлорной кислоте. Данный реактив позволяет избирательно выявлять гистоны с высоким содержанием аргинина, так как гистоны,. богатые лизином, растворяются в хлорной кислоте. [c.157]

Фрейтер [398] испытал несколько окрашивающих реактивов для непосредственной визуализации белков шерсти. Хорошие результаты удалось получить оо смесью 0,05%-ных растворов кислотного прочного синего В и кумасси фиолетового К в 5%-ной уксусной кислоте. Быстрое обесцвечивание фона происходило при вымачивании гелей в 5%--ной уксусной кислоте. [c.157]

Поскольку кумасси яркий синий, растворенный в метаноле, в равной степени окрашивает белки и ацетат целлюлозы, было предложено использовать его водный раствор по следующей методике 1[367]. Белки фиксируют, погружая электрофореграммы на 1 мин в водный раствор сульфосалициловой кислоты (200 г/л). Затем их без промывания переносят на 5 мин в раствор кумасси яркого синего (2,5 на 1 л дистиллированной воды). Следует применять воду, свободную от тяжелых металлов, так как они мешают удалению красителя, связанного с ацетатом целлюлозы. Для обесцвечивания фона электрофореграммы четыре раза по 5 мин промывают дистиллированной водой. [c.268]

Другой способ количественного определения белков основан нэ элюции красителя из белковых зон после окрашивания и обесцвгечивания электрофореграмм в стандартных условиях. Феннер и др. [374] рашивали гели 0,5%-ным раствором кумасси яркого синего R-250 в 50%-ном водном метаноле, содержавшем 7,5% уксусной кислоты, по методу, который предложили Бикл и Траут [119]. После обесцвечивания фона окрашенные зоны вырезали и краситель экстрагировали из кусочков геля 25%-ным водный пиридином (объем/объем), встряхивая их при комнатной температуре до тех пор, пока не наступало равновесие, что определяли путем повторных измерений поглощения раствора. Пиридин смещает максимум поглощения красителя с 550 до 605 нм, поэтому измерение поглощения проводили при 605 нм. Этот метод позволяет определять белки в пределах 1 — 100 мкг. Он особенно полезен при двухмерном электрофорезе на пластинах геля, поскольку их сканирование представляет в настоящее время определенные технические трудности. [c.270]

Белки после электрофореза на бумаге или ацетате целлюлозы окрашивают также бромкрезоловым зеленым (0,2%-ный раствор в этаноле, содержащем 2% ледяной уксусной кислоты). Обесцвечивание фона проводят в 2%-ной уксусной кислоте. После обесцвечивания и высушивания электрофореграммы помещают в пары аммиака. Синняя окраска медленно исчезает [336]. Уэбстер и др., [1381] исследовали возможность применения этого красителя для определения сывороточного альбумина после электрофореза на ацетате целлюлозы. Для количественной оценки окрашенную зону альбумина элюируют 3%-ным (объем/объем) раствором детергента Teepol 610. Элюция занимает всего несколько минут. Количество альбумина определяют по оптической плотности при 520 им. Было изучено также взаимодействие выделенных фракций глобулинов сыворотки с бромкрезоловым зеленым, [1381]. [c.272]

Окрашивание белков быстрым зеленым F F (пищевой зеленый 3, .I. 42053), по-видимому, имеет преимущества при их количественной денситометрии в полиакриламидном геле [453]. Гели погружают на 2 ч в раствор, содержащий 1% (масса/ объем) быстрого зеленого в 7% -ной уксусной кислоте. Обесцвечивание фона проводят путем повторных промываний электрофореграмм 7%-ной уксусной кислотой. Для цилиндрических гелей диаметром 6 мм линейная зависимость между площадью пика на денситограмме и количеством нанесенного белка сохраняется вплоть до 150—200 мкг. Показано, что по своей чувствительности данный метод сравним с методами, основанными на использовании амидового черного. Он позволяет обнаруживать 1—3 мкг белка в одной полосе. Быстрый зеленый пригоден для количественного определения гистонов после их электрофореза в полиакриламидном геле [856]. [c.273]

Марцинка [815] сравнил несколько красителей, применяемых для выявления нуклеиновых кислот, и сделал вывод, что для окрашивания РНК лучше всего использовать следующий метод. В смеси уксусной кислоты, метанола и воды (1 1 8 по объему) растворяют 0,5% пиронина Y и 1% ацетата лантана. В этом растворе гели выдерживают в течение 16 ч. Обесцвечивание фона проводят путем электрофореза в смеси уксусной кислоты, метанола и воды (1 2 17 по объему) или повторными промываниями гелей в нескольких сменах той же смеси. Окрашенные гели можно хранить в разбавленной уксусной кислоте (3—10%-ной) в течение нескольких лет. Описанный метод позволяет обнаруживать 0,01 мкг РНК. В идентичных условиях толуидиновый синий дает менее чистый фон, а акридиновый оранжевый — менее интенсивную окраску. [c.385]

Пример электрофореза на пластинке градиентного геля представлен на рис. 5. Культуру Е. соИ в экспоненциальной фазе роста инфицировали диким типом и различными атЬег-ыутттамш бактериофага Т4 и метили С-аминокислотами в интервале от 3 до 8 мин после заражения. Распределение отдельных белков, кодируемых фагом, определяли на радиоавтографе после окрашивания геля и обесцвечивания фона. На пластинке видно четкое разделение полипептидов, молекулярные веса которых различаются всего лишь на 200—500 дальтон. [c.105]

Кумасси R-250 ( Sigma , США), 25% изопропанол, 10% уксусную кислоту. Для обесцвечивания фона гели переносили в раствор, содержащий 10% уксусную кислоту и 15% изопропанол и отмывают в течение нескольких часов. [c.57]

Препараты отмывают 0.15 М водным раствором Na l в течение пяти-семи суток с ежедневной сменой отмывающего раствора и высушивают. Окрашивают препараты водным раствором, содержащим 0.1 %> Кумасси R-250, 10%о этилового спирта и 7%) уксусной кислоты. Отмывка препаратов производится водным раствором, содержащим 25%> этилового спирта и 7%> уксусной кислоты до обесцвечивания фона (Рис. 20). [c.81]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология