Гидролиз хроматина

Нередко попытки ослабить один источник ошибки приводят к усилению другого. Например, в ряде случаев при определении содержания ДНК в ядре по Фельгену часть ее теряется при гидролизе за счет лабильной фракции, в то же время некоторая часть за счет, плотной упаковки в хроматине не дает реакцию Фельгена. Эту часть ДНК можно сделать доступной реактиву Шиффа, если гидролиз усилить. Но в этом случае увеличится потеря лабильной фракции. Наоборот, при кратковременном гидролизе сохраняется вся лабильная ДНК, зато увеличивается количество невыявленной, прочно связанной в хроматине ДНК. [c.129]

С другой стороны, при одном и том же способе фиксации различные ткани часто требуют гидролиза разной продолжительности. В нашей лаборатории многочисленными опытами было показано, что для получения максимальной реакции Фельгена ядра с компактным хроматином, богатым основными белками, например, у покоящихся клеток, требуют более длительного гидролиза, чем ядра с диспергированным хроматином, присущим обычно дифференцированным активно функционирующим клеткам [6], [7]. [c.142]

МИКРОКОККОВАЯ НУКЛЕАЗА. Эндонуклеаза, расщепляющая ДНК при обработке этим ферментом хроматина гидролиз ДНК происходит преимущественно между нуклеосомами. [c.523]

Технологический прием, положенный в основу получения природных нуклеопротеиновых комплексов, состоит в том, чтобы в условиях мягкого щелочного гидролиза клетки сохранить структурные элементы хроматина, в которых эндогенные регуляторные пептиды естественно объединены и связаны с соответствующими специфическими участками ДНК. Одновременно на стадии экстракции протекает частичный гидролиз линкерных участков ДНК сопутствующими эндогенными ДНКазами. Продукты такого гидролиза (олигомеры) отделяются на стадии осаждения НПК. [c.157]

Судьба нуклеосом при активации хроматина [154— 157]. Менее однозначным является вопрос о судьбе гистонов Н2а, Н2Ь, НЗ и Н4, формирующих сердцевину нуклеосомы. В вышеупомянутых опытах Ю. В. Козлова их присутствие практически не влияло на транскрипцию ДНК РНК-полимеразой из Е. соП. При изучении продуктов гидролиза хроматина эукариот многие авторы нашли, что нуклеосомы содержат ДНК активных генов, т. е. последние тоже организованы в нуклеосомы. Полученные на большом экспериментальном материале данные А. Д. Мирзабекова и сотр. показывают, что нуклеосомы, содержащие активно транскрибируемую ДНК, принципиально устроены так же, как и нуклеосомы, содержащие неактивную ДНК, хотя некоторые ДНК-гистоновые контакты в них изменяются. [c.150]

В одной из недавних работ [ aiafa et al., 1981) белки хроматина после частичного гидролиза микрококковой нуклеазой сорбировали на оксиапатите (в объеме) в 0,001 М К-фосфатном буфере (pH 7,2), [c.235]

Состояние ДНК в клеточном ядре является очень важным фактором, влияющим на реакцию Фельгена. Изучая зависимость интенсивности фельгеновской реакции от длительности гидролиза, мы установили, что по мере увеличения времени гидролиза в 1 н. НС1 при 60° в первую очередь на 3—5-й минутах реакция Фельгена проявляется за счет лабильной ДНК, т. е. ДНК, не упакованной в структурах хроматина. На 12—20-й минутах гидролиза для фуксинсернистой, кислоты становится доступной остальная часть ДНК, названная нами стабильной. [c.142]

Рис. 9-23. Строение нуклеосом. Нуклеосомные частицы состоят из двух полных витков ДНК (83 нуклеотидных пары на виток) закрученных вокруг кора, представляющего собой гистоновый октамер, и соединяются между собой линкерной ДНК. Нуклеосом-ная частица выделена из хроматина путем ограниченного гидролиза линкерных участков ДНК микрококковой нуклеазой. В каждой нуклеосомнои частице фрагмент двойной спирали ДНК, имеющий в длину 146 пар оснований, закручен вокруг гистонового кора. Этот белковый кор содержит по две молекулы каждого из гистонов Н2А, Н2В, НЗ и Н4. Полипептидные цепи гистонов насчитывают от 102 до 135 аминокислотных остатков, а общий вес октамера составляет приблизительно 100000 Да. В деконденсированной форме хроматина каждая бусина связана с соседней частицей нитевидным участком

Сравнение констант связывания природных нуклеопротеиновых комплексов показывает, что НПК мозга более чем в 1.5 раза интенсивнее связывается с клеточными мембранами клеток мозга по сравнению с НПК печени (гепата-мин). Наблюдаемая разница селективности связывания этих препаратов является одним из возможных механизмов реализации тканеспецифического воздействия НПК на физиологические функции. Разница коэффициентов связывания модельных НПК, включающих тканеспецифические пептиды, и природных НПК, вьщеленных из той же ткани, может быть связана с конформационными различиями ДНК, входящей в состав этих комплексов. Природные НПК содержат нативную ДНК, уже специфически связанную с регуляторными пептидами хроматина, а модельные НПК содержат высокоочищенные фрагменты двухцепочечной ДНК тимуса теленка, на которой не может быть сайтов для специфического связывания с регуляторными пептидами мозга. По-видимому, функция такой ДНК в модельных НПК сводится только к защите пептидных компонентов от ферментного гидролиза. [c.182]

Наряду с этой группой данных имеются исследования, в которых авторы приходят к несколько отличным выводам. В. Гаррард и А. Ворсел (США), изучая состояние активных геиов в хроматине с помощью нуклеазного гидролиза и с помощью электронной микроскопии, пришли к выводу о том, что нуклеосомы в активном хроматине остаются, но претерпевают структурные изменения типа разворота, превращаясь в полунуклеосомы. В результате на электро-фореграммах гидролизатов микрококковой нуклеазой периодичность 200 п. н. заменяется периодичностью 100 п. н. При электронной микроскопии число бусин удваивается, а их размеры уменьшаются. Предполагается, что РНК-полимераза может проходить через такие развернутые нуклеосомы. [c.152]

К сожалению, до настоящего времени отсутствуют хорошие методы разделения транскрипционно активного и неактивного хроматина и поэтому трудно приписать измененные формы гистонов тому или иному состоянию хроматина. Наиболее интересные данные в этом направлении были получены тем же В. Олфри (США). При гидролизе активного хроматина он выделил необычные частицы, которые седиментировали в сахарозном градиенте медленнее, чем обычные нуклеосомы, и, по мнению автора, соответствовали развернутым нуклеосомам. В этих частицах, названных А-частицами, присутствовали все сердцевинные гистоны. В отличие от нормальных нуклеосом 8Н-группы гистона НЗ в А-частицах были доступны для ряда химических реагентов, и благодаря этому А-частицы можно отделить от нуклеосом с помощью фракционирования на колонках с хлормеркурибензоатом (реагент, связывающий 8Н-группы). В А-частицах повышено содержание ацетили-рованных форм гистонов. Автор предполагает, что аце-тилирование гистонов при активации хроматина ведет к развороту нуклеосомных частиц, а это, в свою очередь, повышает доступность 8Н-групп гистона НЗ. [c.155]

HMG-белки имеют невысокую молекулярную массу. Они обогащены как основными, так и дикарбоновыми аминокислотами. Содержание HMG-белков составляет примерно /ю от содержания гистонов. В ядрах из разных типов клеток оно может варьировать. В данном контексте нас больше всего интересуют белки HMG-14 и HMG-17, для которых были получены данные о возможной роли в активации транскрипции. X. Вайнтрауб (США) показал, что экстракция ядер 0,35 М Na l, которая извлекает HMG-белки, меняет некоторые свойства активного хроматина, которые восстанавливаются при добавлении к хроматину HMG-14 и HMG-17. Г. Диксон (Канада) обнаружил эти белки в составе нуклеосом, освобождавшихся из хроматина на ранних этапах гидролиза нуклеазой, которые, по его данным, были обогащены ДНК тракстипционно активных генов. [c.157]

Третьей характерной особенностью активного хроматина является гиперчувствительность к ДНКазе I. Это явление заключается в раннем появлении под воздействием ДНКазы I двухцепочечных разрывов в строго определенных участках гена. ДНКаза I обычно вносит в ДНК одноцепочечные разрывы и поэтому появление двухцепочечных разрывов при переваривании свободной ДНК происходит лишь на поздних стадиях гидролиза. Здесь же такие разрывы появляются на ранних этапах переваривания хроматина. [c.165]

Интересно, что, как показал X. Вайнтрауб, в областях энхансеров ДНК в составе активного хроматина подвергается также атаке нуклеазой 51, которая обычно гидролизует только одноцепочечную ДНК- Эю указывает на наличие определенных нарушений в монотонной структуре ДНК в области энхансеров. Причины гиперчувстви- [c.165]

К выявлению таких белков существуют различные подходы. Один из них — это детекция белка, связывающегося с определенной областью ДНК непосредственно в хроматине. Для этого в регуляторную область хроматина вносят разрыв с помощью той или иной эндонуклеазы, например с помощью рестриктазы, и от этой точки начинают гидролизовать ДНК экзонуклеазой. В том месте, где находится белок, связанный с ДНК, переваривание экзонуклеазой прекращается или резко замедляется. Ход гидролиза экзонуклеазой определяется электрофоретически по изменению размеров рестриктных фрагментов, гибридизующихся с соответствующей пробой. Таким образом удается определить границы области, занятой на ДНК тем или иным белком. [c.167]

Смотреть страницы где упоминается термин Гидролиз хроматина: [c.119] [c.101] [c.243] [c.253] [c.702] [c.243] [c.253] [c.401] [c.445] [c.388] [c.160] [c.158] [c.160] [c.85] [c.87] [c.95] [c.159] [c.314] [c.113] [c.159] [c.163] [c.166] [c.130] [c.131]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология