Определение активности дезоксирибонуклеазы

Работа 101. Определение активности дезоксирибонуклеазы [c.325]

Объясните принцип метода определения активности дезоксирибонуклеазы. [c.326]

При наркотическом сне обмен веществ в головном мозгу не приостанавливается, а идет в определенном направлении активность некоторых ферментов (дезоксирибонуклеаза) повышается, содержание нуклеиновых кислот существенно не меняется и наряду с этим отмечается повышение содержания аденозинтрифосфорной кислоты с одновременным уменьшением утилизации углеводов. Процессы эти в основном направлены на восстановление работоспособности мозга. Эти данные A.B. Палладина можно рассматривать как первую серьезную попытку осветить сон как охранительное торможение с биохимической точки зрения. В противоположность этому при длительном возбуждении, доходящем до судорог, наблюдается уменьшение содержания аденозинтрифосфорной кислоты в ткани головного мозга. [c.408]

При наркотическом сне обмен веществ в головном мозгу не приостанавливается, а идет в определенном направлении активность некоторых ферментов (дезоксирибонуклеаза) повышается, содержание нуклеиновых кислот существенно не меняется и наряду с этим отмечается повышение содержания аденозинтрифосфорной кислоты с одновременным уменьшением утилизации углеводов. Процессы эти в основном направлены на восстановление работоспособности мозга. Эти данные А. В. Палладина можно рассматривать как [c.431]

Используя ДНК-содержащие микрогели и галлоцианин как краситель, можно обнаружить 0,1 нг дезоксирибонуклеазы [1482]. Применение для фракционирования дезоксирибонуклеаз полиакриламидного геля, содержащего Н-ДНК, улучшает результаты их количественного определения. После электрофореза гели разрезают и инкубируют в соответствующем буфере. Ферментативную активность определяют по количеству выходящих в среду радиоактивных фрагментов. Величина этой радиоактивности пропорциональна количеству фермента в пределах от 10 до 0,1 нг, а воспроизводимость определений составляет 5%. [c.295]

Следует отметить, что при пероральном применении протеиназ в ряде случаев общая протеолитическая активность крови заметно повышалась. Это дало основание ряду авторов постулировать возможность всасывания и попадания экзогенных ферментов или их активных фрагментов в кровяное русло. Эффект более выражен при введении фермента не в водном, а в масляном растворе. Аппликационное применение ферментов при лечении гнойных ран и трофических язв давно уже вошло в медицинскую практику. Чаще всего в этих случаях применяют протеолитические ферменты, такие, как трипсин, химотрипсин и др. Фермент гиалуронидазу из семенников крупного рогатого скота используют для рассасывания рубцов и лечения суставов. Для лечения гнойных легочных заболеваний применяют ингаляционные формы химотрипсина или трипсина дезоксирибонуклеазу — для лечения вирусных заболеваний глаз. Однако парантеральное применение ферментов по указанным выше причинам в определенной степени затруднено. Тем не менее и в этом случае некоторые ферменты с успехом используются для лечения ряда заболеваний. Достаточно эффективно применение стрептодеказы — фермента, гидролизующего тромбы в кровеносных сосудах. При многих заболеваниях сосудов, таких, как артериальный тромбоз и глубокий тромбофлебит, с успехом применяют протеолитические ферменты различного происхождения. [c.86]

Научные работы относятся к биохимии и молекулярной биологии. Выполнил основополагающие исследования по выделению первого регуляторного белка, управляющего активностью лактозного гена (оперена), по изучению механизма специфического взаимодействия белков и ДНК, по установлению первичной структуры ряда ДНК, а также по клонированию гена— предшественника инсулина — и синтезу этого белка в бактериальной клетке. Совместно со своим сотрудником А. Мэксемом расщепил (1973) ДНК кишечной палочки посредством фермента — дезоксирибонуклеазы и выделил определенный участок (лак —оператор), который оказался двухцепочечным фрагментом, состоящим из 25 комплементарных пар оснований. Совместно с тем же сотрудником предложил (1977) один из удачных методов расшифровки первичной структуры ДНК, базирующийся на принципе локализации оснований по величине соответствующих фрагментов ДНК. [c.141]

Окончательное установление первичной структуры дезоксинуклеиновых кислот связано с рядом проблем, еще труднее разрешимых, чем в случае рибонуклеиновых кислот, и достижений в этой области пока еще мало. Тем не менее достигнут некоторый успех в определении последовательности оснований в одиночной цепи олигодезоксинуклеотидов. Такие продукты распада легко получаются в результате обработки дезоксирибонуклеиновых кислот дезоксирибонуклеазами. Панкреатическая дезоксирибонуклеаза [350] (дезоксирибонуклеаза I) активна в нейтральном растворе, требует присутствия магния или некоторых других двухвалентных катионов и имеет минимальный молекулярный вес 61566 [351]. Этот фермент катализирует гидролиз ДНК до сложной смеси, из которой с помощью хроматографии на бумаге, электрофореза [352] и ионообменных методов [353] были выделены дезоксинуклеозид-5 -фосфаты ( 1 %), ряд динуклеотидов (- 16%), тринуклеотиды и более высокомолекулярные олигодезоксинуклеотиды с 5 -фосфатной группой на конце. Хотя специфичность действия дезоксирибонуклеазы I не установлена полностью, ясно, что расщепление происходит по связи —3 - О — Р. Изучение динуклеотидов, содержащих как пуриновые, так и пиримидиновые основания, указало на то, что такие соединения являются почти исключительно 5 ф—Пир—З ф—5 Пур, изомерная же последовательность 5 ф—Пур—З ф—5 Пир фактически отсутствует. Предположение, что ферментом атакуются преиму- [c.421]

Хороших способов препаративного разделения смесей различных молекул ДНК и РНК пока не существует. Да и получать эти вещества в нативном состоянии, не повреждая их, научились лишь в самые последние годы. При выделении нуклеиновых кислот имеется целый ряд технических препятствий. Самое бо.льшое препятствие — это ферменты рибонуклеаза и дезоксирибонуклеаза, расщепляющие их с огромной скоростью и трудно поддающиеся инактивации. Второе осложнение — чрезвычайная чувствительность макромолекул этих полимеров к гидродинамическим возмущениям. Как указывалось вьппе, достаточно иногда струи, возникающей при быстром выдувании раствора ДНК из пипетки, чтобы вызвать заметную деполимеризацию. Поэтому некоторые из применявшихся до сих пор методов разделения нуклеиновых кислот, дававших пестрые и неясные результаты, были скорее методами разделения частично фрагментированных молекул друг от друга. Это относится, например, к хроматографии препаратов ДНК на колонках с целлюлозным сорбентом EGTEOLA или с глиноземом, покрытым гистоном. Тот факт, что фракционирование ДНК с трансформирующей активностью дало ряд активных фракций, показывает, что здесь имело место не разделение различных молекул ДНК (нет сомнений, что трансформирующая активность по определенному локусу присуща одному типу молекул ДНК), а разделение фрагментов молекул, несущих локус с данной трансформирующей активностью (этот локус может занимать всего 0,1 длины молекулы). То обстоятельство, что при хроматографии осколки разного молекулярного веса будут основательно делиться, не вызывает удивления. Однако это не решает методической задачи фракционирования ДНК на химически индивидуальные вещества. [c.257]

Определение креатинкиназной активности используется при диагностике некоторых заболеваний. Интересно, что уже в первые часы после инфаркта миокарда в крови резко нарастает содержание креатинкиназы Рибонуклеаза. Различают два основных вида нуклеаз эндонуклеазы и экзонуклеазы. Экзонуклеазы по своему действию относятся к классу гидролаз. Они катализируют реакцию последовательного гидролитического отщепления нуклеотидов от полинуклеотидной цени путем разрыва фосфодиэфирной связи. Эндонуклеазы катализируют расщепление фосфодиэфирных связей внутри молекулы нуклеиновой кислоты, проявляя определенную специфичность к одному из двух типов нуклеиновых кислот в соответствии с этим различают рибонуклеазы и дезоксирибонуклеазы, рассматриваемые в разделе Гидролазы . [c.296]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология