Восходящая гель-хроматография

ВОСХОДЯЩАЯ ГЕЛЬ-ХРОМАТОГРАФИЯ [c.373]

Наиболее распространена нисходящая гель-хроматография, но часто применяют и восходящую. [c.362]

В разд. 6.3.4 указывалось, что при неполном разделении двух соединений посредством гель-хроматографии можно улучшить степень разделения, увеличив длину колонки. Однако работа с длинными колонками связана с рядом неудобств их сложно заполнять и элюирование приходится вести с очень малыми скоростями, особенно если колонка заполнена мягкими гелями. Однако последовательно соединяя две и большее число колонок, можно добиться увеличения эффективной длины колонки и тем самым лучшего разрешения. С этой целью выбирают несколько одинаковых плунжерных колонок, каждую из которых заполняют гелем независимо от других. После заполнения колонок гелем и фиксации заполняющих слоев плунжерами вывод из одной колонки соединяют с вводом в другую возможно более короткой и тонкой трубкой. Хроматографирование на такой составной колонке ведут восходящим методом (разд. 6.3.6). В такой составной колонке допустимы ббльшие скорости потока, чем в одной колонке, высота которой равна сумме высот соединенных колонок. [c.377]

По оформлению хроматографию можно подразделить на колоночную и тонкослойную. Колонки сорбента могут состоять из активированного угля, хроматографической окиси алю.миния, пермутита, силикагеля, целлюлозы, ионообменных смол (катиониты и аниониты). Разделяемая смесь перемещается в колонке или сверху вниз, или снизу вверх (нисходящая хроматография, восходящая хроматография). В качестве сорбента или носителя используют бумагу, тонкие слои окиси алюминия, силикагеля, геля желатина. Тонкослойная хроматография, впервые предложенная Н. А. Измайловым и М. С. Шрайбер (1937). [c.140]

При работе с сефадексами применяют как нисходящую, так и восходящую хроматографию. Для обнаружения результатов хроматографии разделяемые вещества переносят на лист хроматографической (бумаги путем контакта бумаги с поверхностью геля в течение обычно 1 мин. Затем бумагу сушат 30 мин при 80°С и обрабатывают соответствующими реагентами, например в случае белковых соединений 0,1%-ным раствором бромфенолового синего в смеси метанола и уксусной кислоты (9 1). Затем бумагу промывают водой, подкисленной уксусной кислотой. [c.112]

Тонкослойная хроматография осуществляется восходящим методом, тогда как в тонкослойной гель-проникающей хроматографии применяется нисходящий метод (рис. 8-7). Пластинку помещают в герметичную камеру, причем оба ее конца соединяют [c.205]

Для восходящего хроматографирования (см. разд. 6.3.6) нужны колонки специальной конструкции, в которых слой геля ограничен двумя плунжерами таким образом, чтобы объем мертвого пространства снизу и сверху колонки был минимальным. Колонки такого типа описали Порат и Беннич [43]. Хроматографические колонки различных размеров и типов, от аналитических и препаративных до пилотных, выпускают многие фирмы, специализирующиеся на производстве хроматографического оборудования. Колонки, выпускаемые фирмой Pharma ia Fine hemi als, специально предназначены для гель-хроматографии. [c.364]

Во многих случаях применения гель-фильтрации, например при обессоливании растворов, не требуется высокого разрешения, и, следовательно, для этих целей можно использовать самодельные или одноразовые ординарные колонки. Однако в ответственных случаях для успешного разделения веществ с помощью гель-фильтрации, как и во всех других видах хроматографии, нужна надлежащим образом сконструированная колонка и другое связанное с ней оборудование. Следует обратить внимание на то, что над слоем геля и под ним не должно быть значительного мертвого объема, в котором происходит смешивание протекающих через него растворов. При наличии такого объема искажается форма градиента и элюирующихся пиков, а также характер ступенчатого изменения состава элюента. В продаже имеются колонки, в которых фактически нет мертвого объема под слоем геля. В колонках другого типа мертвое пространство отсутствует как снизу, так и сверху хроматографического слоя благодаря тому, что эти колонки снабжены специальными приспособлениями для введения элюента и отбора элюата. Такие приспособления полезны также при проведении восходящей хроматографии. Не рекомендуется применять поддерживающие пластинки из пористого стекла, особенно в случае гелей с низкой степенью сшивки и высокой пористостью. [c.228]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология