Хроматография тонкослойная в гелях

В фармации наиболее широкое применение находят бумажная, тонкослойная, ионообменная хроматография и гель-хроматография. [c.352]

В книге, состоящей из 40 глав, основное место, естественно, уделяется описанию различных методов исследования полимеров. Представлены все методы определения молекулярных весов полимеров, их молекулярновесового распределения, обсуждаются разнообразные спектральные методы, применяющиеся для анализа строения и структуры гомо- и сополимеров УФ-, ИК-, КР-спектро-скопия, эмиссионная спектроскопия, спектроскопия ЯМР, масс-спектроскопия, спектроскопия ЭПР, нейтронное рассеяние, аннигиляция позитронов. Ряд глав посвящен хроматографическим методам, таким, как газовая и жидкостная хроматография, в том числе и при высоких давлениях, тонкослойная хроматография, ионообменная хроматография, ситовая хроматография, включая гель-про-никающую хроматографию, хроматография с обращением фаз. Методы анализа структуры полимеров обсуждаются при рассмотрении электронной микроскопии, рентгеноструктурного анализа, дифракции электронов и ряда других методов. Физические свойства полимеров оцениваются с помощью таких методов, как дилатометрия, определение температур плавления и стеклования полимеров, их электрических характеристик, анизотропии, диффузии и поверхностного натяжения. Представлены также методы исследования различных видов деструкции полимеров. [c.6]

Тонкослойная гель-проникающая хроматография находит применение в клинической диагностике для определения патологических белков в сыворотке крови, спинномозговой жидкости и моче. Конечно, метод используется и для проверки чистоты белков, ферментов и т. д. На основе этого метода разработаны такие модификации, как иммунодиффузия, иммуиоэлектрофорез и изо-электрическая фокусировка. [c.207]

Эластомеры обычно являются сложными смесями, содержащими один или более основных полимеров, пигменты и наполнители, пластификаторы, катализаторы полимеризации, антиоксиданты, стабилизаторы смазки, антистатики и т. д. Идентификация методом ИК-спектроскопии всех этих компонентов в высокомолекулярном эластомере маловероятна. Фактически эластомер, наполненный сажей, может быть настолько непрозрачным, что совсем не будет давать ИК-спектра в этом случае необходимо разделение. В различных публикациях рассмотрены анализы конкретных полимерных систем некоторые из них включены во всеобъемлющий обзор приложений ИК-спектроскопии в резиновой промышленности [114]. Для разделения компонентов в ходе подготовки к ИК-анализу часто применяют экстракцию растворителем и методы хроматографии, включая тонкослойную, гель-проникающую, колоночную и газовую. [c.202]

Для идентификации полимеров и полимерной основы композиций используются различные методы простые, основанные на физико-химических и физико-механических свойствах полимеров, химические, инструментальные. Наибольшее распространение из инструментальных методов получили ИК-спектроскопия, пиролитическая газовая хроматография, ЯМР-спектроскопия. Применяются газовая, тонкослойная, гель-проникающая хроматография, хромато-масс-спектроскопия, пиролитическая масс-спектроскопия, термический анализ, а также разнообразные комбинации этих и других методов. Инструментальные методы позволяют значительно сократить время анализа и снизить предел обнаружения ряда анализируемых компонентов [1—6]. [c.5]

Известно, что между логарифмом молекулярной массы белка, имеющего сферическую форму, и элюционным объемом существует прямая зависимость. Поэтому легко определить молекулярную массу исследуемого белка, зная его объем элюции. Второй разновидностью этого метода является тонкослойная гель-хроматография. Длина пробега белка (в миллиметрах) [c.45]

Для отделения летучих примесей от полимеров наиболее часто используются следующие методы экстракция, растворение с последующим осаждением полимера, термическая десорбция в потоке газа-носителя и т. п. Несомненно целесообразно использовать для отделения летучих компонентов и другие эффективные, в первую очередь хроматографические, методы разделения гель-хроматографию, тонкослойную и колоночную хроматографию. В связи с большой трудоемкостью и слон ностью многостадийных методов их целесообразно использовать в тех случаях, когда более простые методы не эффективны (например, вследствие термической нестабильности полимера), или для разовых, единичных определений, когда специальная разработка простого метода не оправдана. Исключение составляют, по-видимому, только методы, в которых предварительной стадией является не процесс разделения, а разбавление анализируемого раствора полимера или растворение твердого полимера. Этот простой прием позволяет свести более сложную задачу — определение летучих компонентов в твердом полимере или [c.123]

Другой областью применения тонкослойной гель-хроматографии является исследование белков сыворотки и других биологических жидкостей, откуда эти белки удается выделить лишь в очень небольших количествах. Для этих целей разработан хромато-электрофорез в тонком слое [92, 95]. Вслед за электрофоретическим разделением в одном направлении проводят хроматографию в перпендикулярном направлении. Эта техника работы также связана с применением иммунохимических тестов [96]. Исследование этим методом белков Бенс-Джонса в моче открывает перспективы для применения тонкослойной гель-хроматографии в медицинской диагностике [97]. [c.91]

Гораздо меньшие затраты на аппаратуру требуются для гель-хроматографии в тонком слое (см. гл. П). В этом случае в конце опыта вместо объема выхода необходимо измерить расстояние от стартовой линии до пятна вещества — длину пробега ]56]. При стандартизации результатов хроматографии на бумаге длину пробега относят к пути, пройденному растворителями (определяют величину / /) в тонкослойной гель-хроматографии длину пробега исследуемого вещества относят к пути, пройденному хорошо идентифицированным веществом [72]. Для белков (а только для них тонкослойная гель-хроматография и применялась до настоящего времени) удается таким образом определять молекулярный вес, имея в распоряжении всего несколько микрограммов вещества [56, 72, 73]. В качестве стандартов здесь также используются белки, приведенные в табл. 22. Из фиг..36 видно, что отношение длины пробега ряда белков к пути, пройденному цитохромом с, является линейной функцией от логарифма молекулярного веса. Как показывает опыт, эту калибровочную линию нельзя считать достаточно универсальной, поскольку ее наклон довольно сильно изменяется от одной серии экспериментов к другой. Результаты определения молекулярного веса становятся более точными, если соответствующие стандартные белки наносят на каждую пластинку. Это вполне возможно, так как на пластинку шириной 20 см свободно можно одновременно нанести по меньшей мере 10 образцов. Благодаря несложному оборудованию и небольшим затратам вещества точность определения молекулярного веса этим методом можно повысить. [c.167]

Движение подвижной фазы в тонкослойной хроматографии может быть ступенчатым, прерывным или непрерывным. Тонкослойную хроматографию можно комбинировать с тонкослойным электрофорезом, тонкослойным изоэлектрическим фокусированием, тонкослойной гель-фильтрацией и т. д. [c.6]

Из хроматографических методов рассмотрим адсорбционную элю-ентную и тонкослойную хроматографию и гель-проникающую хроматографию. В настоящее время элюентная адсорбционная хроматография используется для исследования РТФ олигомеров преимущественно первого и третьего типов с РФГ он, СООН, С=К, 8Н. Твердой фазой обычно служит активированный силикагель, в качестве элюента применяется один растворитель пара растворителей или многокомпонентные системы [c.215]

Для тонкослойной гель-фильтрации слой носителя готовят из самых мелких гранул геля. Из препаратов, имеющихся в продаже, применяются гели декстрана марки сефадекс сверхтонкий или полиакриламидные биогели марки —400 меш . В описанных в литературе методиках тонкослойной гель-хроматографии в основном [c.238]

Тонкослойная гель-хроматография [c.162]

Нам удалось осуществить оригинальный вариант осадочной хроматографии в гелях, наливая расплавленный гель на стеклянную пластинку размером 9 X 12 см, установленную горизонтально. При этом мы получали слой геля толщиной 1—2 мм (тонкослойная хроматография в гелях). После застывания геля в центр пластинки помещали каплю разделяемой смеси солей объемом 0,2 мл. Таким путем нами были проведены разделения смесей солей железа и меди — гидрофосфатом калия, кобальта и никеля — 8-оксихинолином, кобальта и никеля — диметилглиоксимом, ни- [c.256]

В качестве сорбентов для ТСХ наиболее часто применяют целлюлозу, кизельгур и силикагель. Некоторые полимерные носители для гель-хроматографии (сефадекс, или биогель Р), доступные в мелкодисперсном виде (>400 меш), могут быть использованы в тонкослойной гель-хроматографии для быстрого фракционирования таких высокомолекулярных соединений, как гликозаминогликаны [407]. Очевидно, что данный метод представляет собой частный случай СЭХ (разд. 7.2.5) и не будет рассматриваться в этом разделе. [c.64]

Зная эти величины и пропуская через гель несколько веществ с известной молекулярной массой, можно легко определить М исследуемого вещества с точностью %. При применении же тонкослойной гель-проникающей хроматографии точность определения молекулярной массы [c.110]

Для глобулярных белков и многих углеводов эта методика дает очень надежные результаты при использовании различных типов сефадекса и биогеля Р. Очень важно, что величину М можно определить на нефракционированных экстрактах клеток при условии, что анализируемый белок известен почти все другие методы требуют достаточно очищенных препаратов. Таким образом, для определения М достаточно пропустить через колонку несколько молекул с известной молекулярной массой, по полученным данным построить прямую линию, после чего М образца можно определить интерполяцией. Точность такого определения составляет около 10%. Некоторые более точные методики определения молекулярной массы будут обсуждаться в разделе, посвященном тонкослойной гель-проникающей хроматографии. [c.201]

Как отмечалось выше, достоинствами тонкослойной хроматографии являются быстрое разделение, высокая чувствительность, простое оборудование, легкое элюирование и способность заменять хроматографию на бумаге в качестве аналитического метода. Тонкослойная гель-проникающая хроматография соединяет в себе преимущества обоих методов. [c.205]

Тонкослойная гель-проникающая хроматография напоминает тонкослойную хроматографию тем, что здесь материал также наносится тонким слоем на стеклянную пластинку, образец вводится в виде точки, а подвижная фаза движется вдоль слоя. Однако есть и существенные различия [c.205]

В тонкослойной хроматографии сорбент высушивается перед нанесением образца. Гель же сушить нельзя, более того, он легко дегидратируется, поэтому в тонкослойной гель-проникаю-щей хроматографии образец наносится на влажный гель, уравновешенный требуемым растворителем. [c.205]

Тонкослойная хроматография осуществляется восходящим методом, тогда как в тонкослойной гель-проникающей хроматографии применяется нисходящий метод (рис. 8-7). Пластинку помещают в герметичную камеру, причем оба ее конца соединяют [c.205]

Схема проведения тонкослойной гель-проникающей хроматографии. [c.206]

Наибольшую ценность тонкослойная гель-проникающая хроматография представляет для определения молекулярной массы белков и пептидов. Для этого строят график, аналогичный показанному на рис. 8-19, где по оси у откладывают относительную подвижность. Метод позволяет получить весьма точные значения особенно в тех случаях, когда проводится несколько определений. [c.206]

Наиболее часто тонкослойную хроматографию используют для определения молекулярной массы белков и белковых соединений. Показано [193, 194], что при помощи тонкослойной гель-фильтрации можно проводить приблизительную оценку молекулярной массы белков, используя сефадексы 0-75 и 0-200. Объем элюирующего буферного раствора находится в линейной зависимости от логарифма молекулярной массы белка [195]. [c.117]

По использованию тонкослойной гель-проникающей хроматографии имеется сравнительно мало литературы, однако этот метод находит все более широкое применение. [c.207]

Тонкослойный вариант гель-фильтрации был предложен Детер-маном [6], а также Иоханссоном и Римо [11 ] и оказался весьма полезным для микроанализа и быстрого сравнительного анализа нескольких образцов исследуемого материала. Эндрюс [1 ], а позднее Моррис [12] применили тонкослойную гель-фильтрацию для определения молекулярного веса белков на основе установленной ими линейной зависимости между логарифмом молекулярного веса данного белка и расстоянием, пройденным им в слое данного носителя за определенный помежуток времени. В соответствии с этим можно ориентировочно определять молекулярные веса неизвестных белков, если одновременно проводить гель-фильтрацию стандартных белков известного молекулярного веса. Когда исследователь располагает достаточно чувствительными методами обнаружения белка в слое носителя, для определения молекулярного веса достаточно всего лишь нескольких микрограмм исследуемого материала. При определении молекулярного веса белков гель-фильтрацией в тонком слое следует иметь в виду, что подвижность данного белка при хроматографии в гель зависит не только от молекулярного веса, но и от формы его молекул. Поэтому определение молекулярного веса с помощью гель-хроматографии правомерно лишь в том случае, когда форма молекул исследуемого белка незначительно отличается от < рмы молекул стандартных белков, используемых для калибровки. [c.238]

Тонкослойная гель-проникающая хроматография [ТСГПХ), в основе которой лежит молекулярно-ситовой эффект. Здесь адсорбция полимера подавлена, а поровое пространство сорбента предварительно заполнено растворителем либо за счет капиллярной конденсации при экспонировании хроматографической пластинки в парах растворителя [3, 7], либо с помощью так называемой преэлюции [12] — пропускания растворителя по хроматографическому слою перед нанесением анализируемой пробы. [c.280]

Гель фильтрация в тонком слое применяется преимущественно при исследовании белков и гораздо реже в других областях биохимии. Гроссман и Вагнер [23] использовали тонкослойную гель-фильтрацию на сефадексе 0-25 для идентификации компонентов нитросинего тетразолийхлорида, применяющегося обычно для гистохимических целей. Стикланд [24] тонкослойной хроматографией на дауэксе-1 и сефадексе 0-25 удалял из образцов полисахариды и флуоресцирующие примеси, которые обычно интерферируют при фракционировании 5-рибонуклеотидов в тонком слое ОЕАЕ-целлюлозы. Возможность разделения низкомолекулярных соединений в тонком слое сефадекса 0-10 и 0-15 вообще почти не исследовалась. Зюдвиг и сотр. [68] показали, что разделение различных антибиотиков на сефадексе 0-15 зависит от их адсорбции на геле. Не сделано никаких попыток использовать в тонкослойной хроматографии менее гидрофильные гели, например сефадекс ЬН-20. [c.263]

Рис. 9.6. Камера для нисходящего элюирования методом тонкослойной гель-хроматографии (с разрешения фирмы РЬагтас1а).

На рис. 9.6 доказана выпускаемая фирмой Phaгma ia камера для нисходящего хроматографирования [2], предназначенная для тонкослойной гель-хроматографии. Для горизонтального элюирования ири различных, но точно устанавливаемых условиях предварительного насыщения слоя сорбента можно использовать К5-жамеры (рис. 9.7). Оптимальные условия разделения в этих камерах можно быстро установить. Другие типы камер, используемые для специальных методов, например проточного (непрерывного) элюирования, градиентного элюирования или круговой хроматографии, описаны в монографиях по ТСХ ([2Э, [c.95]

Наиболее эффективным методом исследования РТФ является хроматографическое разделение олигомеров по типам функциональности с пос. едующим измерением Мп и Мэ отдельных фракции и расчетом fл и /а, и функций РТФ. При этом выбор того или иного варианта хроматографического метода зависит от класса исследуемых олигомеров. В настоящее время для разделения олигомеров используют колоночную адсорбционную хроматографию, тонкослойную хроматографию и гель-проникающую хроматографию. Колоночая адсорбционная хроматография может проводиться в различных режимах элюирования, отличаться способами загрузки образца, подготовки насадки — силикагеля, анализа элюата и масштабностью фракционирования. Впервые колоночная хроматография на силикагеле с использованием диоксана в качестве элюента была применена для исследования молекулярпо-массового распределения олигомеров. [c.244]

Этот вариант ТСХ, широко применяемый в бумажной хроматографии, в сущности можно рассматривать как один из способов многократного или ступенчатого элюирования в двумерном пространстве. Однако двумерная хроматография более универсальна, чем оба эти метода. Первыми двумерное элюирование в ТСХ применили Кирхнер и сотр. [57]. Согласно разработанному ими методу, пробу наносят на угол квадратной хроматографической пластинки и элюируют обычным способом, после этого извлекают пластинку из камеры, дают растворителю испариться и помещают в другой растворитель таким образом, чтобы элюирование шло в направлении, перпендикулярном первому. Следует обратить внимание на то, чтобы линия пятен разделенных при первом элюировании веществ после поворота пластинки на 90° не оказалась ниже уровня второго элюента. Данный метод позволяет модифицировать адсорбент перед вторым элюированием. Изучая разделение мононенасыщенных жирных кислот, Бергельсон и сотр. [124] проводили первое элюирование на силикагеле, пропитанном додеканом, а перед вторым элюированием в перпендикулярном направлении дополнительно пропитывали слой адсорбента нитратом серебра. Иоханссон и Раймо [125] сочетали тонкослойную гель-фильтрацию на [c.151]

При тонкослойном варианте осадочной хроматографии в гелях нлас-гинки помещают во влажную камеру (эксикатор). Разделяемые катионы располагаются в виде кольцевых зон, каждая из которых содержит определенный катион. [c.257]

С сосудами с помоидью мостиков из фильтровальной бумаги (рис. 8-22). Жидкость движется через слой сорбснта, причем скорость тока определяется углом наклона пластинки (обычно 20°). Как и в тонкослойной хроматографии, пробег заканчивается до того, как интересующее вещество перейдет в нижний сосуд. Однако здесь применяется проток жидкости, т. е. в отличие от тонкослойной хроматографии в этом случае отсутствует фронт растворителя. Поэтому в тонкослойной гель-проникающей хроматографии не измеряют значения Rf, а положения пятен определяют относительно выбранного стандарта. [c.206]

Если тонкослойная хроматография используется в первую очередь для аминокислот, сахаров, олигосахаров, липидов, стероидов и других небольших молекул, тонкослойная гель-хроматография применяется для белков, пептидов, нуклеиновых кислот, нуклеотидов и других гидрофильных веществ с высокой молекулярной массой. [c.206]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология