Препаративный электрофорез в полиакриламидном геле

Препаративный ИТФ в полиакриламидном геле можно выполнять на приборе для препаративного электрофореза в полиакриламидном геле. В связи со значительным увеличением объема полиакриламидного геля во время прохождения зон, поверхность геля становится выпуклой, если гель прилипает к стенкам прибора. По этой причине прибор, изготовленный из плексигласа, к которому полиакриламидный гель не прилипает, лучше, чем стеклянный прибор. Экспериментальные условия следующие площадь сечения геля 5,3 см , длина трубки 20 см, толщина стенки 0,2 см, скорость элюирования 28 мл/ч, стабилизованный ток 10 мА, температура охлаждающей воды 10 °С. [c.348]

Колонки для препаративного электрофореза в полиакриламидном геле используют также и для электрофореза в агаровом геле [1390, 1439]. [c.66]

Препаративный электрофорез в полиакриламидном геле [c.113]

ОСНОВНЫЕ ПРИНЦИПЫ ПРЕПАРАТИВНОГО ЭЛЕКТРОФОРЕЗА В ПОЛИАКРИЛАМИДНОМ ГЕЛЕ [c.113]

Температура является важным фактором при препаративном электрофорезе в полиакриламидном геле. Если охлаждение недостаточно, то участки зон, расположенные в более нагретой области геля, будут двигаться быстрее, чем находящие- [c.115]

Приготовление пробы. Обычно препаративный электрофорез в полиакриламидном геле не используют в качестве одного из начальных этапов в очистке белков и нуклеиновых кислот. Для предварительного грубого фракционирования компонентов омесей применяют методы хроматографии, высаливания или осаждения. Чтобы провести электрофоретическое разделение, пробу необходимо сконцентрировать до 5 мл для однородной системы и до 10—20 мл для неоднородной. От избытка солей можно избавиться при помощи диализа или гель-фильтрации. Концентрация солей в исследуемом растворе должна быть такой же, как в буфере концентрирующего геля. Если же этот гель не попользуется, то пробу диализуют против буфера разделяющего геля, разведенного в 5 раз. Медленное вхождение пробы в гель во время электрофореза свидетельствует о слишком высокой концентрации солей. Любой осадок, присутствующий в пробе, следует удалять центрифугированием или фильтрованием через миллипоровый фильтр, так как он может закупорить разделяющий гель. [c.117]

Экстрагирование сегментов геля. Наиболее простой метод препаративного электрофореза в полиакриламидном геле — это использование большого числа таких же столбиков геля, какие применяются в аналитических целях. Образец наносят на эти столбики и проводят электрофорез, после чего один из них окрашивают или проявляют каким-либо иным способом. Зону, [c.117]

Гель-фильтрация особенно широко используется для удаления глютенинов, альбуминов и глобулинов, которые можно извлекать одновременно с глиадинами. Однако 7-глиадин очищали [94] гель-фильтрацией в 70 %-ном этаноле и 10 мМ трисе на носителе сефакриле G 200 в сочетании с препаративным электрофорезом в полиакриламидном геле с кислым pH. [c.183]

Результаты, получеиные из анализа графика Фергюсона, позволяют выбрать наиболее перспективный метод для разделения компонентов данной смеси. Если мы имеем дело с изомерами, имеющими одинаковые размеры, то следует применягь. методы разделения по заряду, например электрофорез или понообмениую хроматографию. Если же молекулы различаются-по размеру, но не по заряду, то целесообразно использовать гель-фильтрацию или препаративный электрофорез в полиакриламидном геле, основанные на эффекте молекулярного сита. Метод анализа соотношений размер — заряд у белков был распространен также и на случаи связывания ими лигандов [539]. [c.85]

Буфер, используемый при электрофорезе, должен иметь как можно более низкую ионную силу (0,005—0,02), что позволяет применять высокие градиенты напряжения вдоль геля при минимальном образовании тепла. Желательно, чтобы у элюирующего буфера иошая сила была выше, чем у буфера в геле, так как это помогает до некоторой степени уменьшить разведение выходящих из геля фракций. Буферные системы для препаративного электрофореза в полиакриламидном геле подробно изучены рядом авторов [322, 648]. [c.114]

Концентрирующий гель можно с успехом использовать в препаративной колонке (для которой иногда требуются большие количества геля), чтобы устранить нежелательные эффекты, вызванные наличием солей и отсутствием преэлектрофоре-за [1184]. Концентрация этого геля должна быть такой, чтобы белки до. вхождения в разделяющий гель подверглись предварительному фракционированию в соответствии с размерами их молекул. Подобным способом можно предотвратить закупоривание разделяющего геля концентрированным раствором белков. Если же исследуемая проба очень разбавлена, то рекомендуется применить более разведенный концентрирующий гель,, не обладающий свойствами молекулярного сита. Это даст возможность сконцентрировать белковые компоненты ири помощи изотахофореза. Таиим образом, концентрирующий гель играет довольно существенную роль при препаративном электрофорезе в полиакриламидном геле. [c.115]

Непрерывная электрофоретическая элюция. Одним из наиболее важных узлов в приборах для препаративного электрофореза в полиакриламидном геле такого типа является элюционная камера, образующаяся между нижней поверхностью геля и стенками нижней части прибора. При иопользова нии подобных приборов возникают следующие трудности [c.119]

Рис, 45. Схематическое изображение прибора типа МК II фирмы Shandon для препаративного электрофореза в полиакриламидном геле. [c.119]

Ait et al. (1977) из фильтрата культуральной жидкости анаэробных бактерий lostridium thermo ellum посредством препаративного электрофореза в полиакриламидном геле получен частично очищенный целлюлазный комплекс. В аналитическом диск-электрофорезе целлюлаза характеризуется одной белковой полосой с ММ 125 000+ 10000. Однако при электрофорезе в присутствии додецилсульфата целлюлаза диссоциирует по меньшей мере на пять белковых компонентов. Авторы предположили, что целлюлаза существует в виде мультиферментного комплекса. [c.186]

Метод основан на способности кининогена как белка с низкой изоэлектрической точкой, pHi 3,15—3,5 (Т. Л. Егорова, Т. С. Пасхина, 1967), избирательно связываться с ДЭАЭ-сефадексом А-50 при pH 7,2 и высокой ионной силе. Отделение кининогена от других кислых белков осуществляли путем адсорбционной хроматографии на гидроксилапатите, а затем гельфильтрации на сефадексе G-200 максимальная очистка достигнута применением в качестве последнего этапа препаративного электрофореза в полиакриламидном геле. [c.172]

Рис. 25. Прибор для препаративного электрофореза в полиакриламидном геле. Шандон , Англия.